小鼠胚胎切割及半胚体外培养

目的 为基因型完全相同的同卵双胞脂人类动物模型的建立积累基础资料。方法C57BI/6J雌性小鼠与KM雄性小鼠交配,见栓3．5d采集小鼠晚期桑椹胚和早期囊胚,应用显微手术刀直接分割法进行胚胎二等份分割,所得半胚体外培养,观察其发育情况。结果 晚期桑椹胚分割成功率是91．3％,半胚发育率为57.1％,早期囊胚分割成功率约为89．2％,半旺发育率为71.2％。结论 C57BI/6J小鼠与KM小鼠的F1代胚胎经切割后能在体外良好发育,该资料可用于同卵双胞胎分化发育的研究及人类双胞胎动物模型的制作。     

感染性腹泻的治疗体会

随着经济的发展，生活节律的加快，在外就餐机会的增加，感染性腹泻的发病率也随之增加，现我们虽然对各种感染性腹泻的治疗随着补液疗法和整体医疗水平的提高，有了很大进步，但临床上抗生素的滥用，加速了肠道病原菌耐药性的产生，给临床治疗带来了困难。     

老年心力衰竭伴随呼吸衰竭32例误诊误治临床分析

目的：分析老年心力衰竭伴随呼吸衰竭的误诊原因,以提高对该病的早期诊断率。方法：回顾性分析32例误诊老年心力衰竭伴随呼吸衰竭患者的临床资料。结果：以胸闷、心悸、憋喘,需高枕位为就医时突出表现,被误诊为急（慢）性支气管炎14例;以咳嗽、咳白色黏痰为突出表现,误诊为支气管哮喘6例;以上腹部饱胀、食欲缺乏为主要表现,误诊为胃炎5例;以头痛、头晕、烦躁、失语等精神症状为突出表现6例;以胸痛突出表现,误诊为糖尿病1例。结论：当老年患者出现可疑心力衰竭症状时,应高度警惕心力衰竭的发生,及时进行相关检查,以获得早期诊断和及时治疗。     

彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用

目的 建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用.为建立新的生殖保护方法奠定基础.方法 通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导人超排获得的小鼠卵子.分别于48 h和72 h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况.结果 彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24 h可见少量DNA泳出,48 h可见大量DNA泳出:通过显微注射导人siRNA 48 h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异.结论 靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法.

Abstract：

Objective To investigate the potential of siRNAs targeting sphingomyelin phosphodiesterase 1 (SMPD1) in protecting the oocytes from apoptosis, and explore new approaches to female fertility preservation. Methods Chemically synthesized siRNA targeting SMPD1 were introduced into mouse oocytes retrieved by hyperstimulation, and the cell apoptosis was analyzed by comic assay 48 and 72 h later. Results In the occytes without any siRNA injection, occyte DNA damage occurred after 24 h, and large amount of DNA fragments migrated from the cells 48 h later. In occytes injected with siRNA003, DNA migration decreased significantly as compared with the control and the other two groups injected with siRNA001 and siRNA002 (P<0.01). Conclusion siRNA targeting SMPD1 may protect the oocytes from apoptosis, and has the potential for use in future female fertility preservation.     

大鼠胚胎上胚层干细胞的分离培养研究

目的 获取SD大鼠胚胎中附植后的胚胎上胚层干细胞(EpiSCs),并就影响SD大鼠EpiSCs(SDEpiSCs)分离与培养的组织来源、胎龄、细胞因子等条件进行探讨,从而探索适宜SD大鼠EpiSCs分离培养的实验体系,为下一步SD大鼠EpiSCs的建系提供实验研究基础.方法 以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,分别取5.5日胎龄的囊胚和7.5日胎龄囊胚上胚层(Epiblast),用添加白血病抑制因子(LIF)或活化素(activin)的基础培养基进行原代培养,分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代培养.最后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并检测其体外分化能力.结果 培养于LIF培养基和activin培养基中的囊胚均发生严重分化.培养于LIF培养基中的Epiblast也发生了严重的自发分化,而在activin培养基中,Epiblast形成SDEpiSCs原代集落.经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SDEpiSCs.结论 利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.5日胎龄SD大鼠胚胎中获得SDEpiSCs.     

老年不典型急性心肌梗死的误诊分析

目的:探讨老年不典型急性心肌梗死的误诊情况与特点,以减少误诊,提高诊治水平,减少死亡率。方法:对22例患者误诊的老年不典型急性心肌梗死临床特点、发病诱因等进行回顾性分析。结果:22例患者均无典型的急性心肌梗死症状,误诊为急性胃肠炎者9例,急性胰腺炎者2例,急性胆囊炎者1例,误诊为老慢支合并肺部感染6例,肺炎2例,误诊为肩周炎2例。结论:临床医生应对老年人高危人群中的急性心肌梗死要有足够的认识和警惕。如相应疾病治疗后症状不能缓解者,要及时做常规心电图及心肌酶检查、肌钙蛋白,以减少误诊率和降低死亡率,提高诊疗水平。     

悬滴培养诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

目的: 与平板培养比较,探讨悬滴三维培养对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)肝样分化的诱导效应。方法: 对rMSCs进行悬滴培养,以肝细胞生长因子(HGF)作为诱导因子,同时设定平板培养诱导和非诱导对照组,在培养第7、14和21 d后,通过RT-PCR法和免疫荧光技术检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(APF)和角蛋白(CK-18)在mRNA和蛋白水平上的表达情况,并通过ELISA检测培养液上清中ALB的分泌。结果: HGF悬滴培养的rMSCs形成球状三维结构,内部呈现空囊样结构,大量细胞聚集在球体外侧面;在第7 d就出现ALB和CK-18的强阳性表达,而AFP则表达较弱。HGF培养的单层rMSCs直到第14 d才出现ALB、AFP和CK-18 mRNA的弱阳性表达,蛋白表达则在第21 d才呈现阳性。ELISA检测到HGF悬滴培养后rMSCs能够胞外分泌ALB,与正常和平板培养诱导组比较差异显著(P<0.01)。结论: 悬滴培养为rMSCs创造一种球形三维培养微环境,在HGF的诱导作用下,rMSCs横向分化为肝样细胞。     

肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立

 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠，为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠。以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用，为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础，更为丙型肝炎病毒核心蛋白（HCV-C）的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40polyA的转基因载体pTRE-HCV-C．以显微注射的方法将l_153kb的转基因片段注人BALB／C母鼠的受精卵．出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性．再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和胛A基因的另一品系转基因小鼠杂交，得到子代F1小鼠，通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠，以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后，得到子代F1小鼠。特定时问与DOX作用后，小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明，TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠，可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用，为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础．也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。     

SD大鼠胚胎上胚层干细胞的分离与培养

目的从SD大鼠胚胎中获取附植后胚胎上胚层干细胞(post-implantation epiblast stem cells,Episc),并探讨组织来源、胎龄、细胞因子、传代方法等条件对SD大鼠Episc(SD Episc)分离与培养的影响。方法分别取5.5d和7.75d胎龄囊胚上胚层(epiblast),以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,于添加白血病抑制因子(leucocyte inbibitory factor,LIF)或活化素(activin)的基础培养基中,进行原代培养。分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代。最后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并对其体外分化能力进行检测。结果培养于LIF培养基和activin培养基中的囊胚均发生严重分化。培养于LIF的培养基中的epiblast也发生了严重的自发分化。而在activin培养基中,epiblast形成SD Episc原代集落。经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SD Episc。结论利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.75d胎龄SD大鼠胚胎中获得SD Episc。     

来源于胚胎干细胞的嵌合体小鼠自发性肿瘤观察

目的观察胚胎干细胞（ES细胞）囊胚腔注射的方法构建嵌合体小鼠自发性肿瘤。方法连续80周每周观察嵌合体小鼠的肿瘤发生情况,选取同龄相关品系小鼠各10只作为对照组。处死发生肿瘤的小鼠并且病理学检查,提取肿瘤组织的基因组DNA,用PCR方法检测性别决定区（SRY）基因判断肿瘤的品系来源。结果13只嵌合体小鼠中有3只（全为雌性）发生自发性肿瘤,分别为腺癌、皮下恶性畸胎瘤、淋巴瘤。肿瘤细胞来源于注射的ES细胞而非受体囊胚。对照组野生型小鼠未见肿瘤发生。结论ES细胞囊胚腔注射的方法构建嵌合体小鼠具有较高的自发肿瘤发生率,可作为自发性肿瘤动物模型。