miR-34a-5p抑制K562细胞红系分化

目的探索miR-34a-5p对K562细胞红系分化的影响。方法分别用miR-34a-5p模拟物和反义抑制寡核苷酸转染K562细胞,用real-time PCR法检测过表达或干扰效率,并进一步用流式细胞术和联苯胺染色法检测K562细胞向红系的分化情况;通过Western blot方法检测miR-34a-5p的靶基因。结果 miR-34a-5p在K562细胞红系分化过程中呈现表达下降趋势;在K562细胞中过表达miR-34a-5p可抑制hemin诱导的红系分化(P0.05);反之,干扰K562内源的miR-34a-5p表达会对K562红系分化产生促进作用(P0.01);另一方面,miR-34a-5p通过靶向抑制c-MYB的表达抑制细胞向红系分化。结论 miR-34a-5p通过抑制c-MYB在K562细胞早期红系分化过程中发挥促进作用。     

miR-196a-5p抑制小鼠胚胎干细胞的自我更新

目的 研究miR-196a-5p在小鼠胚胎干细胞(mESC)自我更新中的功能.方法 定量PCR法确定miR-196a-5p在mESC早期分化过程中的表达.在胚胎干细胞中过表达miR-196a-5p类似物,通过集落形成实验、细胞周期分析、碱性磷酸酶染色和Oct4染色确定miR-196a-5p过表达对mESC自我更新及增殖的影响.结果 miR-196a-5p在mESC早期分化过程中表达上升(P＜0.05),在mESC中过表达miR-196a-5p类似物后,ESC的集落形成及增殖能力被明显抑制(P＜0.01),碱性磷酸酶活性下降,Oct4蛋白水平也出现明显下降.结论 miR-196a-5p具有抑制mESC自我更新的能力,在mESC早期分化过程中可能发挥重要作用.     

microRNA-144～451基因簇促进红系分化

目的 探索microRNA-144～451基因簇在红系分化过程中的功能及调控机制.方法 用real-time PCR法检测microRNA-144和microRNA-451的表达;用ChIP结合real-time PCR的方法检测GATA-1和EKLF在microRNA-144～451基因簇上游的结合及调控;使用microRNA-144和microRNA-451模拟物转染K562细胞,并用联苯胺染色和real-time PCR方法检测K562细胞向红系分化;用Western blot方法检测红系分化抑制因子GATA-2表达.结果 microRNA-144和microRNA-451在K562细胞红系分化过程中呈现表达逐渐上升趋势;转录因子GATA-I和EKLF可以结合在microRNA-144 ～ 451基因簇并激活microRNA-144或microRNA-451的表达;在K562细胞中过表达microRNA-144或microRNA-451均可促进hemin诱导的红系分化;另一方面,microRNA-144和microRNA-451可以通过抑制GATA-2的表达促进细胞向红系分化.结论 microRNA-144～ 451基因簇在红系分化过程中受到GATA-1和EKLF的激活调控,同时通过抑制GATA-2的表达促进红系发育成熟.     

在CoCl_2模拟低氧条件下HIF-1α直接调控PPARγ2的表达

目的探讨在Co Cl2模拟低氧条件下,低氧诱导因子1α(HIF-1α)对于过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)是否具有调控作用。方法用real time PCR和Western blot检测Co Cl2模拟低氧条件下PPARγ2和低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及蛋白表达。用双荧光报告系统检测HIF-1α对于PPARγ调控的剂量依赖性,并通过染色质免疫共沉淀技术进一步验证。结果 Co Cl2模拟低氧条件下PPARγ2和HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平均随着诱导时间的增加而增加。过表达HIF-1α导致PPARγ2表达上调(P0.01),而抑制HIF-1α则导致PPARγ2表达下调(P0.05)。HIF-1α对PPARγ2基因的表达具有正调控作用,通过结合于PPARγ2上游调控区特定的低氧应答元件(HRE)而调控其表达。结论 PPARγ2通过HIF-1α依赖的途径在Co Cl2模拟的低氧条件下发挥低氧适应作用。     

载脂蛋白Eε4和ε2等位基因与胎儿宫内发育的关系

目的 研究载脂蛋白E(ApoE)ε4和ε2等位基因与胎儿宫内发育的关系.方法 以聚合酶链反应.限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法 检测1418名北京协和医院出生人群的ApoE基因型,计算等位基因频率,收集其出生时的相关指标.通过单因素分析和多因素Logistic回归分析比较ApoE ε4和ε2等位基因与新生儿发育状态的关系.结果 本研究人群中ApoE ε2、ε3和ε4 等位基因频率分别为8.11%、83.39%和8.50%.单因素分析结果 表明,携带ε2等位基因者的出生体质量指数(ponderal index,PI)构成差异有统计学意义(χ2=4.87,P=0.027),其头围、胎盘质量和孕周构成差异没有统计学意义.多因素分析结果 表明,调整了性别、年龄、出生头围、胎盘质量、孕周、产次和产妇年龄等因素,携带ApoE ε2等位基因与小PI呈负相关(χ2=5.077,P=0.024).没有发现携带ApoE ε4等位基因与新生儿发育状态存在关联性.结论 ApoE ε2等位基因对PI有保护作用,没有发现ApoE ε4等位基因与胎儿宫内发育有关.     

成人骨髓红细胞中胎儿珠蛋白基因在培养条件下重新活化

ＲＴ－ＰＣＲ检测发现,成人骨髓红系祖细胞在培养条件下胎儿珠蛋白基因高水平表达,比较培养条件与体内造血微环境的差异,提示细胞因子,特别是胎儿期特异的细胞因子可能是导致胎儿珠蛋白基因重新活化的原因,研究细胞因子对珠蛋白基因开关的影响,可能提供一种应用细胞历子组合治疗β－地中海贫血和镰刀型贫血的方法。     

miR-320e促进胰腺癌细胞系耐药

目的研究miR-320e在胰腺癌耐药中的作用及其机制。方法用定量PCR的方法确定miR-320e在胰腺癌耐药细胞系中的表达,进而通过在胰腺癌细胞中过表达miR-320e,检测细胞对5-FU化疗药物敏感性、细胞增殖的影响。同时通过报告基因实验及Western blot法确定miR-320e的靶基因。结果在胰腺癌耐药细胞系(PATU8988/5-FU)中miR-320e表达显著上升(P0.01)。在胰腺癌细胞PATU8988和PANC-1中过表达miR-320e后,细胞对5-FU化疗药物出现耐受,IC_(50)显著上升(P0.01),细胞增殖速度加快(P0.01)。PDCD4是miR-320e的直接靶基因,miR-320e的过表达显著降低了PDCD4蛋白水平。结论 miR-320e的高表达可显著促发胰腺癌细胞化疗耐药,可作为胰腺癌耐药检测的分子标志及新的治疗靶点。