呼吸道合胞病毒PCR序列分析方法的建立和应用

目的：探讨呼吸道合胞病毒ｃＤＮＡ（ＲＳＶ ｃＤＮＡ）序列分析的方法。方法：将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析技术相结合,以γ＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ为测序引物,Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶直接测序。结果：测序梯清晰,可读性好。．ＲＳＶ ＮＳ和Ｎ基因区虽较稳定,但仍有颠换突变。结论：ＲＳＶ的变异性决定了它对人类的反复感染,ＰＣＲ测序方法较简便,在临床标本的检测和变异的观察中有重要意义。     

抗乙型肝炎病毒分子治疗新策略

乙型肝炎病毒（HBV）复制受到病毒与病毒之间以及病毒与宿主之间复杂的相互作用[1],对病毒成分的物理性破坏、功能的损伤或阻止其相互作用,都可能影响病毒的增殖。根据近年来对HBV包装、逆转录及成熟过程的认识,下面将讨论一些有潜力的抗HBV策略。一、物理或功能性破坏病毒成分HBV的每一基因产物对HBV的复制都十分重要,因此,每一个转录或翻译产物都可作为潜在的靶作用对象。1. 细胞内抗体抑制HBV蛋白的功能：针对病毒蛋白,抗体与之结合最为特异,抗体在细胞外能与抗原特异性作用,在细胞内也同样能形成抗原与抗体复合物发挥作…     

乙型肝炎病毒X基因的表达产物对HLA-DR表达的效应

为了解ＨＢＶＸ基因表达产物对ＨＬＡ ＤＲ表达的效应 ,构建带Ｘ基因的重组表达载体 ,研究其在体外肝癌细胞中的表达及其对ＨＬＡ ＤＲ表达的影响。用野生型ＨＢＶＸ基因与真核载体质粒构建重组表达载体质粒 ｐＷＨＸⅡ转染ＨｅｐＧ2细胞。用ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈ ｅｒｎ印迹、ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹等分析鉴定目的基因ＤＮＡ片段与其在转染细胞中的表达产物ＨＢＶＸ蛋白。将带重组质粒 ｐＷＨＸⅡ的ＨｅｐＧ2细胞和带有ＨＢＶ全基因组的 2 .2 .15细胞 ,在相同条件下用间接免疫荧光分析和免疫酶细胞化学技术检测 ,均清晰地显示在肝细…     

乙型肝炎患者血中转化生长因子β1

目的分析急性乙型肝炎（ＡＨＢ）和慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者血清中有生物活性的ＴＧＦβ１蛋白水平和ＨＢＸ蛋白阳性率．方法ＡＨＢ和ＣＨＢ患者各２４例，用Ｐｒｏｍｅｇａ免疫分析试剂盒检测血清中ＴＧＦβ１浓度，并用自产的抗ＨＢＸ单克隆抗体ＥＬＩＳＡ检测血清中ＨＢＸ蛋白的存在．结果ＡＨＢ组和ＣＨＢ组的ＴＧＦβ１水平（μｇ／Ｌ）分别为２３６±７７和１９７±８９，均明显高于对照组８０±３４，Ｐ＜００１），但两组之间区别不大．血清中ＨＢＸ阳性率ＡＨＢ组为２５０％，ＣＨＢ组达５００％，ＨＢＸ阳性的慢性肝炎患者１５例中有１０例（８３％）ＴＧＦβ１血清水平高于中位值．结论ＡＨＢ和ＣＨＢ患者血清中ＴＧＦβ１水平明显升高，ＣＨＢ组有半数患者血清呈ＨＢＸ蛋白阳性，而这些ＨＢＸ阳性患者中８３％显示有较高的ＴＧＦβ１血清水平     

乙型肝炎病毒C抗原基因定域表达于细菌外膜及其对膜的效应

乙型肝炎的发病过程近年来认为是特异性抗体或淋巴细胞参与的针对肝细胞膜表面靶抗原的免疫攻击的结果。靶抗原是乙肝病毒C抗原(HBcAg),但分泌于胸膜的HBcAg对膜的结构与功能有何效应尚须研究。原核细胞的分泌蛋白是以与真核细胞相似的机理合成和分泌的。作者利用带有大肠杆菌外膜脂蛋白信     

用分光光度法测定抗体形成细胞并与空斑法进行比较

前言自从1963年Jerne氏首先介绍了空斑技术(PFC)以来,现已广泛应用于对机体免疫状态的动力学观察。该方法能较好地测定抗体形成细胞,但操作繁琐,观察困难,定量结果差,实验重复性不理想。近年来有的学者用分光光度法[Hemolysis Quantitated Spectrophotometrically(QHS)]测定脾脏中抗体形成细胞。前者是抗体形成细胞释放溶血素,借助于补体,使其靶细胞溶解,形成肉眼可见的空斑,计数空斑数目,后者测定是通过     

猪胸腺中免疫抑制调节物的探讨

人们已从胸腺中提取多种与机体免疫功能有关的活性物质,1966年Goldsteinc将小牛胸腺的无细胞抽出液经过初步纯化而得到一制剂,将其命名为胸腺素(Thymsoin),它具有与胸腺相同的生物学作用,在T淋巴细胞的分化、成熟中起着重要的作用。同时在胸腺中也存在着T细胞增殖、分化的负反馈性调节物质,有的学者称为抑裂素(Chalone)~〔3-7〕,为了寻找对淋巴细胞具有抑制作用     

HBV核心蛋白结构与功能及其在基因治疗策略上的应用

核心蛋白对乙型肝炎病毒(HBV)复制过程起关键的作用。近年来对HBV核心蛋白(HBc)单体及其形成的核壳结构与功能有了深入的认识,HBc基因特定部位中插入外源基因后,其产物在细胞内仍能正确地折叠和自身装配,因而有可能在细胞内表达假HBc并掺人240个野生型HBc后,共同形成核壳结构,抑制其功能的发挥,干扰HBV复制。本文就HBc结构与功能区域的基础生物学及其在基因治疗策略上的应用进展作了综述。     

为HBeAg编码的HBV-DNA片段的克隆和表达

HBeAg和抗-HBe是乙型肝炎的经典标志。制备诊断试剂用的HBeAg可从人血浆中获得,但用基因工程方法生产则是更安全、有效和廉价的途径。HBeAg和HEcAg同为HBV C区基因编码,但直接用大肠杆菌合成HBeAg文献上尚未见报导。本研究     

重组逆转录病毒载体携带乙型肝炎病毒载体的构建与表达

目的 探索利用逆转录病毒载体表达HBV载体的可能性及复制缺损性HBV能否被正确包装。方法 在逆转录病毒载体中插入表达显性阴性突变体的HBV基因复制单元，制备重组逆转录病毒后分别用以感染Hep G2和2．2．15细胞，免疫荧光法检测细胞内HBV核心抗原的表达，PCR检测上清液中重组HBV颗粒。结果 在包装细胞系PA317中能形成较高滴度的重组逆转录病毒，用以感染Hep G2细胞后，可检出核心抗原的表达。感染2．2．15细胞后，在培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。结论 重组逆转录病毒能携带HBV载体在细胞内表达，并在有野生型HBV提供结构蛋白的前提下，发挥HBV载体的功能，可望用于抗HBV基因治疗。