白细胞介素-1β参与curdlan诱导的慢性肉芽肿性疾病高炎症反应的初步研究

目的 探讨curdlan诱导慢性肉芽肿性疾病(CGD)高炎症性反应的分子机制,初步探讨NOX2(NADPH oxidase2)缺失与高炎症反应之间的关系及可能机制.方法 β-葡聚糖(β-glucan)是CGD感染并发症的主要刺激物,以NOX2基因缺失的小鼠耳背注射curdlan(1,3-β-glucan,200μg/50 μL)/PBS 50 μL建立CGD高炎症反应动物模型,观察其炎症反应并分析炎症因子的表达变化.在注射后的第2、7天提取鼠耳蛋白检测其中炎症因子白细胞介素(IL)-1β(interleukin-1β)的表达变化.Western blot检测对照组及NOX2缺失组caspase-1的表达情况.体外实验中,用10、50、100、200 μg/mL curdlan处理从上述小鼠中分离培养的巨噬细胞,建立CGD细胞模型.在处理后第1、2天和第5天收取细胞上清用酶联免疫吸附试验(EHSA)检测相关的炎症因子IL-1β表达变化.结果 NOX2缺失的小鼠注射curclan后表现出高炎症性反应,与对照组相比,炎症因子IL-1β显著高表达(第2天:P=0.0189,第7天:P =0.0450);NOX2缺失小鼠caspase-1的活性形式caspase-1p10表达显著增加(第2天:P=0.3980,第7天:P =0.0001).在CGD细胞模型中,我们发现在注射后第5天与正常对照组相比,炎症因子IL-1β水平显著升高(P=0.0011),且局限于NOX2缺失的骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)中,其水平与curdlan浓度呈剂量依赖性.结论 Curdlan通过激活巨噬细胞中的caspase-1导致炎症因子IL-1β显著高表达,炎症因子IL-1β参与了NOX2缺失导致的慢性肉芽肿病高炎症性反应.     

Ca2+调控curdlan诱导的巨噬细胞炎症反应中活性氧的生成

目的 观察curdlan刺激下巨噬细胞活性氧(ROS)生成的变化及Ca2对活性氧生成的影响,探讨Ca2+参与curdlan诱导的巨噬细胞炎症反应的可能机制.方法 将Dectin-1缺失的小鼠和正对照WT小鼠来源的巨噬细胞,以100 μg/mL curdlan处理从上述小鼠中分离培养的巨噬细胞,建立巨噬细胞炎症反应模型.处理后,Amplex Red和luminol法分别检测巨噬细胞中超氧离子和过氧化氢的生成变化.用EGTA螯合检测试剂中Ca2+,观察无Ca2情况下活性氧的产生情况,以及在检测试剂中加入不同浓度的Ca2+观察其对ROS产生的影响.结果 Curdlan刺激下,巨噬细胞(骨髓来源和腹腔来源巨噬细胞)中活性氧(包括超氧离子和过氧化氢)水平显著增加.与无Ca2组相比(0 mmol/L),随着Ca2+浓度增加(1.5、2.5 mmol/L),curdlan诱导的巨噬细胞中ROS水平升高.结论 Curdlan能够结合巨噬细胞中相应的免疫识别受体(dectin-1)通过产生大量ROS从而介导炎症反应,调控ROS的水平可能是Ca2+参与炎症反应的机制之一.