大鼠原生殖细胞的形态学及分化特性

目的 研究大鼠胚胎原生殖细胞（Primordial germ cells, PGCs）的形态及其分化特性。方法 取受精后10.5 d的大鼠胚胎作HE染色,取受精后11.0~12.5 d的大鼠胚胎生殖嵴进行PGCs原代培养,光、电镜观察PGCs及其分化细胞的微细结构,碱性磷酸酶 (ALP) 染色检测细胞的分化程度。结果 大鼠PGCs位于卵黄囊内胚层深部的间充质内,体积大,呈椭圆形或不规则形;核大,染色质细密,含1~2个核仁。体外培养可见PGCs大而圆,散在分布,或聚集成团,胞质中含有椭圆形的线粒体和丰富的核糖体,ALP反应呈阳性;培养4~5 d,PGCs形态不规则,有伪足,ALP反应减弱,进一步分化可形成神经元样细胞、表皮细胞、心肌细胞、分泌细胞以及类似血管、心脏的管腔样结构等。由PGCs分化来的细胞ALP反应均呈阴性。结论 大鼠生殖嵴来源的PGCs是一种具有发育全能的、可分化形成3个胚层衍生物的胚胎多能干细胞。     

人骨髓间充质干细胞的分化与端粒酶活性

目的：研究人骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs)的分化特征及其端粒酶活性。方法：取人胚胎股骨骨髓,分离,培养,扩增MSCs,原位杂交法检测MSCs的端粒酶性。将MSCs种植于裸鼠皮下,4周后观察MSCs的分化情况。结果：人MSCs呈端粒酶反应阳性。植入裸鼠体内后可分化成骨,软骨,脂肪,骨骼肌,肌腱样组织和无髓神经纤维束样结构。结论：人MSCs是一种具有多向分化能力的干细胞,具有较高的端粒酶活性。     

人发角蛋白植入对大鼠脊髓损伤功能与形态的影响

目的：研究脊髓损伤后植入人发角蛋白（human hair keratin，HHK）对动物行为学影响及其对损伤脊髓的形态学影响与HHK本身的形态学变化。方法：采用重物下落撞击法制备大鼠脊髓损伤模型，在损伤处移植入HHK，分别于植入后5、10、15、20、25、30d进行行为学检查，于20d与30d脊髓进行形态学观察。结果：HHK植入后在30d内对大鼠的行为学影响与模型对照组没有统计学意义，但HHK可降解吸收融入损伤的脊髓组织，而受损伤的脊髓组织中可见大量胶质细胞、成纤维细胞与巨噬细胞浸润、神经纤维与髓鞘朗革非氏细胞。结论：HHK可能在脊髓损伤后的修复与重建中起作用。     

人发角蛋白材料植入修复受损骨骼肌后降解过程的观察

目的阐明人发角蛋白(HHK)材料植入体内后的降解过程。方法7只新西兰兔随机分为术后1、3、6周实验组和正常对照组。实验组进行骨骼肌切除后植入HHK材料,按期进行常规形态学和泛肽组化观察。HHK材料由3种降解速度的F、B、Z组分混合编制而成。结果光镜形态学观察显示材料植入后第1周出现HHK材料毛小皮脱落,HHK材料呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞;到第3周时可见降解成颗粒的材料被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬。泛肽酶组化显示第1周时HHK材料及其周围的巨噬细胞、多核巨细胞呈阳性反应;第6周时材料进一步降解,同时伴有新生肌肉。电镜形态学观察显示毛发被降解成小的颗粒状。结论HHK材料的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的HHK材料降解成颗粒,随后细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的材料颗粒进行降解,且具有协同作用;同时肌卫星细胞被活化形成新生肌组织。     

应用组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损

目的:由于肌腱来源受限及人工代用品力学性能差等缺点限制了临床肌腱损伤的修复,为此探索组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损的可行性,以期为肌腱修复提供实验依据。方法:实验于2000-08/2001-12在第一军医大学中心实验室完成。30只新西兰白兔分为2组:人发角蛋白(HHK)组:用HHK材料修复兔跟腱缺损;组织工程化肌腱组:骨髓间充质干细胞(MSCs)与HHK在模拟微重力条件下形成细胞-材料复合体,修复兔跟腱缺损。采用组织学和免疫组织化学方法观察术后3,6和12周损伤肌腱的修复情况。利用分子生物学手段检测新生肌腱Ⅰ型胶原mRNA表达。结果:扫描电镜下可见MSCs-HHK组织工程化肌腱上有大量梭形的MSCs贴附生长,细胞平行排列,细胞间有突起相连。与HHK组相比,组织工程化肌腱组新生肌腱组织Ⅰ型胶原mRNA呈较高表达,腱细胞增生活跃,胶原纤维更为成熟。结论:在模拟微重力条件下以MSCs为种子细胞,HHK为支架材料构建的组织工程化肌腱能够有效地修复兔跟腱缺损。     

微小RNA与胶质瘤干细胞放化疗敏感性

微小RNA（miRNA）的表达与胶质瘤干细胞对放疗及化疗的敏感程度密切相关。许多研究发现,调节单一miRNA能起到提高胶质瘤干细胞的放化疗敏感性、增加细胞凋亡、多方面综合抑制胶质瘤干细胞生长的效果。胶质瘤的治疗策略有望以miRNA为靶点,通过调节miRNA在细胞中的表达,从而达到提高胶质瘤干细胞放化疗敏感性的目的。     

CXCL17蛋白促进顺铂诱导HepG2肝癌细胞自噬形成

目的　探讨CXCL17调节肝癌细胞化疗耐药产生的机制。 方法　构建过表达CXCL17的HepG2细胞系。实验分为过表达CXCL17组,空白质粒组以及对照组。转染的细胞提取总蛋白,Western blot检测蛋白表达状态,流式细胞仪及电镜检测药物作用后的细胞变化。 结果　CXCL17过表达的HepG2细胞株较其亲代细胞对顺铂引起的细胞毒作用和凋亡敏感性下降,但是尚未完全被抑制,而细胞内的自噬增加,线粒体损伤减少,溶酶体增多。 结论　CXCL17通过促进细胞自噬参与调节HepG2细胞的化疗耐药。     

基于多模态多示例学习的免疫介导性肾小球疾病自动分类方法

目的 探讨如何利用多模态深度学习方法,联合光学显微镜（OM）、免疫荧光显微镜（IM）及透射电子显微镜（TEM）对应的3种图像进行免疫介导性肾小球疾病分类。方法 基于273例患者的病理图像进行回顾性研究,构建多模态多示例模型对3种免疫介导性的肾小球疾病——免疫球蛋白A肾病（IgAN）、膜性肾病（MN）、狼疮性肾炎（LN）进行分类。该模型采用示例水平的多示例学习（I-MIL）方法挑选患者的TEM图像并与同一患者的OM图像和IM图像进行多模态特征融合。通过该模型与单模态、双模态模型的比较,探究3种模态之间的不同组合形式以及模态特征融合方式的特性。结果 联合OM、IM以及TEM图像建立的多模态多示例模型准确率为（88.34±2.12）%,优于准确率为（87.08±4.25）%的最优的单模态模型,以及准确率为（87.92±3.06）%的最优的双模态模型。结论 本研究成功建立基于OM、IM及TEM三种模态图像的多模态多示例模型,并验证了采用多示例学习结合多模态学习方法对免疫介导性肾小球疾病分类的有效性。     

原生殖细胞的研究进展

原生殖细胞是来源于胚胎原始生殖嵴的一种具有多向分化潜能的干细胞 ,原生殖细胞的形态、标志及体内外分化潜能都类似于胚胎干细胞 ,而且也具有其种系传递能力。研究表明 ,原生殖细胞在胚胎发生中有其相对固定的迁移途径 ,细胞的迁增殖和分化受许多细胞因子的调控 ,原生殖细胞可表达某些特异的抗原 ,据此可对其进行鉴定 ,目前许多种属的原生殖细胞已建系 ,这必将有助于原生殖细胞的深入研究。原生殖细胞作为一种多能干细胞 ,对于体外研究胚胎发育、基因研究、基因组学研究、药物筛选等有重要意义     

治疗剂量他克莫司对大鼠肾脏病理及超微结构变化的影响

目的 探讨肾移植术后首剂治疗剂量他克莫司(FK506)对大鼠肾脏组织和肾脏细胞超微结构的影响,以及地尔硫革(Dil)对FK506肾毒性的防治作用.方法 按公式将肾移植术后FK506、环孢素A(CsA)和Dil的首剂治疗剂最换算成大鼠的治疗剂量.SD大鼠2,4只随机分成对照组、CsA组(25 mg·kg-1·d-1)、FK506组(0.8 mg·kg-1·d-1)和FK506+Dil组(0.8 mg·kg-1·d1及8 mg·kg-1·d-1),用药4周后建立起各组大鼠肾毒性模型.观察各组大鼠的肾功能指标、肾组织的病理改变(HE染色、PAS染色和MASSON染色)、电子显微镜下肾脏细胞内超微结构的改变.结果 CsA组与FKS06组出现明显的血肌酐上升(36.0±2.6)、(34.2±4.5)μmol/L,对照组为(29.2±3.4)μmol/L;肌酐清除率下降(0.63±0.45)、(0.58±0.39)ml·min-1·100 g-1,而对照组、FK506+Dil组为(1.55±0.91)、(1.02±0.62)ml·min-1·100 g-1.两组均可观察到明显的肾小管细胞浊肿及空泡变性,并且出现不同程度的肾内小动脉玻璃样变、肾小管间质纤维化、肾小球足细胞融合、肾小管上皮细胞线粒体肿胀空泡化等病变.FK506+Dil组上述各项指标的变化有所减轻或接近正常.结论 肾移植术后首剂治疗剂量FK506与CsA一样,均可引起大鼠肾脏组织和肾脏细胞超微结构出现病理改变.地尔硫革可以减轻FK506对肾脏组织和细胞的病理损害.