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反义周期蛋白B1基因抑制HT29细胞的增殖 总被引:1,自引:0,他引:1
用DNA重组技术将人类cyclinB1基因的全长cDNA,反向插入到真核表达载体pXJ41-neo的BamH1位点,得到cyclinB1基因的反义RNA表达载体pAS-B1。利用DNA磷酸钙共沉淀方法,将pAS-B1转染进HT29细胞。在含有G418的培养基中,挑选出独立的细胞克隆。利用cyclinB1cDNA作探针,Northernblot杂交鉴定出一株内源性cyclinB1mRNA受到抑制的细胞株HTB1。比较HTB1与对照细胞HT29发现,cyclinB1的反义RNA明显抑制HT29细胞的增殖,细胞内3H-TdR参入量减少。流式细胞光度术分析,处于G1期细胞比率的升高与S期、G2+M期细胞数量的下降都十分显著。 相似文献
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反义周期蛋白B1基因转染HT29细胞后若干细胞增殖调控相关基因表达的变化 总被引:1,自引:0,他引:1
用基因重组技术将插入有反义周期蛋白B1(cyclinB1)基因pXJ41-neo质粒,转染人结肠腺癌HT29,获得了HTB1细胞株。HTB1细胞显示出cyclinB1mRNA明显的表达抑制。为了探讨HTB1细胞生长变慢和它的增殖相关基因表达之间的关系,我们用异硫氰酸胍-酚一步法提取HTB1和HT29细胞的总RNA,并用一些有关的基因探针进行杂交实验。其结果表明:c-myc和CDK4在HTB1中的表达低于在HT29中的表达;而另一方面,p53、Rb、TGFβ和cyclinD3在HTB1细胞中的表达高于对照组。而cdc2基因表达二者维持相似水平。根据研究结果我们发现,转染有反义cyclinB1基因的HTB1细胞在一组正、负调节基因的协同作用下,导致细胞周期运转的变化。 相似文献
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