褪黑素通过沉默信息调节因子1减轻线粒体氧化应激对脑缺血-再灌注小鼠的作用

目的探讨褪黑素通过沉默信息调节因子1(SIRT1)减轻线粒体氧化应激机制对脑缺血-再灌注(IR)小鼠的作用。方法通过线栓法建立小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(MCAO)IR模型,对190只小鼠经腹腔注射褪黑素和侧脑室注射SIRT1抑制剂EX527,剔除死亡小鼠30只,按随机数字表法分为IR组、褪黑素组、褪黑素+EX527组、EX527组各40只,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定脑梗死体积、干湿比重法测定脑水肿并进行神经功能缺损评分。通过Western blot检测线粒体和胞质SIRT1、Ac-P53、Ac-核因子κB(Ac-NF-κB)、BCL2、BAX蛋白以及细胞色素C蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析。结果 (1)4组间脑梗死体积、神经功能障碍评分和脑水肿的差异均有统计学意义(F值分别为16.452、23.622和18.786,均P0.05)。4组SITR1、Ac-P53、Ac-NF-κB、BCL2、BAX表达差异均有统计学意义(F值分别为2 348.158、1 434.841、7 042.563、14 627.128和691.475,均P0.05)。4组小鼠线粒体膜电位、线粒体活性氧和复合体Ⅰ活性差异有统计学意义(F值分别为28.454、33.728和29.716,均P0.05)。(2)与IR组相比,褪黑素组的脑梗死体积缩小(32±5)mm~3比(57±5)mm~3,P0.05);神经功能障碍评分降低(2.4±0.3比3.5±0.3,P0.05);脑水肿减轻(80.2±0.9)%比(83.9±1.2)%,P0.05);SIRT1和抗凋亡蛋白BCL2的表达增加(P0.05);促凋亡蛋白BAX和Ac-P53、Ac-NF-κB的表达减少(P0.05);线粒体膜电位、线粒体复合体Ⅰ活性和细胞色素C水平提高(P0.05);胞质活性氧产物和细胞色素C水平降低(P0.05)。(3)与褪黑素组相比,褪黑素+EX527组的脑梗死体积增大[(42±5)mm~3比(32±5)mm~3,P0.05];神经功能障碍评分增高(3.2±0.3比2.4±0.3,P0.05);脑水肿加重[(83.4±0.8)%比(80.2±0.9)%,P0.05];SIRT1和抗凋亡蛋白BCL2的表达减少(P0.05);促凋亡蛋白BAX和Ac-P53、Ac-NF-κB的表达增加(P0.05);线粒体膜电位、线粒体复合体Ⅰ活性和细胞色素C水平降低(P0.05);胞质活性氧产物和胞质细胞色素C水平提高(P0.05)。结论在缺血性卒中模型小鼠中,褪黑素通过激活SIRT1信号通路,减轻线粒体氧化应激损伤和细胞死亡,从而发挥脑保护作用。     

早期腰大池引流术与腰椎穿刺脑脊液置换术治疗蛛网膜下腔出血疗效研究

目的 探讨早期腰大池引流术与腰椎穿刺脑脊液置换治疗蛛网膜下腔出血的临床疗效.方法 选取自2016年8月至2018年8月就诊于北部战区总医院的蛛网膜下腔出血患者60例,采用随机数字表法分为腰椎穿刺组(n=30)与腰大池引流组(n=30).腰椎穿刺组患者于出血后1 d内接受腰椎穿刺脑脊液置换术治疗,腰大池引流组患者于出血后1 d内接受腰大池引流术治疗.记录并比较两组患者术后1 d、1周、2周、1个月的大脑中动脉平均流速(MCAVm)、Lingdegaard指数.记录并比较两组患者头痛缓解时间、脑膜刺激征消失时间、脑脊液廓清时间等,术后并发症发生情况.结果 术后1d、1个月,两组患者大脑中动脉平均流速、Lingdegaard指数比较,差异无统计学意义(P>0.05).术后1周,两组患者大脑中动脉平均流速、Lingdegaard指数高于术后1 d,差异有统计学意义(P<0.05).术后1周、2周、1个月,两组患者大脑中动脉平均流速、Lingdegaard指数均逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05).术后1周、2周,腰大池引流组患者大脑中动脉平均流速、Lingdegaard指数均低于腰椎穿刺组,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者头痛缓解时间、脑膜刺激征消失时间比较,差异无统计学意义(P>0.05).腰大池引流组患者脑脊液廓清时间显著短于腰椎穿刺组,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者术后并发症总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 与腰椎穿刺脑脊液置换术相比,早期腰大池引流术能更快降低大脑中动脉平均流速、Lingdegaard指数水平,有助于缩短脑脊液廓清时间,有效防治蛛网膜下腔出血患者脑血管痉挛发生.     

褪黑素通过上调紧密连接蛋白减轻蛛网膜下腔出血大鼠脑水肿

目的:研究褪黑素对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑水肿的影响及分子机制。方法:雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、SAH组(SAH)和褪黑素预处理组(SAH+Mel)。利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,SAH+Mel组大鼠在模型制备前1周通过皮下注射给予褪黑素预处理。利用湿干比方法检测大鼠脑含水量,利用伊文思蓝渗透实验检测血脑屏障的完整性,利用Western Blot检测大鼠皮层中闭合小环蛋白-1(ZO-1)、咬合蛋白(occludin)和闭合蛋白-5(claudin-5)的表达。结果:和假手术组大鼠相比,SAH术后48 h大鼠脑含水量增加明显(P<0.05),脑组织中伊文思蓝含量增加(P<0.05),皮层中ZO-1、occludin和claudin-5的表达下降。然而,经褪黑素预处理后,SAH大鼠脑含水量下降(P<0.05),脑组织中伊文思蓝含量减少(P<0.05),ZO-1、occludin和claudin-5的表达上调,(P<0.05)。结论:褪黑素通过上调紧密连接蛋白表达减轻SAH大鼠脑水肿。     

TLR4-NLRP3介导蛛网膜下腔出血早期大鼠神经细胞焦亡

目的:研究蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期神经细胞焦亡的分子机制.方法:雄性SD大鼠分为假手术组和SAH组.利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,利用Western Blot检测大鼠皮层toll样受体4(TLR4)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)和活化型gasdermin D(GSDMD-p30)的表达,利用商品...     

褪黑素通过抑制NLRP3活化减轻蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤

目的:研究外源性褪黑素对蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期脑损伤(EBI)的影响及分子机制.方法:60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、SAH组和褪黑素治疗组(SAH+ Melatonin),用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,腹腔注射方法给予褪黑素进行治疗.通过检测大鼠脑的含水量评估脑水肿程度,利用r...     

褪黑素抑制早期蛛网膜下腔出血大鼠皮层神经细胞铁死亡

目的:研究褪黑素(Mel)对蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期皮层神经细胞铁死亡的影响及分子机制.方法:利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,通过腹腔注射法给予褪黑素治疗.利用商品化试剂盒检测脑脊液中铁离子含量和脑组中铁含量,利用Western Blot检测大鼠皮层中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达,利用2',...     

睫状神经营养因子对大鼠脑缺血后髓鞘再生的影响

目的:研究睫状神经营养因子(CTNF)对脑缺血大鼠胼胝体髓鞘再生的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、双侧颈总动脉结扎(2-VO)组和CTNF治疗组(CTNF)。利用2-VO法制备大鼠脑缺血损伤模型,在术后24 h内用0. 4μg/kg的CTNF或生理盐水分别给予CTNF治疗组、2-VO组和Sham组大鼠尾静脉注射。给药7 d后通过神经缺损功能评分(NSS)和转棒实验(Rota-Rod)检测各组大鼠神经功能,电镜观察胼胝体内髓鞘超微结构的变化,通过免疫荧光染色观察少突胶质细胞转录因子2(Olig-2)的表达,Western Blot检测髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达。结果:与Sham组相比,2-VO组大鼠神经功能显著受损(P 0. 05);电镜下可观察到大鼠胼胝体髓鞘变薄、完整性差;胼胝体部位Olig-2表达显著减少; MBP表达显著下降(P 0. 05)。经CTNF治疗后7 d的大鼠出现神经功能明显改善(P 0. 05),胼胝体髓鞘结构明显恢复,Olig-2表达明显增加,MBP表达明显增加(P 0. 05)。结论:CTNF处理能够改善脑缺血大鼠神经功能,促进髓鞘再生。     

褪黑素协同丙戊酸钠减轻糖氧剥夺诱导的小鼠神经元损伤

目的:研究褪黑素(Mel)和丙戊酸(VPA)处理对糖氧剥夺(OGD)诱导的神经元损伤的保护作用及分子机制。方法:利用小鼠海马神经元来源的细胞系HT22细胞制备OGD细胞模型,分别给予不同浓度的Mel和VPA处理,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒商品化试剂盒检测细胞培养上清中LDH的活性,Western Blot检测各组细胞中NF-κB/RelA(Lys310)乙酰化水平。结果:Mel在10 mmol/L浓度下,与VPA(10 mmol/L)联合使用时,能对神经产生保护作用。Mel和VPA联合处理降低了OGD暴露HT22细胞NF-κB/RelA(Lys310)乙酰化。结论:Mel和VPA通过降低NF-κB/RelA(Lys310)乙酰化发挥神经保护作用。