十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物Ad-TIMPL-1基因克隆及其原核表达

目的克隆十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物（TIMPL）Ad-TIMPL-1基因并进行原核表达。方法分别用3’RACE及RT-PCR技术从十二指肠钩虫成虫cDNA中扩增编码Ad-TIMPL-1的cDNA3’末端及5’末端序列;序列经拼接后进行初步生物信息学分析;将Ad-TIMPL-1成熟肽编码序列克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒;重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆获得了编码Ad-TIMPL-1的全长cDNA序列并登记到GenBank（accession no.EF495071）;Ad-TIMPL-1完整阅读框为396bp,编码132个氨基酸残基组成的蛋白,含16个氨基酸残基组成的信号肽;成功构建了原核表达重组质粒pET-32a/Ad-TIMPL-1,并在大肠杆菌中得到了表达。结论本研究首先从十二指肠钩虫中克隆到了Ad-TIMPL-1基因并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

美洲钩虫纤溶酶抑制剂NaKuI10的表达与活性鉴定

目的从美洲钩虫(Necator americanus)cDNA中扩增编码NaKuI10基因片段,构建原核表达系统,重组表达并纯化rNaKuI10,采用化学发色法和平板溶解试验等检测其对有关丝氨酸蛋白酶的抑制作用及纤溶活性。方法根据GenBank MH218867序列,从美洲钩虫cDNA中扩增出编码成熟肽NaKuI10基因片段并连接入表达载体,构建原核表达重组质粒pET32a-sumo/NaKuI10,鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,超声破碎细菌后用镍亲和层析纯化表达产物,在纯化柱上用SUMO蛋白酶切割融合标签获得rNaKuI10,用发色底物法检测rNaKuI10对各丝氨酸蛋白酶的抑制活性,通过纤维蛋白平板法和纤维蛋白原降解试验观察rNaKuI10对纤溶酶纤溶活性的抑制作用。结果成功构建了重组质粒pET32a-sumo/NaKuI10,表达产物纯化后获得可溶性rNaKuI10。2倍及等摩尔比的rNaKuI10分别能抑制100%及90.4%的人纤溶酶活性,22.4%及10.3%的人胰蛋白酶活性。但1、2、5倍摩尔比的rNaKuI10对人中性粒细胞弹性蛋白酶,组织蛋白酶G,蛋白酶3,胰糜蛋白酶,胰弹性蛋白酶,凝血酶,凝血因子Xa(FXa)、FXIa、FXIIa、FIXa,活化蛋白C,血浆激肽释放酶及FVIIa/TF均无明显抑制作用。rNaKuI10对人纤溶酶的抑制常数(ki)为(0.83±0.10)nmol/L。2 000nmol/L的rNaKuI10接近完全抑制1 000nmol/L的人纤溶酶对纤维蛋白平板中纤维蛋白的溶解作用,等摩尔比的rNaKuI10可完全抑制人纤溶酶对纤维蛋白原的降解作用。结论 NaKuI10是一种抑制活性强且特异性较好的纤溶酶抑制剂,其生物学功能还需进一步研究。     

十二指肠钩虫巨噬细胞迁移抑制因子基因的克隆和表达

目的克隆、表达十二指肠钩虫巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)AduMIF-1基因。方法设计、合成特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduMIF-1基因。将获得的AduMIF-1编码序列克隆至原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a/AduMIF-1。重组表达质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达并分离纯化重组AduMIF-1。结果成功扩增到AduMIF-1全长编码序列,完整阅读框长度为360bp,编码119个氨基酸。构建了重组表达质粒pET32a/AduMIF-1,经IPTG诱导表达和分离、纯化,获得了重组AduMIF-1,融和蛋白分子质量单位约为33ku。结论本研究从十二指肠钩虫中分离到MIF基因,并成功进行了重组表达、分离与纯化,为进一步研究AduMIF-1的生物学功能奠定了基础。     

十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶AduGST-1基因的克隆和重组表达

目的克隆十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶(GST)AduGST-1基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduGST-1。方法设计特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduGST-1基因。将获得的AduGST-1编码序列克隆至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduGST-1。重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达、Ni亲和层析分离纯化重组AduGST-1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达及纯化情况。结果成功扩增到AduGST-1全长编码序列,并登记到GenBank(accession no.JQ812812)。AduGST-1编码序列长度为624bp,编码307个氨基酸残基。成功构建了重组表达质粒pETHF/AduGST-1,在BL21(DE3)中表达并纯化了重组AduGST-1。结论首次报道从十二指肠钩虫中分离到GST基因,该基因可在大肠埃希菌中高效表达,并分离纯化了重组GST蛋白,为进一步研究AduGST-1功能与应用奠定了基础。     

十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶AduGST-1基因的克隆和重组表达

目的克隆十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶（GST）AduGST-1基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduGST-1。方法设计特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduGST-1基因。将获得的AduGST-1编码序列克隆至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduGST-1。重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,用IPTG诱导表达、Ni亲和层析分离纯化重组AduGST-1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达及纯化情况。结果成功扩增到AduGST-1全长编码序列,并登记到GenBank（accession no.JQ812812）。AduGST-1编码序列长度为624bp,编码307个氨基酸残基。成功构建了重组表达质粒pETHF/AduGST-1,在BL21（DE3）中表达并纯化了重组AduGST-1。结论首次报道从十二指肠钩虫中分离到GST基因,该基因可在大肠埃希菌中高效表达,并分离纯化了重组GST蛋白,为进一步研究AduGST-1功能与应用奠定了基础。     

血浆激肽释放酶与炎症研究进展

血浆激肽释放酶(pKal)是血浆激肽释放酶-激肽系统(KKS)的重要组分,其通过KKS、补体系统、肾素-血管紧张素系统(RAS)参与炎症反应,与遗传性血管性水肿(HAE)、类风湿性关节炎(RA)、新型冠状病毒肺炎(COVID-19)等疾病的炎性发生发展密切相关,是HAE、RA等炎症性疾病防治靶点,也可能作为防治COVI...     

人体寄生虫学实验教学改革探索

人体寄生虫学是一门实用性较强的学科,其中实验教学是该课程的重要环节之一。目前实验教学中存在教学资源严重不足、教学时数减少、教学内容单一、学生学习兴趣不高等问题。广东医科大学基础医学院寄生虫学教研室通过合理规划线上线下教学资源,重新进行实验教学设计,引入更多的综合性实验,并适当融入思政元素,激发了学生学习热情,提高了实验教学质量,获得了学生的认可。     

十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物Ad-TIMPL-1基因克隆及其原核表达

目的克隆十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物(TIMPL)Ad-TIMPL-1基因并进行原核表达。方法分别用3’RACE及RT-PCR技术从十二指肠钩虫成虫cDNA中扩增编码Ad-TIMPL-1的cDNA3’末端及5’末端序列;序列经拼接后进行初步生物信息学分析;将Ad-TIMPL-1成熟肽编码序列克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒;重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆获得了编码Ad-TIMPL-1的全长cDNA序列并登记到GenBank(accession no.EF495071);Ad-TIMPL-1完整阅读框为396bp,编码132个氨基酸残基组成的蛋白,含16个氨基酸残基组成的信号肽;成功构建了原核表达重组质粒pET-32a/Ad-TIMPL-1,并在大肠杆菌中得到了表达。结论本研究首先从十二指肠钩虫中克隆到了Ad-TIMPL-1基因并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

蒜头抑菌能力的调查研究

目的:了解湛江市各个菜市场及超市销售蒜头的抑菌能力.方法:制备蒜头提取液,采用琼脂稀释法检测蒜头提取液的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC).结果:蒜头的提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的MIC范围分别为8～256 μg/mL、8～256 μg/mL、16～512μg/mL和4～64.μg/mL.MIC的平均值分别为60.5μg/mL,89.5 μg/mL、139 μg/mL和20.75 μg/mL.结论:本地区的蒜头提取液的抑菌能力参差不齐,但都有一定的抑菌能力.