非靶向串联质谱分析人早期胚胎级别与其培养液中相关氨基酸和肉碱水平的关联

目的检测体外培养不同级别早期人胚胎的培养液中氨基酸和肉碱水平, 探讨基于质谱的微量分析技术用于评价胚胎体外发育潜能的可行性。方法从2022年6至12月在临沂市人民医院生殖医学科接受体外受精-胚胎移植治疗的不孕夫妇中, 收集女方年龄31.5(26.5, 33.25)岁, 且获卵数在8～20个的不孕夫妇, 从中随机挑选30对不孕夫妇收取其第3天细胞胚的培养液共126份, 依据其所对应的胚胎的形态级别分为优(n=43)、中(n=49)和差3(n=34)组。通过液相色谱-质谱联用检测不同培养液中氨基酸和肉碱水平。通过方差分析比较不同组间氨基酸与肉碱水平的差异, 通过Pearson相关分析氨基酸与肉碱水平的关联, 偏最小二乘法分析氨基酸和肉碱水平与胚胎评估级别的关联。结果甲硫氨酸/苯丙氨酸(比值)在优胚、中胚和差胚3组间分别为3.09±1.67、4.00±1.19和4.99±2.04, 差异有统计学意义(F=7.09, P<0.05), 优胚与中胚间(t=-0.91, P<0.05)、优胚与差胚间(t=-1.91, P<0.05)及中胚与差胚间(t=-0.99, P<0....     

母源平衡易位致1q21.3-qter重复和Xpter-p11缺失患儿的遗传学分析

目的:对一例疑似智力障碍、多发畸形、多体毛并伴高胆红素血症的患儿进行遗传学分析,探讨异常染色体核型与临床表型的相关性。方法:患儿及其家庭成员进行常规染色体G显带核型分析,应用染色体微阵列(chromosomal microarray analysis,CMA)和荧光原位杂交(fluorescence in situ h...     

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞的基因表达与胚胎发育潜能的相关性

目的探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)的不孕患者卵巢颗粒细胞基因的转录表达差异与早期胚胎发育潜能的相关性。方法选择3对年龄、体质指数、卵巢储备功能相近, 并使用促性腺激素释放激素(gonadotrophin-releasing hormone, GnRH)拮抗剂治疗的PCOS不孕症患者, 其中胚胎数少者为病例组(n=3), 多者为对照组(n=3)。收集患者的卵巢颗粒细胞并提取总RNA, 进行基因转录表达差异的显著性分析及功能富集分析。结果与对照组相比, 病例组76个基因显著上调, 110个基因显著下调。与进周期日相比, 对照组人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin, HCG)日的雌二醇(estradiol, E2)水平显著升高。与对照组相比, 病例组KRT7基因表达显著上调, CCNYL2表达显著下调。基因本体条目富集差异表达基因发现, 与染色体分离、调控细胞周期、脂肪酸代谢等相关的基因显著富集;调控细胞组装、细胞分化、负向调控细胞周期、负向调控发育、细胞外调节蛋白激酶(extracellular...     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

两个遗传性并多指(趾)家系致病基因突变分析

目的探讨2个并多指(趾)畸形(SPD)家系的致病基因。方法收集2019年1月、2020年12月就诊于临沂市人民医院的2个SPD家系的临床资料, 采集先证者及家系成员静脉血样本, 提取基因组DNA, 对先证者行全外显子组测序筛选候选基因变异;采用Sanger测序对2个家系成员验证其突变位点;采用生物信息学软件PolyPhen-2和PROVEAN对突变位点的致病性进行预测分析, 结合美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南对突变位点进行致病性判断。结果家系1三代成员中共有5例患者(男2例、女3例), 先证者为8岁女性, 表现为右手第3、4指并指, 指蹼融合和远端指甲融合, 其余手指活动自如, 双脚未见异常;家系2三代成员中共有4例患者(均为女性), 先证者为4岁女性, 表现为双手第3、4指并指, 示指侧弯。全外显子组测序分别在2个SPD家系中检出同源盒D13(HOXD13)基因c.917G>A和c.917G>T突变, 且2个突变均呈现基因型-表型共分离, 其中HOXD13基因c.917G>T突变未见数据库收录, 为新发杂合错义突变。生物信息学软件预测这2个突变位点均为...     

1例Pitt-Hopkins综合征患儿的临床及遗传学分析

目的 探讨1例智力障碍、特殊面容、语言发育迟缓及行为异常患儿的遗传学病因，为遗传咨询及产前诊断提供依据。方法 选取2022年11月17日在临沂市人民医院遗传咨询门诊就诊的1例智力障碍、特殊面容、语言发育迟缓及行为异常患儿为研究对象，对患儿及其父母进行全外显子测序（WES），应用生物信息学分析筛选致病性变异，通过Sanger测序对先证者及其父母进行变异位点验证并对胎儿进行产前诊断。结果 基因检测发现患儿的TCF4基因存在c.1486+1G>T杂合变异，为新生变异（de novo mutation），在受检者父母中均未检出此变异。TCF4基因与Pitt-Hopkins综合征（OMIM#610954）相关，为常染色体显性遗传。经检索HGMD、PubMed、1000 Genomes等数据库，该变异位点未被收录，根据ACMG指南，该变异判读为致病性变异（PVS1+PS2+PM2＿P）。经产前诊断提示腹中胎儿未携带该变异。结论 TCF4基因的c.1486+1G>T变异是该患儿的致病原因，该患儿为1例Pitt-Hopkins综合征患儿。     

一例性发育异常患儿的遗传学分析CSCD

目的探讨1例性发育异常(disorders of sex development,DSD)患儿的致病原因。方法应用染色体核型分析技术、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术、染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)技术和性腺组织病理活检技术对患儿进行遗传学检测及致病原因探讨。结果综合各种检测技术,患儿分子细胞核型分析结果为46,X,psu idic(Y)(p11.32)[72]/45,X[28].ish psu idic(Y)(p11.32)(SRY++,DYZ3++).arr[hg19]Yp11.32(118552-512055)×0,Yp11.32p11.31(515916-2640819)×1-2,Yq12(59055438-59336104)×1-2,Yp11.31q11.23(2650425-28799654)×1-2。CMA结果显示在Y染色体短臂的拟常染色体区域1(PAR1)末端存在393.5 kb片段的缺失;约50%的细胞在PAR1区域(Yp11.32p11.31)存在2.1 Mb片段的重复;约50%的细胞在Y染色体Yp11.31q11.23区域存在26.1 Mb片段的重复;约50%的细胞在PAR2区域存在280.6 kb片段的重复。结论46,X,psu idic(Y)(p11.32)[72]/45,X[28]嵌合核型是导致患儿性发育异常的原因。     

一例性发育异常患儿的遗传学分析

目的探讨1例性发育异常(disorders of sex development, DSD)患儿的致病原因。方法应用染色体核型分析技术、荧光原位杂交(fluorescencein situ hybridization, FISH)技术、染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis, CMA)技术和性腺组织病理活检技术对患儿进行遗传学检测及致病原因探讨。结果综合各种检测技术, 患儿分子细胞核型分析结果为46, X, psu idic(Y)(p11.32)[72]/45, X[28]. ish psu idic(Y)(p11.32)(SRY++, DYZ3++). arr[hg19] Yp11.32(118 552-512 055)×0, Yp11.32p11.31(515 916-2 640 819)×1-2, Yq12(59 055 438-59 336 104) ×1-2, Yp11.31q11.23(2 650 425-28 799 654)×1-2。CMA结果显示在Y染色体短臂的拟常染色体区域1(PAR1)末端存在393.5 kb片段的缺失;约...