逝去的武侠梦

每年六月，莘莘学子都会踏入高考考场，迎接一段新的人生。我很羡慕他们，多么美好的年华，多么青葱的岁月，而每每到这个时候，我越发会想起几十年前，我高中的那段“习武”岁月。谨以此文，纪念我们老去的青春……     

CD44、SOX9、MMP9、Vimentin在翼状胬肉中的表达及其意义

目的 研究CD44、SOX9、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase,MMP9)及波形蛋白(Vimentin)在原发性翼状胬肉组织中的表达及其意义.方法 对25例原发性胬肉组织和5例正常结膜组织的组织切片用CD44、SOX9、MMP9及Vimentin蛋白的抗体进行免疫组织化学染色,观察上述蛋白在翼状胬肉组织和正常结膜组织组织内的表达,对结膜上皮内CD44和SOX9染色阳性的细胞进行计数,并比较翼状胬肉组织与正常结膜组织内的细胞阳性率.结果 HE染色结果显示,正常结膜和翼状胬肉组织均由上皮层和固有层组成;正常结膜的上皮层次较少,固有层含有少量血管;翼状胬肉的上皮细胞层次明显增多,固有层内含有密集分布的血管.免疫组织化学染色阳性细胞计数的统计学数据表明,正常结膜组织内CD44阳性细胞率为15％±3％,翼状胬肉组织内为70％±15％;正常结膜组织内SOX9阳性细胞率为17％±4％,翼状胬肉组织内为75％±13％;两组的细胞阳性率差异均有显著统计学意义(均为P＜0.001).MMP9及Vimentin阳性细胞广泛分布于翼状胬肉组织的上皮及上皮下基质层内,在正常结膜组织内阳性细胞呈散在分布,翼状胬肉组织的免疫组织化学染色强度高于正常结膜组织.结论 CD44、SOX9、MMP9及Vimentin在翼状胬肉组织中高表达,可能在翼状胬肉的发生、发展中起着重要作用.     

转位分子蛋白对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的 利用相对分子质量为18000的转位分子蛋白(TSPO)的特异性配体1-(2-氯苯基)-N-(1-甲基丙基)-异喹啉-3-氨甲酰(pk11195)研究TSPO对人脑胶质瘤U251增殖的影响及机制,为人脑胶质瘤的治疗寻找新的靶点. 方法 体外常规培养U251细胞,应用100、50、25、12.5、6.25 μmol/L pk11195作用2h后MTT比色法检测细胞的增殖活性,同时设对照组(加入等量溶剂);台盼蓝染色法检测对照组和50、6.25 μmol/L pk11195组细胞死亡率的变化;Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting和免疫荧光法检测细胞TSPO的表达;2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)探针法和GSH试剂盒分别检测细胞内活性氧(ROS)和GSH的水平;曲氟胸苷(JC-1)染色法检测线粒体膜电位;荧光素酶法检测细胞内ATP含量. 结果 MTT检测显示50、25μmol/L pk11195组细胞存活率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);台盼蓝染色显示50 μmol/L pk11195组细胞死亡率、GSH水平低于对照组和6.25 μmol/L pk11195组,差异有统计学意义(P＜0.05);6.25、50 μmol/L pk11195组细胞凋亡率、TSPO的表达量较对照组降低,且50μmol/L pk11195组低于6.25 μmol/Lpk11195组,差异有统计学意义(P＜0.05);6.25、50 μmol/Lpk11195组ATP的含量高于对照组,且50 μmol/Lpk11195组高于6.25 μmol/L pk11195组,差异有统计学意义(P＜0.05).pk11195组ROS水平较对照组降低,而细胞膜电位增高. 结论 TSPO具有促进U251细胞凋亡、抑制其增殖、类似于抑癌基因的作用.     

一只明代宣德炉

民国初年，湘南蝗虫肆虐，粮食歉收．殷天引一家在镇上率先断了粮，断粮之后，一家人就吃上了草根树皮。     

大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞向成骨细胞和神经元的诱导分化

目的:建立鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,ECTO-MSCs)的体外培养方法,探讨该细胞的干细胞特性(stemness)和分化潜能.方法:在观察ECTO-MSCs在大鼠鼻腔呼吸黏膜内分布特征的基础上,体外培养扩增ECTO-MSCs,并用干细胞标志蛋白巢蛋白、CD133、C...     

纤维蛋白胶支架搭载外胚间充质源雪旺细胞移植修复大鼠脊髓损伤

目的:观察外胚层间充质源的雪旺细胞在损伤脊髓中的迁移情况、组织相容性,评价纤维蛋白支架搭载该细胞移植治疗急性脊髓损伤的疗效。方法:(1)成年大鼠鼻中隔活体取出部分鼻黏膜制成细胞悬液,自然纯化并扩增鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs),用雪旺细胞诱导培养基将其诱导为雪旺细胞并用红色荧光进行标记。(2)建立脊髓针刺损伤模型并移植标记细胞,术后10 d,观察雪旺细胞在组织内的存活和迁移情况,并评价其组织相容性。(3)健康SD大鼠60只,制作脊髓横断模型,随机分为3组:单纯脊髓横断(SCI)组、纤维蛋白胶(Fibrin)移植组和细胞-支架(F-C)移植组,术后每周进行运动行为学评分。术后12周取出脊髓组织,采用免疫组织化学染色和Western Blot方法检测脊髓横断部位神经纤维重建和髓鞘再生情况,以及神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化。结果:(1)EMSCs来源的雪旺细胞体外分化扩增良好,免疫荧光结果显示其高表达S100、GFAP、P75、CNpase等表面标志蛋白。(2)移植进入体内的雪旺细胞存活良好并发生一定距离的迁移,且与脊髓内神经纤维有良好的相容性。(3)术后2周开始直至12周,F-C组较SCI组大鼠后肢运动功能有较明显恢复,差异有显著意义(P<0.05);Fibrin组亦有一定程度的恢复,但程度较轻;SCI组几乎没有恢复迹象。免疫组化染色结果显示:SCI组断端未见神经轴索通过,Fibrin组可见少量神经纤维通过,F-C组可见多量神经网络状结构。Western Blot检测结果显示:F-C组神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)相对含量均高于Fibrin组和SCI组(P<0.05)。结论:外胚层间充质源雪旺细胞移植对于脊髓损伤后的组织学和功能学恢复有明显促进作用,纤维蛋白做为移植修复脊髓损伤的生物支架具有良好的应用前景。     

成人骨髓间质干细胞向神经干细胞的诱导分化

目的:建立诱导成人骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向神经干细胞分化的体外培养方法,为细胞移植修复神经系统损伤提供种子细胞.方法:原代贴壁培养成人BMSCs并传代培养至第3代时,将细胞接种于铺有琼脂糖的培养瓶,用神经干细胞培养基(含B27,EGF,bFGF...     

嗅黏膜神经干细胞的体外培养和向酪氨酸羟化酶阳性神经元的分化

目的:建立体外培养和诱导嗅黏膜神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化的方法,探讨该细胞的干性和分化特性。方法:首先用含10%胎牛血清的DMEM/F-12混合培养基培养成年大鼠嗅黏膜细胞,当细胞贴壁后将培养基更换为含表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF),不含血清的干细胞培养基,以促进干细胞增殖形成神经球。将神经球取出用干细胞培养基悬浮培养以纯化扩增神经干细胞。应用干细胞相关蛋白Nestin及CD133的抗体对神经干细胞进行免疫荧光染色,观察上述蛋白在细胞的表达。用Neurobasal培养基(含B27、NGF、ATRA及SHH)培养扩增后的神经干细胞,诱导其向神经元分化。用神经丝蛋白(neurofilament-200,NF-200)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)抗体对分化的细胞进行免疫荧光染色;用免疫印迹法检测上述细胞裂解样品内的相应标志蛋白的电泳条带。结果:嗅黏膜神经干细胞高表达Nestin及CD133两种神经干细胞标志蛋白;干细胞经诱导分化后其形态具有神经元特征,并且高表达NF和TH两种神经细胞标志蛋白。结论:贴壁/悬浮序贯培养方法可体外纯化扩增嗅黏膜神经干细胞,该细胞可分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元。