DHA对糖尿病认知障碍大鼠海马神经元SDF-1/CXCR4通路的影响

目的:研究DHA对糖尿病认知障碍大鼠空间学习记忆的作用,探讨DHA对糖尿病大鼠海马神经元SDF-1/CXCR4表达的影响。方法:采用SD大鼠,随机分为对照组、对照+DHA组、糖尿病组和糖尿病+DHA组,以高脂膳食加小剂量链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,ELISA法、PCR法检测海马神经元SDF-1、TNF-α含量,免疫组化法检测CXCR4受体表达情况,Western Blot法检测海马神经元JNK磷酸化水平。结果:DHA可在一定程度上改善糖尿病大鼠学习记忆能力。糖尿病大鼠海马神经元TNF-α和p-JNK水平升高,SDF-1水平明显降低,CXCR4受体阳性神经元数量明显减少。DHA抑制TNF-α和JNK磷酸化,增加CXCR4的表达,升高SDF-1的含量。结论:DHA可减轻糖尿病大鼠的认知损伤,其机制可能与提高SDF-1水平,抑制海马神经元JNK磷酸化,降低炎性因子水平有关。     

京尼平通过线粒体动力学缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡

目的:观察京尼平(genipin)对H2O2诱导Neuro-2a细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养Neuro-2a细胞,利用400μmol/L H2O2诱导6 h建立Neuro-2a凋亡模型。处于对数生长期的Neuro-2a细胞随机分为对照组、模型组、京尼平组、京尼平预处理后模型组。MTT法测定细胞存活率;倒置相差显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA(2,7-二氯荧光素二乙酸酯)染色、流式细胞仪检测细胞内线粒体活性氧(ROS)的产生;qRT-PCR检测UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1 mRNA表达;Western blot测定UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率增加,ROS生成量升高,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达增加,Mfn2蛋白及mRNA表达降低,UCP4及mRNA蛋白表达无明显变化。提前给予京尼平(40μmol/L)干预后,与模型组相比,细胞存活率提高,细胞凋亡率降低,ROS生成量减少,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达减少,Mfn2蛋白及mRNA表达升高,但UCP4蛋白及mRNA表达无明显变化。以上指标相比,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:适宜浓度的京尼平能缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡,其机制可能与抑制UCP2蛋白表达,促进线粒体融合进而改善线粒体功能有关。     

解偶联蛋白在肝性脑病小鼠黑质和前额叶皮层中表达变化

目的:观察不同时间内肝性脑病(Hepatic encephalopathy,HE)小鼠黑质和大脑前额叶皮层中线粒体解偶联蛋白2/4(Uncoupling Protein 2/4,UCP2/4)的变化及可能的关系。方法:取C57/BL小鼠,随机分为sham组、HE 1 d、4 d、7 d四组。HE组小鼠腹膜腔内注射硫代乙酰胺(TAA),sham组注射同等剂量的Na Cl。用Elisa检测小鼠血清中血清氨水平;随后分别运用Western Blot和RT-q PCR测定UCP2/4在黑质和前额叶皮层全组织蛋白和线粒体蛋白水平变化以及mRNA水平中的表达差异。结果:(1)肝性脑病组小鼠血氨水平较对照组小鼠明显升高(P0.01);在蛋白水平检测发现,(2)肝性脑病黑质中UCP2在总组织和线粒体水平表达均明显增加(P0.001),而UCP4却无明显变化(P0.05);(3)在肝性脑病前额叶皮层中UCP2和UCP4在总蛋白水平和线粒体提纯蛋白水平中均明显增加(P0.05);在RT-q PCR水平检测,(4)肝性脑病小鼠黑质中UCP2水平显著增加(P0.01),而UCP4未见明显变化(P0.05);(5)肝性脑病小鼠前额叶皮层发现UCP2(P0.001)和(P0.01)UCP4在mRNA水平均显著升高。结论:肝性脑病小鼠黑质和前额叶皮层中线粒体解偶联蛋白2和4发挥着重要的作用。     

基于FISH技术研究线粒体分裂蛋白Drp1 mRNA在小鼠杏仁复合体的分布

目的:最新研究表明,对线粒体的分裂进行精密调控的关键蛋白是Drp1(dynamin-related protein 1,Drp1)。杏仁复合体属于中枢神经系统边缘系统的一部分,功能重要但是非常复杂。本研究拟通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对Drp1在杏仁复合体的分布特点进行描述。方法:本实验通过自行设计Drp1基因的引物、合成探针,同时采用(FISH)进行染色观察,得到Drp1 mRNA在小鼠杏仁核复合体的分布特点。结果:研究发现,Drp1 mRNA几乎分布于全部杏仁核,且在内侧杏仁核、皮质杏仁核和基底杏仁核的表达水平非常高。亚细胞水平研究进一步表明,Drp1 mRNA全部位于神经元胞体,特别是核周区域,而在突起处未见其表达。结论:以上结果提示,Drp1可能通过调节杏仁复合体处神经元的线粒体的分裂状态,参与动物的内脏活动、防御功能以及情绪变化。但是具体机制尚需进一步研究。