Lnc-FAM83D-3通过miR-504-3p—FAM83D轴调控三阴性乳腺癌的机制研究

目的探讨长链非编码RNA FAM83D 3 (lnc FAM83D 3) 在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达及其对HCC1937、MDA MB 231生物学行为的影响及作用机制。方法通过TCGA数据库分析lnc FAM83D 3在乳腺癌中的表达情况及病理相关性。RT qPCR检测lnc FAM83D 3和微小RNA 504 3p (miR 504 3p）在组织标本和乳腺癌细胞系中的表达；慢病毒转染干扰lnc FAM83D 3表达，利用MTT、细胞划痕实验、侵袭实验和流式细胞术检测实验组与对照组细胞功能改变。使用生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分析lnc FAM83D 3和miR 504 3p及FAM83D之间的关系。FISH实验证实lnc FAM83D 3在胞浆内的表达，Western bolt检测下游蛋白变化情况。结果在乳腺癌组织、癌细胞HCC1937和MDA MB 231中lnc FAM83D 3的表达增加(P<001)。与对照组相比，干扰lnc FAM83D 3表达后，TNBC细胞株增殖、迁移和侵袭能力降低，凋亡比例增加; miR 504 3p表达上升，FAM83D表达下降；双荧光素酶报告基因实验结果显示lnc FAM83D 3靶向调控miR 504 3p表达，miR 504 3p进一步负向调控FAM83D的水平。结论Lnc FAM83D 3在TNBC细胞株中表达增加且通过抑制miR 504 3p促进FAM83D表达，影响乳腺癌恶性生物学行为。     

转染miRNAs降低脂多糖诱导的大鼠肠微血管内皮细胞水通道蛋白1表达

目的探讨大鼠肠微血管内皮细胞miRNAs对脂多糖(LPS)诱导的水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法用机械吹打法及胰蛋白酶消化法从大鼠空肠分离微血管内皮细胞,用免疫荧光染色鉴定细胞;用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测AQP1和miRNAs的表达; miRNAs芯片分析结合在线软件筛选调控AQP1表达的miRNAs,瞬时转染miRNAs模拟体及对照序列进行进一步验证。结果肠微血管内皮细胞v WF免疫荧光染色为阳性。用LPS(0、0. 1、1和10 mg/L)处理细胞后,AQP1 m RNA表达水平随LPS浓度增加呈下降趋势,其中1和10 mg/L LPS处理细胞后AQP1 m RNA表达水平与对照组相比有明显差异(P0. 05和P0. 001);与对照组相比,LPS处理组有22个表达上调2倍以上的miRNAs及9个下调2倍以上的miRNAs;软件预测显示芯片结果中的miR-423-5p、miR-874-5p、miR-361-3p、miR-219a-5p、miR-27b-3p、miR-133b和miR-666可与AQP1启动子区互补配对; miR-874-5p、miR-361-3p、miR-133b和miR-666在LPS处理后的肠微血管内皮细胞中表达上调;转染miR-133b和miR-666模拟体后可使AQP1 m RNA表达水平下调。结论 LPS可通过上调miR-133b和miR-666表达水平,间接抑制AQP1的表达,继而影响肠黏膜通透性。