环缩酚肽抑制视网膜表达VEGF及PECAM基因和血管增生

[目的]观察两种环缩酚肽衍生物(Hep-A和Hep-B)对氧诱导的小鼠视网膜表达血管内皮生长因子(VEGF)和细胞黏附分子(PECAM;ICAM-1;VCAM-1)基因的影响及血管增生的变化.[方法]建立氧诱导的血管增殖性视网膜病变模型,12 d开始给小鼠皮下注安慰剂(第1组,n=7)、Hep-A 10 mg/kg(第2组,n=6)或者Hep-B 10 mg/kg(第3组,n=6),每天两次.5 d后取出左侧眼,分离视网膜并抽提RNA,用荧光定量PCR测出上述基因含量,并分别求出每个靶基因与标准基因S16含量的比率;右眼经心脏荧光素灌注后取眼球做视网膜平铺片,用图像分析软件定量计算视网膜新生血管的面积.[结果]视网膜中VEGF/S16的mRNA比率为:第1组(0.554±0.050),第2组(0.355±0.037),第3组(0.287±0.051);PECAM/S16为:第1组(2.050±0.249),第2组(1.228±0.153),第3组(1.027±0.210).经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜中VEGF基因表达分别减少36%和48.2%(P=0.001);PECAM基因表达分别减少40.1%(P＜0.05)和49.9%(P＜0.01);而VCAM-1和ICAM-1表达无明显差异.视网膜平片检测视网膜新生血管面积:第1组为(1.06±0.03)mm2/眼,第2组为(0.17±0.01)mm2/眼,第3组为(0.11±0.01)mm2/眼;经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜新生血管的面积明显减少(P＜0.001).[结论]两种环缩酚肽衍生物均抑制氧诱导的小鼠视网膜表达VEGF和PECAM基因,并抑制其形成视网膜新生血管.     

Norrin基因对人视网膜微血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的：体外培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞（HRCECs），并探讨Norrin基因高表达对HRCECs增殖和周期的影响。方法： 体外分离、培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞，抗第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定细胞。利用脂质体lipofectamine 2000将AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染HRCECs，RT-PCR、免疫组化和Western blotting方法检测Norrin/myc的表达确定转染效率。采用MTT法测定转染后细胞的增殖能力，流式细胞术分析其细胞周期变化。结果： 所培养的细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化为强阳性。AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染后 24 h，RT-PCR显示实验组Norrin表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。转染后48h免疫组化及Western blotting均显示实验组细胞Myc表达强于阴性对照组。MTT法显示细胞增殖高于对照组，细胞周期检测示实验组G2期细胞高于阴性对照组，P<0.01。结论：脂质体能成功转染AP-3myc-hNorrin/pRK5进入HRCECs。Norrin高表达能促进HRCECs的增殖，并促进细胞DNA合成，提示Norrin在视网膜血管生成过程中可能具有重要作用。     

色素上皮衍生因子在氧诱导血管增生性视网膜病变小鼠中的表达

目的探讨氧诱导血管增生性视网膜病变小鼠视网膜中色素上皮衍生因子(PEDF)mRNA及蛋白的表达变化及意义。方法80只出生后2 d的C 57/BL 6小鼠随机分为模型组(64只)和对照组(16只),出生后第7天模型组小鼠和母鼠一起放入氧气含量为75%的饲养箱中饲养,出生后第12天回到正常大气环境中饲养;对照组小鼠始终在正常大气环境中饲养。出生后第7、12、17天时,模型组及对照组在每个时间点分别取小鼠4只,荧光素心脏灌注后行视网膜铺片,荧光显微镜下观察血管分布和形态;提取模型组小鼠出生后第7、8、10、12、12.5、13、14、15、17、19天时间点的视网膜总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PEDF、血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子(H IF)-1αmRNA的表达变化;分别取模型组和对照组出生后第17天时的小鼠眼球,冰冻切片后通过免疫组织化学染色检测PEDF、VEGF、H IF-1α蛋白在视网膜组织中的表达变化。结果模型组小鼠在出生后第17天时视网膜有大量新生血管形成,视盘周围见大范围无灌注区;PEDF mRNA表达在缺氧24 h后开始下调,72 h达到下降高峰,随后逐渐恢复正常水平;VEGF、H IF-1αmRNA则在高氧环境下表达下调,缺氧状态下迅速升高,于缺氧48 h时到达高峰,然后缓慢下降;PEDF/VEGF、PEDF/H IF-1α比值在缺氧状态下显著降低。出生后第17天时,模型组小鼠视网膜中PEDF蛋白表达显著弱于对照组小鼠;而VEGF、H IF-1α蛋白表达则是模型组显著强于对照组。结论PEDF mRNA及蛋白在氧诱导血管增生性视网膜病变小鼠视网膜中明显下降,其趋势与VEGF和H IF-1α的变化相反,PEDF/VEGF、PEDF/H IF-1α表达平衡失调,可能是缺氧状态下视网膜新生血管生成的重要原因。     

福建地区真菌性角膜炎的流行病学和临床特点研究

目的 研究福建地区真菌性角膜炎(fungal keratitis,FK)的流行病学和临床表现特点.方法 回顾性分析2006年7月至2008年7月住院确诊的FK患者176例,分析其流行病学和临床表现方面的特点.结果 10～12月发病率最高,农村居民106例(60.2%),男女患病率比为1.5:1,41～60岁为发病集中年龄,仅39.8%有明确外伤史,在153例先于外院就诊的患者中,仅有28例(18.3%)接受过角膜刮片和(或)真菌培养检查;菌丝苔被、伪足、前房积脓发生率分别为94%、65%和55%;菌属鉴定结果:前两位分别为:镰刀菌属(60.4%)和曲霉菌属(25.4%);保守治疗治愈率80.9%,眼球保存率为97.5%;镰刀菌属菌丝在角膜中的生长方式表现为水平、斜行和垂直生长,曲霉菌属全部表现为斜行和垂直生长.结论 福建地区FK在10～12月为高发期,多发于中老年的农村居民,多数无明显诱因发病,菌丝苔被、伪足和前房积脓依次为前三位临床体征,致病菌属以镰刀菌属和曲霉菌属为主,它们在角膜内地生长方式有所不同,大多数药物保守治疗有效,加上手术治疗绝大多数能保住眼球.基层医院对本病的诊治有待加强.     

福建地区真菌性角膜炎的调查

目的 研究福建地区真菌性角膜炎的临床特点.方法 回顾分析2006年7月至2008年7月住院确诊的真菌性角膜炎患者176例的临床资料.结果 患者以农村居民为主,男女患病率比为1.5:1,41～60岁为发病集中年龄,仅39.8%有明确外伤史.在153例先于外院就诊的患者中,仅有28例(18.3%)接受过角膜刮片和(或)真菌培养检查;菌丝苔被、伪足、前房积脓发生率分别为94%、65%和55%;菌属鉴定结果:前2位分别为镰刀菌属(60.4%)和曲霉菌属(25.4%);保守治疗治愈率80.9%,眼球保存率97.5%.结论 福建地区真菌性角膜炎多发于中老年的农村居民,多数无明显诱因,菌丝苔被、伪足和前房积脓依次为前3位临床体征,致病菌属以镰刀菌属和曲霉菌属为主,大多数药物保守治疗有效,加上手术治疗绝大多数能保住眼球,基层医院对本病的诊治有待加强.     

不剥除后弹力层的深板层角膜内皮移植术治疗大泡性角膜病变的初步临床观察

目的 探讨不剥除后弹力层的深板层角膜内皮移植术治疗大泡性角膜病变的可行性和临床疗效.方法 前瞻性系列病例研究,收集自2007年9月至2009年1月在我院住院的大泡性角膜病变患者,进行不剥除后弹力层的深板层角膜内皮移植术.术中均未处理患眼角膜内皮.直接用植入镊将制作好的直径为8.5mm的角膜内皮植片植入受体前房,气体顶压植片进行固定.术后随访6～20个月,观察植片贴附和植片移位等情况,对手术前后的视力进行比较,检查植片透明度和角膜内皮细胞密度.结果 5例患者术后植片与受体内皮面始终贴附良好;1例患者术后第2天出现层间裂隙,经改俯卧位后植片贴附良好.6例患者植片均透明,其中5例患者术后最佳矫正视力均有不同程度的提高;1例患者术后视力同术前,视力不提高的原因为眼外伤造成的视神经萎缩.6例术后平均角膜内皮细胞密度为(1648±384)个/mm~2.随访过程均未发现有免疫排斥反应发生.结论 不剥除后弹力层的深板层角膜内皮移植术治疗大泡性角膜病变具有安全、有效、操作简便等特点,有望成为治疗该病的手术方式之一.     

米诺环素抑制谷氨酸诱导的大鼠视网膜神经细胞凋亡

目的：观察米诺环素对谷氨酸诱导的大鼠视网膜神经细胞凋亡的抑制效应及其作用机制。方法:取原代培养的SD乳鼠视网膜神经细胞，随机分为正常对照组、米诺环素对照组（米诺环素20 μmol/L）、谷氨酸组（谷氨酸1 mmol/L）和米诺环素治疗组（米诺环素20 μmol/L＋谷氨酸1 mmol/L）。干预1 h后采用Annexin V/PI流式细胞仪计数凋亡细胞数量，同时检测Rh123以评估线粒体膜电位改变。干预12 h后行MTT检测细胞活性；另取细胞培养上清液做一氧化氮合酶（NOS）的活力单位检测。结果:干预1 h后，流式细胞仪Annexin V/PI检测凋亡细胞比例：正常对照组、米诺环素对照组、谷氨酸组、米诺环素治疗组分别为5.1％、4.3％、15.2％、8.3％。Rh123各组阳性率分别为67.1%、54.2%、27.5%、32.4%。干预12 h后，MTT检测各组细胞吸光度均值分别为： 0.093±0.008、0.099±0.012、0.038±0.008、0.088±0.016。治疗组与正常组之间无显著差异（P>0.05），谷氨酸组与其它各组之间均存在显著差异（P<0.05）。NOS活力单位检测，以正常对照组均数为1，另3组与其比值的均数分别为： 0.987±0.219、1.513±0.472、1.176±0.259。其中谷氨酸组与其它3组之间存在显著差异（P<0.05）。结论:20 μmol/L米诺环素可显著减轻谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡，其作用机制与稳定线粒体膜电位，以及抑制NOS活性有关。     

桡动脉穿刺优于静脉穿刺采集新生儿血标本

目的 探讨采集新生儿血标本更合适的途径.方法 选择2004年全年住院的新生患儿375例,分为两组,2004年6月以前为静脉组共202人,2004年6月以后为桡动脉组共173人.采用同一抗凝剂的试管,将两组的穿刺后的效果进行比较.结果 桡动脉穿刺和静脉穿刺的结果有显著差异.结论 采用桡动脉穿刺采集新生儿血标本效果好,值得推广.     

中等职业学校学生心理健康状况调查分析

目的了解中等职业学校学生的心理健康状况,为开展针对性心理健康教育提供依据。方法选用心理健康诊断测验(MHT)对一所中等职业学校各年级各专业全体学生施测,分析数据并结合平时观察得出结论。结果在收回的1601份可信问卷中,有心理问题者686例,发生率为42.8%;年级越低发生率越高(P<0.01),男女生无显著性差异(P>0.05);各种心理问题按发生率高低排列依次为自责倾向、恐怖倾向、学习焦虑、身体症状、对人焦虑、冲动倾向、过敏倾向、孤独倾向;较严重的总焦虑倾向者106例,发生率为6.6%。结论中等职业学校学生较普遍存在心理问题,但严重者不多。     

玻璃体腔注射雷珠单抗与康柏西普治疗早产儿视网膜病变疗效比较

目的：比较早产儿视网膜病变(ROP)患儿采用玻璃体腔注射雷珠单抗(IVR)与康柏西普(IVC)两种药物的治疗效果。

方法：回顾性研究。纳入我院2015-01/2023-06玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗的ROP患眼1 100眼。根据治疗药物的不同,将患儿分为IVR组和IVC组。根据ROP的病变程度分为急进型ROP(A-ROP)、Ⅰ区1型ROP和Ⅱ区1型ROP。通过倾向性匹配分析(PSM)匹配后对两组复活与再次治疗情况进行比较。随访时间至少至术后3 mo。

结果：在Ⅱ区1型ROP中,IVR组和IVC组的病变复活率及再次治疗率均有差异(P<0.05); A-ROP和Ⅰ区1型ROP中两组病变复活率及再次治疗率均无差异(P>0.05)。Ⅰ区1型ROP复活风险及再次治疗风险高于Ⅱ区1型ROP,药物的选择和首次治疗矫正胎龄是术后病变复活及再次治疗的影响因素。

结论：玻璃体腔注射IVR或IVC对Ⅱ区1型ROP的首次治愈效果有明显差异,且IVC组的复活率和再次治疗率远低于IVR组。