β-内酰胺类抗生素药物促进红细胞的老化清除可能会恶化药物诱发的免疫溶血性贫血

目的 通过体外实验检测药物处理红细胞前后,细胞表面各种与细胞衰老及清除相关指标,以及吞噬细胞对红细胞的吞噬差异性,分析β-内酰胺类抗生素对红细胞老化和清除的影响。方法 使用β-内酰胺类抗生素(青霉素、头孢吡肟、头孢哌酮和头孢他啶)处理红细胞,然后在药物处理后0 h和24 h时通过流式细胞仪检测红细胞表面PS(磷脂酰丝氨酸)和清除相关CD标志物(CD35、CD47、CD55和CD59)的变化。通过显微镜观察,计算在药物处理后0 h和24 h棘细胞比例。通过单核细胞单层测定(MMA)检测药物处理后的红细胞被吞噬的情况。通过以上结果分析β-内酰胺类抗生素对红细胞老化和清除的影响。结果 与未处理的红细胞相比,药物处理的红细胞在细胞表面显示出更高的PS水平(0 h vs 24 h:青霉素9.42%vs 93.30%、头孢吡肟3.88%vs 57.27%、头孢哌酮4.71%vs 75.75%和头孢他啶3.05%vs 43.19%,),以及棘细胞比率(0 h vs 24 h:青霉素7.33%vs 86%,头孢吡肟2.67%vs 52.67%,头孢哌酮3.33%vs 67.67%和头孢他啶3.33%v...     

选择性siRNA干扰FCGRⅡA影响THP-1吞噬调理红细胞

为探讨能否通过小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰影响巨噬细胞Fcγ受体介导的吞噬作用,采用FCGRⅡA siRNA转染佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)活化人单核细胞THP-1,并设NO-TARGET、GAPDH、no-siRNA(1640)为对照。培养48～72h后,用FCM分析CD14+细胞的CD32、CD32b分布,用CD14的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)值作为内参,得到CD32、CD32b相对MFI值;用Western blotting观察CD32a、CD32b的蛋白表达水平;进行单核细胞单层实验(monocyte monolayer assay,MMA),结合流式细胞术分析THP-1中能吞噬调理红细胞的吞噬百分比。采用配对t检验分析FCGRⅡA组与各对照组间的分布差异。Western blotting结果证实,FCGRⅡA组CD32a量明显减少(分别为NO-TARGET组、GAPDH组、1640组的22%、42%、31%),而CD32b不降...     

应用流式细胞术对自身免疫性溶血性贫血患者自身抗体掩盖下血型同种抗体检测的研究

目的 在自身免疫性溶血性贫血(自免溶贫)患者血样的检测中,自身抗体往往易被同种抗体掩盖,本研究试图通过对流式细胞术与传统血清学方法的比较研究,分析两者对自身抗体中混合同种抗体的检测能力差异,为自免溶贫患者输血前检测提供更敏感可靠的方法.方法 随机选择使用5例人源抗-D及4例抗-E分别与经验证不具血型特异性的自身抗体按比...     

组织血型抗原Ley低表达的人巨核细胞系的建立和鉴定

目的 应用CRISPR/cas9技术,建立血小板Le^y抗原差异化表达的人白血病巨核细胞系,为后续研究Le^y抗原在血小板活化中的作用奠定基础。方法 选取人巨核细胞白血病细胞DAMI,用Western Blot及流式细胞法确定Le^y抗原的表达量;用实时定量PCR方法检测编码Le^y抗原合成相关的岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase, FUT)基因的表达,确定候选敲除基因,用CRISPR/Cas 9敲除候选FUT基因,使用流式细胞仪分选出Le^y抗原低表达的细胞群,培养细胞并鉴定Le^y抗原的表达量。用活细胞染色结合流式细胞法监测细胞增殖。结果 DAMI细胞上具有大量的Le^y抗原表达;FUT1和FUT4在DAMI中有相对较高的mRNA表达,可能对Le^y抗原的表达起关键作用;敲除FUT1后的DAMI细胞系Le^y抗原的表达量与对照相比有显著降低,细胞增殖能力与野生型细胞相比没有显著改变。结论...     

抗-D抗体的定量测定与效价测定的比较性研究

目的 Rh系统血型同种抗体是造成严重新生儿溶血疾病的最主要因素.在发达国家和地区,RhD同种抗体监测通常使用抗体定量方法,而在我国通常采用效价测定方法.本研究针对效价测定法与抗体定量法的相关性进行比较,研究效价测定法是否可以真实反映抗体效力.方法 本研究中,对17份效价大于64的抗-D血浆样本的效价与抗体定量法进行比较...     

人O型外周血淋巴细胞制备人单克隆抗-A细胞株

目的以正常O型人外周血淋巴细胞为实验对象,制备能稳定分泌人单克隆抗-A或抗-B的杂交瘤细胞株,在本实验室建立人血型单克隆抗体制备流程。方法使用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs),从狨猴B95-8细胞培养上清收获EB病毒(Epstein-Barr virus),用于转化B淋巴细胞,血清学微量板法筛选能够分泌目标抗体的细胞孔。显微镜下挑选分离单个克隆的细胞团,分泌特异性抗体的转化细胞与SHM-D33瘤细胞进行融合,经HOTD选择性培养,血清学筛选,得到分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。结果从随机O型个体的外周血淋巴细胞,成功构建持续稳定分泌人源IgM单克隆抗-A的细胞株。结论本研究提供一种可行的技术路线,为从人外周血淋巴细胞制备有诊断和筛选价值的人源血型单克隆抗体细胞株奠定基础。