mGM-CSF重组质粒的构建、表达及活性鉴定

目的 构建pc—mGM—CSF重组质粒载体，为mGM—CSF基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法 采用RT—PCR方法从小鼠脾脏中获得目的基因mGM—CSF，克隆于pcDNA3.1／Myc-His(-)(A)质粒上，成为pc-mGM-CSF，用PCR、酶切进行鉴定，然后用脂质体转染小鼠骨髓瘤细胞SP2／0，用G418筛选后通过RT—PCR和SDS—PAGE鉴定，将转染SP2／0上清加入NFS-60细胞，检测蛋白活性。结果 重组质粒中含有mGM—CSF基因，在SP2／0中有表达，且表达产物能分泌到肿瘤细胞外，分泌到细胞外的产物用mGM—CSF依赖株NFS-60细胞检测证明具有生物学活性。结论 成功构建含mGM—CSF真核表达重组质粒，有助于进一步研究其抗肿瘤作用。     

糖基化磷脂酰肌醇修饰的小鼠IL-21瘤苗抗肿瘤效应及其机制初探

目的 构建糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphafidylinositol,GPI)修饰的小鼠IL-21瘤苗,并对此瘤苗的抗肿瘤效应及其机制作初步探讨.方法 通过重叠PCR方法获得IL-21-GPI融合基因并将其插入空载体pcDNA3.1.将鉴定过的重组载体以脂质体法转染B16F10细胞制成瘤苗,细胞间接免疫荧光法及流式细胞仪检测转染瘤细胞膜表面IL-21的表达,通过对小鼠脾细胞的增殖作用鉴定表达的IL-21的生物学活性.将瘤苗接种小鼠后,通过观察小鼠肿瘤体积和生存率分析瘤苗的抗瘤性,并检测了瘤苗免疫鼠的细胞免疫活性.结果 正确构建了pcDNA3.1/IL-21-GPI重组载体,膜表达的IL-21有良好的生物学活性,制备的瘤苗能发挥抗肿瘤效应,其机制与免疫鼠细胞免疫活性增强有关.结论 成功构建了具有抗肿瘤活性的GPI修饰的IL-21瘤苗,为其进一步抗肿瘤免疫治疗研究奠定了基础.     

2007～2008年度蠕形螨感染情况的调查

目的了解本校大学生蠕形螨感染情况,探讨蠕形螨感染与生活习惯,面部疾患．皮肤性状等的关系,战少蠕形螨对皮肤的进一步伤害及在大学生中的传播。方法采用透明胶纸法对800名在校本科生进行蠕形螨检查,同时对个人习惯,皮肤性状、面部疾患等相关因素进行问卷调查。结果大学生蠕形螨感染率为15.91％;皮肤性质,有无面部疾患,个人关注程度、是否共用毛巾,是否用肥皂以及除螨药物与蠕形螨感染密切关系。结论蠕形螨感染率真高低与是否使用肥皂以及除螨药物有相关性。     

IL-21 gpi和sGM-CSF共同修饰的瘤苗构建及其抗肿瘤效应

目的:构建膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF(sGM-CSF)双表达瘤苗,并对其抗肿瘤效应及其机制作初步探讨.方法:用分子生物学方法构建双表达IL-21 gpi和sGM-CSF重组质粒,将鉴定过的重组质粒以脂质体转染B16F10细胞制成瘤苗,用流式细胞仪检测转染瘤苗IL-21 gpi和sGM-CSF的表达.以瘤苗治疗荷瘤鼠,经观察小鼠肿瘤体积、生存率来分析瘤苗的抗瘤性,并检测了瘤苗治疗鼠的细胞免疫活性.结果:正确构建了pRSC/IL-21 gpi-sGM-CSF重组质粒,转染细胞可很好地表达膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF,制备的瘤苗能有效地发挥抗肿瘤效应,其机制与瘤苗治疗鼠的脾细胞增殖活性、NK细胞及CD8+细胞细胞毒活性增强有关.结论:成功构建了具有抗肿瘤活性的膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF双表达瘤苗,为进一步抗肿瘤免疫治疗研究奠定了基础.     

右美托咪定对小鼠树突状细胞免疫功能的影响

目的研究右美托咪定对小鼠树突状细胞功能的影响及作用机制。方法分离获取小鼠骨髓原性树突状细胞鉴定成功后,体外分组培养,以正常培养基作为空白组,实验组为含有10μmol·L-1右美托咪定的正常培养基,对照1组和对照2组分别为含有10μmol·L-1酚苄明及同时含有10μmol·L-1右美托咪定和酚苄明的正常培养基,分别于96孔板培养24 h、Transwell 24孔板培养4 h和6孔板培养24 h。测定实验药物对小鼠树突状细胞活力、细胞迁移数量及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响情况。结果空白组、实验组、对照1组和对照2组的树突状细胞活力分别为(99.96±0.19)%,(62.61±0.08)%,(98.74±0.45)%和(79.25±0.23)%,树突状细胞迁移细胞数量分别为(3684.68±38.36),(1836.37±21.38),(3659.90±27.92)和(2670.06±27.61)个,树突状细胞培养上清液的TNF-α浓度分别为(67.26±1.51),(353.81±6.29),(67.92±1.45)和(169.63±2.89)pg·mL-1,IL-6浓度分别为(29.64±1.20),(511.29±12.97),(29.38±1.88)和(230.17±2.19)pg·mL-1,IL-1β浓度分别为(46.51±2.43),(436.97±5.86),(46.19±1.29)和(147.30±3.57)pg·mL-1,实验组与其他组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论右美托咪定能够影响小鼠树突状细胞的活力、迁移能力以及促炎性细胞因子的分泌,其作用机制跟α肾上腺素受体的激活有关。     

肿瘤抗原P1A与细胞因子mGM-CSF共表达载体的构建和表达

目的：构建并鉴定细胞因子mGM-CSF和肿瘤特异抗原PIA共表达载体，为研究新型的肿瘤疫苗提供新的策略。方法：以PCR方法从pCI-neo／PIA中扩增出PIA编码基因片段，构建于pRSC质粒上；再从pORF-mGM-CSF中扩增出mGM-CSF基因片段．插入pRS-PIA重组质粒PIA基因的上游。以酶切和DNA测序进行鉴定。并将鉴定过的重组质粒以脂质体法转染7721细胞．用RT-PCR法鉴定转染细胞中PIA基因和mGM-CSF基因的表达。结果：经酶切鉴定和DNA测序证实mGM-CS17和PIA重组质粒构建正确，并在转染此质粒的7721细胞中检测出了PIA和mGM-CSF基因的表达。结论：成功构建mGM-CSF和PIA的共表达载体，为研制新型肿瘤疫苗奠定了基础。