羧胺三唑乳清酸盐抑制人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株增殖及线粒体能量代谢

目的 研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌耐吉西他滨细胞株(AG细胞)增殖、代谢和凋亡的影响.方法 体外培养AG细胞.将细胞分为对照组和不同浓度CTO组;用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞活力;用annexin V/PI双染色及流式细胞测量术检测细胞凋亡;用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色及流式细胞测量...     

稳定敲除Mcart-1下调RAW264.7巨噬细胞增殖能力和氧化磷酸化水平

目的 基于CRISPR/Cas9原理构建Mcart-1稳定敲除的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7,检测其细胞增殖能力和能量代谢水平。方法 用Cas9慢病毒和sgRNA慢病毒分两步感染RAW264.7巨噬细胞，并挑选单克隆细胞：qPCR和Western blot检测Cas9表达水平和Mcart-1敲除效果；单细胞测序分析突变位点；细胞能量代谢分析仪Seahorse检测细胞耗氧速率(OCR)和能量代谢表型；试剂盒测定细胞内总ATP含量；细胞计数仪计数和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色检测细胞增殖。结果 成功构建Mcart-1稳定敲除的RAW264.7细胞株(记为Mcart-1^-/--RAW264.7);该细胞株中Mcart-1发生移码突变；与野生型RAW264.7细胞系(记为RAW264.7)相比，Mcart-1^-/--RAW264.7细胞氧气消耗速率(OCR)下降，胞外酸化速率(ECAR)升高；与RAW264.7细胞相比，Mcart-1^-/--RAW264.7细胞内总ATP含量下降(P<0....