增强定向造血分化信号提高人胚胎干细胞向自然杀伤细胞生成的效率北大核心CSCD

目的 探讨在造血分化阶段增强定向造血(DH)信号对人胚胎干细胞(hESCs)分化形成的自然杀伤(NK)细胞(也称为hESC-NK细胞)生成效率和功能的影响。方法 hESC(H1)经离心法形成拟胚体，在诱导造血分化的第0至8天，对照组加入BMP4、VEGF、bFGF、SCF等细胞因子；而增强定向造血(DH)组在对照组的基础上添加WNT激动剂(CHIR99021)和Nodalactivin抑制剂(SB431542)；进而采用一致的方法分化形成NK细胞。使用流式细胞术和靶细胞K562共培养等方法分析造血分化效率、NK细胞生成效率、体外效应功能及表面受体等相关分子表达。结果 相较于对照组，DH组在造血分化阶段第8天动脉生血内皮细胞(CD34+DLL4+)数量显著增加，原始造血相关细胞(CD34-CD43+)显著降低(P <0.05)。在NK细胞分化第28天分析发现，DH组NK细胞(CD45+CD56+)数量显著增加，效应功能相关分子IFN-γ、Granzyme B、Perforin、CD107a虽微弱上升，但无统计学差异，激活性受体CD16a和CD69明显增加，但NKP46显著降低，抑制性受体NKG2A显著增加，CD96显著降低(P <0.05)。结论 在hESC向造血分化过程中增强定向造血信号，在不影响NK细胞体外功能的情况下显著提高NK细胞生成效率和CD16a表达，为提高hESC-NK细胞或iPSC-NK细胞生成效率提供了一种新的思路。