αB-晶状体蛋白与凋亡相关蛋白相互作用抑制C2C12细胞凋亡

目的 探讨aB-晶状体蛋白抗心肌细胞凋亡的分子机制。方法构建带6个串联组氨酸的aB-晶状体蛋白表达质粒(pcDNA3.1一aBC)，经测序证实后，转染C2C12肌原细胞株，筛选稳定高表达aB-晶状体蛋白的细胞株。采用H2O2(0.5mmol/L)诱导细胞凋亡，检测线粒体细胞色素C释放率和细胞膜磷脂酰丝氨酸细胞色素荧光     

氧化应激所致C2C12肌源细胞核仁损伤的分子机制

目的探讨氧化应激诱导细胞核仁损伤的分子机制.方法向传代培养的C2C12肌源细胞中加入0.5mmol/L过氧化氢以模拟氧化应激.结果甲苯胺兰染色发现正常C2C12细胞可见一个位于中央的,浓染致密的核仁颗粒.过氧化氢处理后3h,可见明显的核仁分离,处理6h最为明显.细胞总蛋白质合成能力分析发现过氧化氢处理后6h细胞总蛋白质合成能力显著下降(与正常对照比P＜O.05),并持续至24h.免疫印迹检测核仁素(又称C23)发现,过氧化氢处理1h后可见-80kDa条带,而其110kDa主带明显减弱,过氧化氢处理6h和12h最为明显.用脂质体将核仁素反义核酸导入细胞后24h,免疫印迹发现核仁素表达明显被抑制,同时也可观察到细胞总蛋白合成能力下降及明显的核仁分离.结论氧化应激通过诱导核仁蛋白质核仁素的裂解并使其110kDa全长分子的量减少,而导致C2Cl2细胞核仁损伤.     

膜表面核仁素对内毒素所致THP-1细胞炎症介质表达的影响

目的探讨THP-1细胞膜定位核仁素作为寡糖链受体在脂多糖所致炎症反应中的作用。方法采用间接免疫荧光、流式细胞术以及细胞膜蛋白免疫印迹等技术证实核仁素在人THP-1细胞膜表面表达。以无血清状态下脂多糖刺激THP-1细胞为炎症细胞模型，采用逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附测定法等检测核仁素抗体对炎症介质肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的表达与分泌的影响。结果间接免疫荧光、流式细胞术以及免疫印迹证实核仁素可在人THP-1细胞膜表面表达。逆转录聚合酶链反应结果发现，在无血清条件下，500μg/L脂多糖刺激1h、2h、3h或4h后可以明显促进肿瘤坏死因子α和白细胞介素1βmRNA表达，而核仁素抗体处理1h后再用脂多糖刺激1h、2h、3h或4h，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1βmRNA表达明显受到抑制。而先用正常IgG体处理1h后再用脂多糖刺激1h、2h、3h或4h，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1βmRNA表达与单用脂多糖刺激水平相当。另外单用正常IgG或核仁素抗体处理1～4h，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1βmRNA表达与对照组比较无差异。酶联免疫吸附测定法检测发现，核仁素抗体处理1h后能明显抑制脂多糖所致肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的分泌，而IgG则没有这种作用。结论THP-1细胞膜表面核仁素参与了脂多糖所致炎症反应，提示核仁素可能是脂多糖的一种新受体。     

烧伤对胸腺细胞凋亡的影响

小鼠４０％体表面积经６０℃１２ｓ烧伤后胸腺细胞的出现明显的病理性凋亡，表现为：与对照组比，ＤＮＡ断裂（ＤＮＡＦｒｎｍｅｎｔａｔｉｏｎ）百分率显著增高，琼脂糖凝胶电泳出现明显的细胞凋亡特有的“梯状”条带，动态观察发现烧伤后３ｈＤＮＡ断裂百分率明显升高，１２ｈ胸腺活细胞总数明显降低，而胸腺重量和细胞总数降低到烧伤后１８ｈ才才出现，结果提示：（１）烧伤可诱导胸腺细胞发生严重的病理性凋亡；（２）烧伤后胸腺     

参麦对小鼠烧伤后胸腺细胞凋亡的保护作用及机制探讨

参麦对小鼠烧伤后胸腺细胞凋亡的保护作用及机制探讨湖南医科大学病理生理教研室（长沙４１００７８）阳剑波邓恭华尢家马录罗正曜本文研究参麦是否具有防止小鼠烧伤后胸腺细胞凋亡的作用，并从ＢＣＬ－２蛋白含量（长寿基因蛋白产物）方面探讨其作用机制。成年昆明纯种健...     

采用反义寡核苷酸探讨HSP70对活性氧所致心肌细胞损伤的影响

目的探讨HSP70对活性氧所致心肌细胞急性损伤的保护作用.方法用热休克预处理诱导新生大鼠心肌细胞中HSP70的表达,采用HSP70反义寡核苷酸阻断HSP70的表达,乳酸脱氢酶释放率和细胞总蛋白质合成能力来反映H2O2 0.5 mM所致心肌细胞损伤程度.结果H2O2引起心肌细胞乳酸脱氢酶释放率明显升高,而细胞总蛋白质的合成降低.热休克预处理导致心肌细胞中HSP70表达明显增加,并使H2O:所致心肌细胞LDH释放率显著降低,细胞总蛋白质的合成基本恢复正常水平.HSP70反义寡核苷酸很大程度上阻断了HSP70的表达及热休克预处理的心肌细胞保护作用.结论在热休克预处理减轻过氧化氢所致乳鼠心肌细胞急性损伤的作用中,HSP70发挥了最主要的作用.     

钨酸钠对油酸所致小鼠急性肝损伤的影响

本文旨在探讨油酸(OA)所致肝损伤是否与氧自由基(OFR)有关及OFR的来源。C_(57)纯系小鼠15只,雌雄不拘,分为两组:(1)、油酸组,尾静脉注射OA(3μl/10g),90分钟后处死动物,取肝组织测定湿/干重比、肝     

热休克蛋白72在氧化应激所致急性乳鼠培养心肌细胞损伤中的作用

目的：探讨HSP72对氧化应激所致心肌细胞急性损伤的保护作用。方法：用热休克预处理诱导新生大鼠心肌细胞中HSP72的表达，采用HSP72反义寡核苷酸阻断HSP72的表达。向原代培养的乳鼠心肌细胞中加入终浓度为0．5mmol／LH2O2，以模拟氧化应激。测定乳酸脱氢酶释放率和细胞总蛋白质合成能力。结果：氧化应激引起心肌细胞乳酸脱氢酶释放率明显升高，而细胞总蛋白质的合成降低。热休克预处理导致心肌细胞中HSP72表达明显增加，并使H2O2所致心肌细胞LDH释放率显著降低，细胞总蛋白质的合成基本恢复正常水平。HSP72反义寡核苷酸能在很大程度上阻断HSP72的表达及热休克预处理所所致的心肌细胞保护作用。结论：在热休克预处理减轻过氧化氢所致乳鼠心肌细胞急性损伤的作用中，HSP72发挥了主要作用。     

参麦对地塞米松诱导胸腺细胞凋亡的保护作用

参麦对地塞米松诱导胸腺细胞凋亡的保护作用湖南医科大学病理生理教研室（长沙４１００７８）尢家马录阳剑波邓恭华罗正曜本文以地塞米松在体外诱导胸腺细胞凋亡为模型，观察参麦是否能防止地塞米松诱导的胸腺细胞凋亡。实验分四组：Ⅰ生理盐水对照组：胸腺细胞悬液（２×...     

一种快速分离C2C12细胞核仁的方法研究

[目的]探讨一种快速分离核仁且能保持其完整结构与功能的方法.[方法]采用低渗裂解分离细胞核,密度梯度离心分离细胞核仁,电镜、免疫印迹检测核仁的纯度.[结果]电镜检测发现在放大2 000倍时C2C12肌源细胞核仁呈现为大小基本一致、形态较为规则的黑色阴影,放大25 000倍时可见单个网孔状的核仁,且核仁各组分清晰可见.免疫印迹检测发现核仁纯度较高,没有胞浆蛋白的污染.[结论]本研究建立了一种快速分离细胞核仁的方法.