脆性X智力低下蛋白与mRNAs的相互作用

脆性X智力低下蛋白(fragile mental retardation protein,FMRP)的表达缺失引起一种遗传性智力低下疾病——脆性X综合征。此蛋白是一种RNA结合蛋白,与mRNAs转运及多聚核糖体和突触的功能有关。因此,要了解脆性X综合征的发病机理,关键在于找到与FMRP蛋白结合的mRNAs,以及FMRP与这些靶mRNAs的结合对它们的代谢和翻译有何影响。     

SARS冠状病毒PUMC_2株N蛋白cDNA的克隆、表达和纯化

目的原核表达并纯化SARS冠状病毒N蛋白。方法用RT-PCR技术克隆SARS冠状病毒PUMC2株N蛋白全长cDNA,cDNA经序列分析鉴定后,克隆到pET32a表达载体,转化E.coliBL21进行原核表达并纯化出SARS冠状病毒N蛋白。结果实现了SARS冠状病毒N蛋白的表达及纯化。结论用基因重组方法表达的SARS冠状病毒N蛋白可为其进一步功能研究提供条件。     

SARS冠状病毒PUMC_2株全基因组cDNA分段克隆

目的分段克隆SARS冠状病毒PUMC2株的全基因组cDNA。方法以SARS冠状病毒PUMC2株基因组RNA为模板,用RT-PCR扩增cDNA片段,PCR产物经纯化后,连接入pGEM-T载体中,进行序列测定。结果获得了SARS冠状病毒PUMC2株基因组全长cDNA的分段克隆。结论SARS冠状病毒PUMC2株基因组全长cDNA分段克隆的获得,为SARS冠状病毒基因功能的研究和全长有感染性cDNA的克隆奠定了基础。     

脆性X智力低下蛋白的克隆表达与纯化

目的 探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件.方法 用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b( )-FMR1,并将其转入原核表达菌株E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2 吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与已知的RNA片段进行结合反应.结果 成功构建了重组表达质粒pET22b( )-FMR1,在E.coli BL21(DE)中表达出相对分子质量约79 000的蛋白;该蛋白为FMRP,且可与特定RNA相互作用.结论 在原核系统中表达得到了纯度和活性都较为理想的FMRP蛋白,为相关功能性研究奠定了基础.     

酵母三杂交系统:一种在真核细胞水平研究RNA-蛋白质相互作用的有效方法

RNA-蛋白质之间的相互作用是真核细胞RNA在细胞内执行其功能的基础,这种相互作用在基因表达的多个水平上均发挥着重要的调控作用。要研究RNA对基因表达的调控就必须对RNA-蛋白质之间相互作用的方式进行研究。本文介绍的酵母三杂交系统(yeast three-hybrid system)是一种近年来在酵母双杂交系统的基础上发展而来的,可用于鉴定先前未知的,在自然界中存在且具有生物学意义的RNA-蛋白质相互作用的实验方法。该方法提供了一个在真核细胞内研究RNA-蛋白质相互作用的技术平台。它可以根据酵母细胞所表现出的简单表型及易于辨别的酶反应,对体内复杂环境中发生的RNA-蛋白质的相互作用进行遗传学分析。