牛IL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性

目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18,BoIL-18)成熟蛋白基因,并鉴定其生物学活性。方法:设计一对特异性引物,将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,构建重组质粒repFastBac HTb-18,转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(Bacmid-BoIL18)。在Cellfectin作用下,将Bacmid-BoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒,然后将重组杆状病毒感染sf9,感染后不同时间收获sf9细胞,进行SDS-PAGE电泳,分析表达情况;用BoIL-18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析;将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验,对健康牛脾进行IFN-γ诱生试验,初步分析表达产物的生物学活性。结果:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,经薄层凝胶扫描分析证实,表达量占总蛋白的21.3%;Western blot分析证明,在相对分子质量(Mr)约为26 000处有一条特异性条带。生物学活性分析表明,纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖,促进IFN-γ的产生。结论:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,表达产物具有良好的生物学活性。     

介绍一种心肌灌注装置

介绍一种心肌灌注装置ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａＤｅｖｉｃｅｆｏｒＭｙｏｃａｒｄｉａｌＰｅｒｆｕｓｉｏｎ郑玉姝袁桂芬①ＺｈｅｎｇＹｕｚｈｕ，ＹｕａｎＧｕｉｆｅｎ（ＴｈｅＦｉｒｓｔＣｌｉｎｉｃａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅ...     

静脉注射H_1及H_2受体阻断剂对抗鱼精蛋白副反应的效果观察

将３０例心脏病人随机分为对照组（Ａ组）及预防用药组（Ｂ组），观察Ｈ１、Ｈ２受体阻断剂（苯海拉明、西咪替丁）对抗鱼精蛋白副反应（血压下降）的效果。结果表明：Ｂ组血液动力学变化明显小于Ａ组（Ｐ＜０．０１），提示Ｈ１及Ｈ２受体阻断剂能拮抗鱼精蛋白的副反应。     

猪流感诊断技术研究进展

猪流感（swine influenza,S1）是由猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）引起的猪的一种急性、热性和高度传染性呼吸道疾病,不仅引起病猪高热、食欲减退、咳嗽、流产及出栏时间延迟等,而且极易引起猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪伪狂犬病病毒和传染性胸膜肺炎放线杆菌等病原的继发或混合感染,对养猪业危害极大。更重要的是,猪呼吸道上皮细胞表面同时存在人流感病毒受体SA-α-2,     

A型流感病毒PB1-F2研究进展

在全面搜索病毒感染细胞表面主要组织相容性复合体I类分子呈递的A型流感病毒（influenza A virus,IAV）抗原时,Chen等发现一个细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）肽不与IAV任一个鉴定的已知标准开放读码框相符。在IAV基因组内进一步细查这一能够激活CTL的新抗原肽,发现该肽对应于PBI基因内ARF（alternative reading frame）编码80个氨基酸的62—70位残基。     

传染性喉气管炎病毒糖蛋白gC在原核系统中的高效表达

目的　分析传染性喉气管炎病毒 (ILTV)gC蛋白的免疫活性。方法　设计引物扩增编码gC蛋白主要免疫原性区域cDNA ,将其克隆到原核表达载体pGEX_6P_1的EcoRⅠ和SalⅠ位点之间 ,构建重组质粒r_pGEX_gC。将r_pGEX_gC转化到大肠埃希菌BL2 1(DE3)株中。结果　经IPTG诱导后 ,GST gC融合蛋白在重组菌株获得表达 ,表达产物相对分子质量为 6 5× 10 3,与预计相对分子质量大小一致。融合蛋白的表达含量占整个菌体含量的 2 7 8%。West ern_blot结果表明gC蛋白具有良好的反应活性。结论　本研究为传染性喉气管炎诊断抗原研制奠定基础。     

microRNA及其在癌症和病毒感染治疗中的应用潜力

microRNA(miRNA)是内源性的通过序列特异性翻译抑制或mRNA裂解来调控基因表达的一个非蛋白质编码的大约21~25个核苷酸的小RNA家族,参与多种基本生物学过程,如细胞增殖、发育、分化、凋亡、病毒感染和癌症等。miRNA的特异性和效力显示出它们有成为癌症和病毒感染治疗剂的应用潜力。     

microRNA及其在癌症和病毒感染治疗中的应用潜力

microRNA(miRNA)是内源性的通过序列特异性翻译抑制或mRNA裂解来调控基因表达的一个非蛋白质编码的大约21～25个核苷酸的小RNA家族,参与多种基本生物学过程,如细胞增殖、发育、分化、凋亡、病毒感染和癌症等。miRNA的特异性和效力显示出它们有成为癌症和病毒感染治疗剂的应用潜力。     

鸡IL-2基因的扩增、表达及生物学活性鉴定

目的:扩增鸡IL2基因,并在大肠杆菌中表达及活性鉴定。方法:从ConA激活的AA肉鸡脾淋巴细胞中提取mRNA,以RTPCR法扩增鸡IL2cDNA,将其克隆到原核表达载体pGEX6P1中,构建重组质粒pGEXIL2。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。并用淋巴细胞增殖试验及Westernblot检测表达产物的生物学活性。结果:以重组质粒转化大肠杆菌经IPTG诱导后,经SDSPAGE后薄层扫描分析证实,融合表达产物GSTIL2表达量占表达菌菌体总蛋白的30.8%。Westernblot分析表明,在相对分子质量(Mr)为42000处有一条特异性的带。经淋巴细胞增殖试验证实,该表达产物可明显增强淋巴细胞增殖。结论:鸡IL2基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物具有良好的生物学活性。