肠辐射损伤模型鼠的间充质干细胞移植研究

目的:探讨脐带间充质干细胞(MSC)治疗急性肠型放射病的实验理论依据。方法:体外分离培养人脐带间充质干细胞,移植入肠辐射损伤模型鼠,对肠道放射损伤模型鼠移植CM-DiI荧光标记后的人间充质干细胞,利用人β2-微球蛋白PCR技术及激光共聚焦显微镜观察供体细胞在模型鼠肠道粘膜及组织中的定位,DAI评分和体重变化评价小鼠一般状态,组化染色观察肠道粘膜的病理变化。结果:模型鼠的一般状况在移植MSC 5周明显改善,组织病理学观察也明显好转,组织PCR结果显示MSC除定向分布到辐射损伤部位小肠,在骨髓、肝脏、肺脏、脾脏也有一定的分布。结论:脐带间充质干细胞移植有助于肠辐射损伤模型鼠的恢复,有望用于人急性肠型放射病的治疗。     

SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测

背景：SIRT1基因在细胞能量代谢、凋亡及衰老过程中发挥极重要的作用,另有研究发现SIRT1可能在炎症反应方面起着调控作用。 目的：构建SIRT1特异性的shRNA慢病毒载体,并初步检测其对THP-1细胞SIRT1基因的抑制效应。 方法：设计SIRT1靶点特异性的寡核苷酸序列,连接到经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切线性化的pGCSIL-GFP载体,包装293T细胞产生慢病毒,再转染THP-1细胞,通过实时荧光定量PCR实验及Western Blot检测对SIRT1靶基因的抑制情况。 结果与结论：阳性克隆PCR及测序证实SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建成功,实时荧光定量PCR及Western Blot检测该载体在mRNA和蛋白水平能抑制THP-1细胞的SIRT1表达。     

SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测

背景:SIRT1基因在细胞能量代谢、凋亡及衰老过程中发挥极重要的作用,另有研究发现SIRT1可能在炎症反应方面起着调控作用。目的:构建SIRT1特异性的shRNA慢病毒载体,并初步检测其对THP-1细胞SIRT1基因的抑制效应。方法:设计SIRT1靶点特异性的寡核苷酸序列,连接到经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切线性化的pGCSIL-GFP载体,包装293T细胞产生慢病毒,再转染THP-1细胞,通过实时荧光定量PCR实验及WesternBlot检测对SIRT1靶基因的抑制情况。结果与结论:阳性克隆PCR及测序证实SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建成功,实时荧光定量PCR及Western Blot检测该载体在mRNA和蛋白水平能抑制THP-1细胞的SIRT1表达。