基因组差异甲基化片段筛选技术

分离和鉴定细胞之间的差异甲基化片段,不仅有助于了解基因的功能、分离疾病相关基因,而且可以发现与细胞分化或病变相关的甲基化标记。目前筛选差异甲基化DNA片段的方法主要有:甲基化敏感的限制性界标基因组扫描、甲基化敏感的代表性差异分析、甲基化敏感的限制性指纹技术、甲基化CpG岛扩增-代表性差异分析、微阵列技术等。其中微阵列法又先后建立有CpG岛微阵列、寡核苷酸微阵列和表达CpG岛序列标签微阵列。这些方法各有特点和适用范围,应根据具体研究目的和工作条件进行恰当的选择。     

浅论如何做好医学鉴定人

在我国现行医学鉴定体系中 ,鉴定人可分为专职的法医学鉴定人和非专职的医学鉴定人两大类[1] 。实践证明 ,具有丰富临床理论知识、经验和技能的各科专家参与医学鉴定工作 ,是对法医鉴定必要的、有益的补充。 1996年修订后的《刑事诉讼法》第 12 0条补充规定 :“对人身伤害的医学鉴定有争议时需要重新鉴定或者对精神病的医学鉴定 ,由省级人民政府指定的医院进行。”为临床医生进行医学鉴定提供了法律依据 ,同时也提出了更高的要求。新《刑事诉讼法》实施后 ,第 12 0条引起了法医学界的极大争议。由于相应的配套措施 ,如鉴定人资格、必须接受…     

Rotor-Gene链融解曲线法甲基化标记筛选技术的建立

目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性.方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor-Gene 3 000实时定量PCR仪进行扩增和链融解,分析融链温度、链融解曲线与甲基化程度、甲基化模式的相关性及各种影响因素.结果:基于Rotor-Gene 的链融解曲线法,不仅可以区分甲基化与非甲基化,而且能够鉴别片段内细微的甲基化差异;主要的影响因素有升温幅度、缓冲液离子强度、产物浓度等.结论:基于Rotor-Gene 的链融解曲线法,可以集扩增和链融解于一体,是一种经济简便的甲基化分析技术,可用于样品的甲基化筛选.     

亚硫酸氢盐测序法DNA甲基化标记筛查技术的改进研究

目的 改进DNA亚硫酸氢盐测序法(bisulfite genomic sequencing,BGS),建立一种简便快速的甲基化标记筛查技术.方法 基因组DNA在亚硫酸氢盐处理、脱盐纯化后直接进入碱性的PCR体系,通过延长预变性时间完成修饰过程,然后进行常规亚硫酸氢盐PCR(bisulfite-PCR,BSP)扩增;首轮扩增产物再用5'端加有高GC标签序列的引物进行2次扩增,达到调整GC含量和直接测序的目的 .同时用传统和改进BGS法检测3T3-L1细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因和Hela细胞雄激素受体基因启动子的甲基化情况,以评估改进方案的可行性.并用Alu序列实时定量BSP技术比较传统和改进BGS法的灵敏度.结果 无论是高甲基化还是低甲基化片段,改进的BGS法均可实现BSP产物的直接测序,结果与传统法一致.改进法修饰的DNA转化率达到100%,特异度＞93.75%,灵敏度显著高于传统方法(t=2.978 2,P＜0.05),并有良好的重复性.结论 改进后的BGS方法简单灵敏,可用于甲基化标记的快速筛查.     

29例医疗纠纷尸检的法医学分析

近年来医疗纠纷日益受到重视,其中发生死亡的医疗纠纷,已经成为医患双方和社会各界普遍关注的热点。对这类纠纷的正确鉴定和处理,是保护医患双方合法利益,提高医疗质量,改善医院管理,维护医院正常秩序和社会安定的一项重要工作。本文对１９９３年以来受理的医疗纠纷尸检鉴定中资料完善的２９例进行回顾性研究,并以法医学的观点进行分析,以期为医疗纠纷的法医学鉴定、医疗纠纷的正确处理和预防提供资料。１　材料与方法从本系１９９３～１９９８年尸检档案１７０例中挑选出涉及医疗纠纷的２９例资料,每例包括尸检鉴定书、尸体剖验记…     

法医学实习教学改革的探索

法医学是一门应用学科,要求学生有较强的动手能力和实践能力,法医学实习教学是提高学生实践能力的重要环节。现今法医人才培养还是知识型的模式,如何培养高素质的法医高级应用型人才,是时代赋予的课题。加快法医学教学改革,完善现行的法医学教育模式,为我国法医学人才培养提供经验和借鉴,形成一个突出实践能力和创新能力特色的法医学人才培养体系。     

消化后片段长度差异等位基因特异性PCR技术--印记SNP rs220028多态性和甲基化模式研究

目的建立一种能同时分析甲基化和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)的新方法。方法以印记SNP rs220028(A／G)为例，基因组DNA经甲基化敏感限制酶消化后用片段长度差异等位基因特异性PCR(fragment length discrepant allele—specific PCR，FLDAS—PCR)分型；用扩增产物酶消化法来排除酶切位点序列变异，证实检出的是甲基化等位基因。结果消化后FLDAS—PCR可选择性检出甲基化等位基因，家系分析表明其来自母亲。等位基因频率A=0．5085．G=0．4915，多态信息含量为0．3749。结论消化后FLDAS—PCR技术可以实现甲基化和SNP的复合分析；印记SNP rs220028在Prader—Willi／Angelman综合征诊断中有潜在意义。     

Hela细胞雄激素受体基因外显子1的甲基化检测

目的:检测Hela细胞雄激素受体(AR)基因外显子1的甲基化水平.方法:用亚硫酸氢盐克隆测序法和联合亚硫酸氢盐的限制酶法(COBRA)检测不同来源Hela细胞AR基因外显子1的甲基化水平,BiQ Analyzer软件分析测序结果.结果:在非CpG胞嘧啶转化率＞98％的前提下,Hela细胞AR基因外显子1片段的总甲基化率...     

法医临床学鉴定工作几点体会

法医临床学鉴定是法医学鉴定的重要组成部分 ,它作为一种诉讼证据 ,在司法实践中至关重要。《人体重伤鉴定标准》和《人体轻伤鉴定标准 (试行 )》是人体伤情鉴定的统一标准 ,如何做到在鉴定中既要严格地把握标准 ,又要结合具体案件的特殊情况 ,笔者根据实际工作中遇到的问题 ,谈以下体会。1　关于多人致伤创口长度问题　《人体轻伤鉴定标准 (试行 )》第 6条规定 :“头部锐器创口累计长度达 8ｃｍ ,儿童达 6ｃｍ ;钝器创口累计长度达 6ｃｍ ,儿童达 4ｃｍ。”它已明确规定头部创口构成轻伤所要达到的长度。然而 ,在群体殴斗事件中 ,一个伤者…