结核分支杆菌Rv0901基因置换型打靶载体的构建

目的：对结核杆菌H37Rv的Rv0901基因进行体外扩增，构建基因打靶载体，利用基因打靶技术进行结核分支杆菌基因Rv0901功能的研究。方法：结核分支杆菌标准毒力株H37Rv体外培界，扩增目的基因，连接载体及目的片段，切除目的基因，筛选阳性克隆，酶切鉴定。结果：经酶切鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符，鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段，成功切除靶片段。证实标记基因插入片段插入方向正确。结论：成功构建了用于结核分支杆菌基因打靶的置换型载体，为随后将进行的Rv0901基因敲除株的建立，Rv0901基因功能的研究奠定了基础。     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后。whiB7基因的表达水平变化不明显外．其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐约株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因。推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

PCR-SSOP并Southern杂交检测实验室筛选耐氧氟沙星结核分枝杆菌的研究

目的 探讨PCR-SSCP并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性，并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法 ①体外诱导筛选耐OFLX的自然突变株，并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)；②扩增结核分枝杆菌的gyrA基因(包括H37Rv、H37Ra、临床分离的OFLX敏感株及体外诱导筛选的耐OFLX的菌株)并对此扩增产物进行单链构象多态性(SSCP)分析及Southern杂交，以判定应用该技术的效果。结果经PCR-SSCP及Southern杂交检测，85株体外诱导的自然耐OFLX菌株，均检测到gyrA基因突变。研究发现．在OFLX 10μg／ml这一点上，明显地存在着一个耐OFLX结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可清晰地区分OFLN敏感与耐药株。本研究结果显示，以10μg／ml为界作，为判别耐OFLX的标准是适宜的。     

MBL免疫治疗结核病小鼠的实验研究

目的 观察甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用.方法 将BALB/c小鼠18只随机分成MBL免疫治疗组、微卡治疗组和结核菌感染对照组,每组6只.小鼠感染结核分枝杆菌后第14、21、28 d各组腹腔内分别注射MBL、微卡和生理盐水.治疗结束后第3周处死小鼠,观测各组小鼠体质量以及肺、脾脏湿重,观察肺脏病理改变,取肺、脾组织进行结核菌培养和菌落计数.结果 治疗后第3周,治疗组小鼠体质量和脾脏质量高于对照组,肺脏质量低于对照组,且肺部病变较轻.MBL减轻结核病小鼠体质量下降,减少结核病小鼠肺和脾脏结核菌数量.结论 MBL对结核病小鼠具有一定的免疫治疗作用.     

081 化学发光免疫分析技术在食品有害因素检测中的应用

国内屡屡发生的食物中毒和食品污染事件、国际间食品贸易危机和以食品为载体的生物恐怖事件,使食品安全成为政府和公众关注的焦点。创建并研制食品中有害物质现场快速检测技术和装备,对开展食品、中毒样品中有害残留的连续、动态现场监控具有重要意义。本文就化学发光免疫分析技术基本原理及其在食品有害因素现场快速检测中的应用进行综述。     

化学发光免疫分析技术在食品有害因素检测中的应用

国内屡屡发生的食物中毒和食品污染事件、国际间食品贸易危机和以食品为载体的生物恐怖事件,使食品安全成为政府和公众关注的焦点。创建并研制食品中有害物质现场快速检测技术和装备,对开展食品、中毒样品中有害残留的连续、动态现场监控具有重要意义。本文就化学发光免疫分析技术基本原理及其在食品有害因素现场快速检测中的应用进行综述。     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究

目的　探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组,巨噬细胞+卡介苗+LPS组,巨噬细胞+卡介苗组以及巨噬细胞+LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞组产生较少量的IL-12,TNF-α,LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12,TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比,LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1,IL-2,IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12,而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究

目的 探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组，巨噬细胞 卡介苗 LPS组，巨噬细胞 卡介苗组以及巨噬细胞 LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞组产生较少量的IL-12，TNF-α，LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12，TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比，LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1，IL-2，IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12，而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。     

用变性高压液相色谱检测结核分枝杆菌耐药株

目的利用变性高压液相色谱(DHPLC)技术快速检测结核分枝杆菌gyrA基因的突变,对结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物做出初步判断。方法提取试验菌株基因组DNA,扩增gyrA基因的氟喹诺酮药物耐受决定区(QRDR)核酸片段;分别与H37Rv标准株(或者含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准)的相应PCR产物混合、杂交后,用WAVE核苷酸片段分析系统对各杂交产物进行DHPLC检测;序列测定结果与相应的DHPLC检测结果进行比较以验证DHPLC检测的准确性。用2mg/L的药物浓度进行氧氟沙星(OFLX)药物敏感性试验,确定101株结核分枝杆菌临床分离株对OFLX的敏感性,通过比较药物敏感性和DHPLC检测结果,建立两者之间的对应关系。结果用DHPLC检测QRDR突变与序列测定具有同样的检出率(100%),两者都能够很好地检测QRDR突变。用单纯含有Ser284突变的临床分离株代替H37Rv作为标准进行DHPLC检测,可以检测出除与耐药性无关的Ser284突变点外所有的点突变形式。在101株结核分枝杆菌临床分离株中,有49株对2mg/LOFLX敏感,52株耐受。52株耐药菌株中,有27株能够通过序列测定和DHPLC法得到准确判定。结论DHPLC法是快速检测出结核分枝杆菌gyrA基因碱基突变的好方法,但是碱基突变与结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物存在复杂的关系,造成检测准确性无预期中的高,因此该方法应用于临床检测尚需进一步验证。