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目的探讨Wnt5a在卡介苗(BCG)感染肺泡上皮细胞后对细胞自噬的调控作用。方法用BCG感染小鼠肺泡上皮细胞TC-1,分别收集感染不同时间(MOI=10)、不同浓度rhWnt5a及IWP_(2)处理的TC-1细胞,利用Western blot检测Wnt5a及自噬相关蛋白LC3蛋白表达水平,确定TC-1细胞自噬的最佳时间以及rhWnt5a和IWP_(2)最适浓度;利用rhWnt5a或IWP_(2)与BCG单独或共处理TC-1,其中rhWnt5a处理试验设对照组(Control)、BCG组、rhWnt5a组和rhWnt5a+BCG组,IWP_(2)处理试验设对照组(Control)、BCG组、IWP_(2)组和IWP_(2)+BCG组,Western blot检测细胞Wnt5a、LC3和P62蛋白表达水平,免疫荧光染色检测LC3B绿色斑点分布,以确定各处理组细胞自噬情况。结果 Western blot检测在4 h时BCG诱导的TC-1细胞Wnt5a及LC3II表达水平均高于其他时间组,rhWnt5a上样为10 ng/mL时Wnt5a表达水平较Control组显著增加(P<0.01),IWP_(2)上样为20μmol/L时Wnt5a表达水平较Control组显著降低(P<0.01),在不同处理组中,rhWnt5a+BCG组较BCG组Wnt5a、LC3II及P62的表达均显著升高(均P<0.01),IWP_(2)+BCG组较BCG组处理Wnt5a、LC3II及P62的表达均显著降低(均P<0.01),且较Control组均升高(均P<0.05)。免疫荧光染色显示,BCG感染后TC-1细胞中的LC3B斑点数量与荧光强度较Control组均显著增加,BCG与rhWnt5a共处理后细胞中LC3B斑点数量与荧光强度较BCG组均显著增多,BCG与IWP_(2)共处理后LC3B斑点数量与荧光强度较BCG组均显著减少(均P<0.05)。结论 Wnt5a对BCG诱导的TC-1细胞自噬具有调控作用。rhWnt5a重组蛋白能促进BCG诱导的TC-1细胞自噬,IWP_(2)对BCG诱导的TC-1细胞自噬有抑制作用。 相似文献
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目的 探究无翅基因7a(Wnt7a)对牛结核分枝杆菌卡介苗(BCG)感染的肺泡上皮细胞自噬水平的调控作用。方法使用干扰Wnt7a慢病毒及BCG单独作用或共处理TC-1小鼠肺泡上皮细胞，设置小干涉RNA对照(si-NC)组、 si-NC联合BCG组、 Wnt7a小干涉RNA(si-Wnt7a)组和si-Wnt7a联合BCG组。Western blot法检测Wnt7a、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62及自噬相关基因5(ATG5)蛋白表达水平，利用免疫荧光细胞化学染色检测LC3的分布以确定细胞自噬情况。结果 与si-NC组相比，BCG感染的TC-1细胞Wnt7a、 LC3和ATG5蛋白表达均升高、 LC3绿色荧光斑点亮度与分布显著增加；与BCG组感染的TC-1细胞相比，si-Wnt7a联合BCG组Wnt7a、 LC3、 P62及ATG5蛋白表达均显著降低，LC3绿色荧光斑点亮度与分布显著降低。结论 敲低Wnt7a抑制BCG诱导的肺泡上皮细胞自噬。 相似文献
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目的 揭示LXR-ABCA1/ABCG1通路对BCG感染后巨噬细胞凋亡和炎性反应的调控作用。方法 采用T0901317预处理RAW264.7巨噬细胞2 h和BCG感染24 h,设置4个实验组：对照组、T0901317组、BCG感染组和T0901317+BCG感染组。采用Western blot方法检测凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase8、cleaved-Caspase9和TLR信号通路相关蛋白TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6、p-NF-κB p65、IRF3、TBK1的表达,采用ELISA方法检测细胞培养上清中促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。结果 与对照组比较,BCG感染组凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase8、cleaved-Caspase9及依赖MyD88途径蛋白TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6、p-NF-κBp65的表达均上调（P<0.01）,促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平上升（P<0.01）;与BCG感染组相比,T09013... 相似文献
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