抗OmpW单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:制备抗副溶血弧菌OmpW的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法:利用生物信息学方法分析多种病原弧菌的OmpW氨基酸序列,原核表达并纯化制备r-OmpW.以r-OmpW作为免疫抗原制备鼠mAb,以五种病原弧菌为筛选抗原.采用Western blot、流式细胞术(FCM)、间接ELISA法鉴定mAb的特性.结果:生物信息学分析表明OmpW是弧菌内高度保守的外膜蛋白.成功筛选到3株杂交瘤细胞株,其中,杂交瘤细胞株S5C10分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG3,腹水mAb效价达4.6×104.该mAb同时识别副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌和创伤弧菌,而与荧光假单胞菌、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌及大肠杆菌无明显的交叉反应.结论:制备的mAb可特异性识别上述5种病原弧菌,为进一步建立广谱弧菌的免疫学检测方法提供了工具.     

氨基酸改性熊果酸衍生物的合成及对胃癌细胞的抑制作用

 目的 合成具有伯氨基的氨基酸改性熊果酸衍生物并研究其对胃癌细胞的体外抑制活性及作用机制。方法 以乙二胺为连接臂,采用多种氨基酸对熊果酸C28位进行接合修饰,合成一系列氨基酸改性熊果酸衍生物。MTT法考察对胃癌细胞株BGC-823、AGS的体外抑制活性,同时采用Annexin V/PI双标记染色及细胞周期检测探讨其抗癌机制。结果 大部分衍生物对BGC-823、AGS的抑制活性强于熊果酸;Annexin V/PI双染色结果表明化合物3和4可诱导BGC-823发生凋亡;细胞周期检测表明衍生物3~6可诱导AGS发生凋亡,凋亡率达44.69%~92.64%。结论 带有伯氨基的氨基酸改性熊果酸衍生物具有良好的抗癌活性,其作用机制为诱导细胞凋亡;开发具有伯氨基的衍生物是提高熊果酸抗癌活性的可行途径之一。
     

Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用

研究红曲代谢产物Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用。用MTT法评价Monascin对A375增殖的抑制作用;PI流式单染检测细胞周期分布;透射电镜观察细胞超微结构变化;以黑色素含量、酪氨酸酶活力和体外迁移能力为指标检验Monascin对A375诱导分化作用。Monascin对A375具有一定的增殖抑制作用,并能将其阻滞在G0/G1期;透射电镜观察到A375核质比变小且细胞器增多;黑色素含量增多,相对酪氨酸酶活力提高,体外迁移能力下降。试验结果表明,Monascin对A375具有较显著的诱导分化作用。