2016~2018 年广州地区腹泻儿童轮状病毒和腺病毒感染结果和临床特征分析

目的　收集2016 ～ 2018 年在广州市妇女儿童医疗中心就诊腹泻儿童病例资料,分析轮状病毒（Rotavirus,RV）和肠道腺病毒（Adenovirus,AdV）感染流行的特点。方法　采集2016 ～ 2018 年诊断急性腹泻儿童新鲜粪便样本,用胶体金检测法检测RV 和AdV 抗原,对结果和临床信息进行分析。结果　符合分析要求的样本共6 568 例,男性4 098 例,女性2 470 例。RV 感染4 645 例,AdV 感染1 317 例,RV 和AdV 合并感染606 例。RV 感染率以12月～次年3 月最高,AdV 和RV+AdV 合并感染率从5 月开始明显增高,在9 ～ 10 月达到峰值。RV 感染以1~ 3 岁为主;AdV 感染和RV+AdV 合并感染以2 岁内为优势。发热和呼吸道感染是发生率最高的临床并发症,AdV 感染和RV+AdV 合并感染较易出现发热症状。结论　RV 和AdV 是引起广州地区儿童急性腹泻的重要病原体。RV 所致腹泻在冬春季高发,时间有明显的地域差异。AdV 感染无明显的月份差异。两种病毒感染导致的儿童腹泻多发于学龄前,且AdV 在0~1 岁年龄段检出率最高。临床可参考腹泻发生特点实施用药治疗。     

肠道病毒71型的快速纯化及其鉴定

目的 建立一种简单、快速有效的从细胞培养物中纯化肠道病毒71(EV71)的方法.方法 EV71病毒在恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中增殖后,将获得的细胞培养物经反复冻融、聚乙二醇6000沉淀、超速离心、氯化铯垫层超速离心的方法纯化病毒.用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western blot)和透射电镜(TEM)的方法对纯化病毒进行鉴定,并测定其感染性的滴度及回收率.结果 SDS-PAGE显示出3个条带,相对分子质量分别为3.6×103、3×103和2.6×103与EV71的VP1、VP2和VP3相符合.Western blot证实为EV71特异性条带.经磷钨酸负染后电镜观察,能看到典型病毒颗粒.采用终浓度为10%的聚乙二醇6000沉淀后的病毒的感染性回收率为82.0%,再经氯化铯垫层超速离心后浓缩病毒的感染性回性率为29.0%.结论 聚乙二醇6000沉淀结合氯化铯垫层超速离心的方法比氯化铯密度梯度区带离心方法更简便,易于操作,并且比单独聚乙二醇6000沉淀有更高的纯度,是一种简便、有效的病毒纯化方法.     

免疫比浊法测定尿微量白蛋白的探讨

目的 对免疫比浊法测定尿微量白蛋白(UmALB)进行方法学评价。方法 采用免疫比浊法在HITACH17170A全自动生化分析仪上测定UmALB。结果 UmALB的检出限为0～200mg／L，批内变异系数为0．55％，平均批间变异系数为1．80％，平均回收率为102％。0．62g／L以上的血红蛋白和1．73μmol／L以上的胆红素对测定有较大负干扰，干扰率分别为-2．60％和-3．0％。结论 该法测定尿微量白蛋白精密度好，准确性高，适于常规实验室使用。     

181例Turner综合征染色体核型分析与性激素检测

目的 分析Tumer综合征患儿染色体不同核型的遗传学特征及其与性激素水平的关系.方法 将181例Tumer综合征患儿根据染色体核型分成3组进行统计分析,并对其中75例测定性激素患儿与30例健康女孩血清性激素水平进行比较,并作对照统计分析.结果 181例Tumer综合征中检出45,X核型84例(46.4%),嵌合型25...     

两种试剂检测SARS冠状病毒IgG抗体的结果分析

目的用两种试剂盒检测本院医务人员和住院患儿血清中SARS冠状病毒(SARS-CoV)IgG抗体以比较两种盒的检测结果.方法采用北京华大和本院研制的两种酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒,对923例医务人员和150例住院患儿血清进行SARS-CoV IgG抗体检测.结果 923例医务人员中,北京华大盒检测阳性10例,阴性913例;本院研制盒检测阳性20例,阴性903例,两组差异无显著性(p>0.05).两种试剂盒检测150例住院患儿血清全部阴性.结论两种试剂盒检测结果无显著差异.150例住院患儿血清中无SARS冠状病毒IgG抗体.     

一种经济的脆性X综合征的PCR检测法

目的建立一种经济的用于脆性x综合征临床大面积筛查的简便的检测方法。方法同时用加入betaine作为PCR增强剂的扩增体系和用PfxAmpTaq酶Enhance扩增体系检测脆性x综合征（FraX）FMR-1基因，检N（CGG）n重复数的多少，对脆性x综合征可疑病人进行筛查。结果扩增目的片段为237—372bp，样本未见扩增片段的为脆性x综合征患者。样本可见明显扩增片段的为正常人。在不明原因的智力低下的儿童中筛查出3例脆性x综合征患者。两种方法对FMR-1基因的CGG重复序列扩增效果均较好。结论用加入betaine扩增体系更经济可应用于临床大批量的标本筛查。     

反向点杂交检测中国人群常见4种G6PD突变方法的建立及评价

目的建立基于PCR-RDB技术的可同时检测中国人群G6PD最常见的4种基因突变类型的基因分型方法并对其作出评价。方法分别针对中国人群G6PD最常见的4种基因突变类型95(A→G)、1376(G→T)、1388(G→A)、1024(C→T)设计PCR扩增引物和基因分型探针,将探针固定到尼龙膜上制做成杂交膜条,建立PCR扩增体系和杂交体系。利用13例已知基因型的样本建立针对这4种基因突变类型的PCR-RDB检测方法。盲法对109例上述4种G6PD样本和正常样本进行PCR-RDB检测以及基因序列测定,并对两种方法所得结果进行对比。结果 PCR-RDB法准确地检测出了检测范围内所有的突变类型和正常样本,检测结果与测序结果完全一致。结论 PCR-RDB是一种经济、简便、高效、准确的G6PD基因分型方法 ,可用于G6PD的分型诊断和分型研究,并可做为一种常规方法推广到临床进行基因分型检测。     

广州地区健康儿童肠道病毒71型抗体水平调查

目的调查广州地区健康儿童肠道病毒71型抗体IgG（EV71-IgG）的水平,分析与EV71所致手足口病（HFMD）发病的关系。方法以来源于广州市妇女儿童医疗中心（我院）中心实验室分离到的EV71 C4亚型标本,制备EV71诊断抗原,建立EV71-IgG抗体诊断试剂盒方法,并进行实验室评价。收集2010年1~3月在我院儿保科抽血进行常规保健检测的标本,筛选出无发热、无HFMD症状的健康儿童血清标本,检测EV71-IgG抗体。选取我院2010年全年门诊及住院HFMD患儿的咽拭子标本进行EV71特异性核酸检测。结果①本研究建立的试剂盒EV71-IgG抗体检测临界值为0.148;与细胞中和实验方法阳性符合率为100%,阴性符合率为92%,与柯萨奇A16病毒抗体无交叉反应。②819名健康儿童血清标本中,男481名,女338名。〈1岁组（60%,60/100名）和~2岁组（39.3%,72/183名）EV71-IgG抗体阳性率显著高于其他各年龄组[~3岁、~4岁、~5岁和~14岁组分别为12.9%（15/116名）、27.1%（38/140名）、14.2%（16/113名）和22.8%（38/167名）]。EV71-IgG抗体阳性率无显著性别差异。③4 780例EV71阳性HFMD患儿中,男3 070例,女1 718例。〈1岁310例（6.5%）,~2岁1 157例（24.2%）,~3岁1 337例（28.0%）,~4岁1 094例（22.9%）,~5岁450例（9.4%）,~14岁432例（9.0%）。④各年龄组EV71-IgG抗体阳性率与EV71阳性年龄构成比呈相反趋势,〈1岁组EV71-IgG抗体阳性率最高,EV71阳性年龄构成比最低;~3岁组EV71-IgG抗体阳性率最低,EV71阳性年龄构成比最高。结论 〈1岁健康儿童EV71-IgG阳性率最高,EV71阳性年龄构成比与EV71-IgG阳性率呈相关现象。     

2010年广州地区儿童肠道病毒71型感染的分子流行病学研究

目的了解广州地区2010年肠道病毒(EV)71病毒流行状况。方法设计肠道病毒71型实时荧光RT-PCR引物和TaqMan探针,运用TaqMan实时荧光RT-PCR技术,对2010年全年来医院就诊的疑似手口足病患儿送检标本20150份,进行肠道病毒71型荧光RT-PCR检测,同时,设计了扩增EV71病毒全基因组的引物,随机选取了5株病毒进行全基因组进行测定。结果在20150份临床标本中,EV71病毒的阳性为4780份,全年总的检出率为23.72%,每个月均有阳性检出;其中,EV71病毒阳性率较高的为4～7月份,最高检出率为6月份,达32.19%,最低检出率为10月份,为7.91%;扩增了5株广州株EV71病毒全基因组全长序列,提交到GenBank上,将5株广州株EV71病毒与EV71的A、B3、B4、B5、C1、C2、C3、C4型及阜阳株全基因组核苷酸序列进行ClustalW比较,发现与C4a型阜阳株等同源性为98.00%～99.00%,与C4b同源性为91.00%～93.00%,与C1-C3同源性为82.00%～83.00%,与B3、B4、B5同源性为81.00%～83.00%,与A型同源性为80.00%。结论 2010年广州地区手足口病的主要病原是肠道病毒71型,EV71病毒在2010年全年还是较普遍流行,全基因组序列分析表明,2010年分离的5株广州株EV71病毒属于C4a型。