多重逆转录聚合酶链反应检测主要上呼吸道病毒

目的：建立用多重逆转录聚合酶链反应（mRT-PCR）检测甲1型、甲3型、乙型流感病毒以及呼吸道全胞病毒（RSV）A型、B型等主要上呼吸道病毒的方法，以快速检测上呼吸道感染主要病毒及对甲型、甲亚型、乙型流感病毒在上海地区人群感染、流行情况设计。方法：采用经MDCK细胞接种培养的甲3型、乙型流感病毒和Hep-2细胞接种培养的RSV A型、B型标准毒株病毒液，以及甲1型、甲3型、乙型流感病毒和RSV A型、B型混合毒株病毒液，使用5组引物，分别为HA1-5al和Hal-3al（甲1型流感病毒）、HA3-5al和HA3-3al和HA3-3al（甲3型流感病毒）、NP-5b1和NP-3bl（乙型流感病毒）、RSVAF和RSVAR(RSVA型)、RSVBF和RSVBR(RSVB型)，经mRT-PCR，琼脂糖凝胶电泳，于紫外灯下观察上述病毒特异核苷酸条带。结果：甲1型、甲3型、乙型流感病毒，RSVA型、B型分别在431，210，390，334，183bp处出现清晰的5条DNA条带。结论：应用5组引物，mRT-PCR可用于快速检测临床上呼吸道感染标本中的流感病毒和RSV，并可对其进行分型，对上呼吸道病毒感染性疾病的诊断和流感的监测方面是非常重要的。     

广东地区何杰金病EB病毒BNLF1基因片段及其表达产物的检测和意义

目的研究爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）与恶性淋巴瘤的关系。方法对广东地区５１例何杰金病（ＨＤ）进行了ＥＢＶ的检测。结果ＥＢＶ－ＢＮＬＦ１基因片段ＰＣＲ扩增阳性率为８０．４％，明显高于淋巴结反应性增生组（Ｐ＜０．０１）。ＰＣＲ产物经克隆测序证实为ＢＮＬＦ１基因片段，但未发现突变。原位杂交检测结果为４１例ＰＣＲ阳性的ＨＤ中１５例阳性，阳性信号可见于肿瘤和非肿瘤细胞的核上。ＢＮＬＦ１基因的表达产物潜在膜蛋白（ＬＭＰ１）的表达局限在ＨＤ的肿瘤细胞上，５１例中２５例阳性（４９％）。１５例２０岁以下ＨＤ中ＥＢＶ－ＢＮＬＦ１片段及其表达产物的检出率明显高于２０岁以上ＨＤ组及同年龄段淋巴结反应性增生组（Ｐ＜０．０１）。结论结果表明广东地区半数以上ＨＤ肿瘤细胞中有ＥＢＶ感染并表达ＬＭＰ１，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。还提示青少年何杰金病与ＥＢＶ潜伏感染的关系更为密切。     

非霍奇金淋巴瘤中EB病毒BNLF_1片段及其表达产物的检测及意义

为研究ＥＢ病毒与非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）的关系，采用ＰＣＲ、原位杂交、ＬＳＡＢ（ｌａｂｅｌｉｎｇｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｖｉｎｂｉｏｔｉｎ）免疫组化技术，检测３２例ＮＨＬ和３３例反应性增生淋巴结中的ＥＢＶＢＮＬＦ１基因片段及其表达产物潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）。ＮＨＬ中ＥＢＶＢＮＬＦ１ＰＣＲ扩增阳性率为５３％，明显高于反应性增生淋巴结组２７％（Ｐ＜０．０５），其中５例Ｔ细胞淋巴瘤全部阳性。１７例ＰＣＲ阳性的ＮＨＬ中５例原位杂交阳性。ＬＭＰ１检测仅２例阳性。结果表明本组病例半数以上ＮＨＬ中有ＥＢＶ感染，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。     

甲3型、乙型流感病毒在MHL混合细胞中增殖的研究

[目的]建立MHL混合细胞瓶分离培养流感病毒的方法，为进行流感监测及临床快速诊断打下基础。[方法]采用MDCK、HEP—2、LLC混合细胞培养瓶和MDCK单一细胞培养瓶，同时分别接种甲3型和乙型流感病毒标准毒株，并设立阴性细胞对照组，观察甲3型和乙型流感病毒毒株在混合细胞瓶和MDCCK细胞瓶中的细胞病变效应(CPE)、血凝滴度和单克隆抗体荧光染色情况。[结果]病毒血凝滴度分别均为1：160，经1：5稀释的甲3型和乙型流感病毒接种MHL混合细胞瓶和MDCK细胞瓶经37℃、48h培养后，感染甲3型病毒细胞出现细胞拉网、团聚病变现象，感染乙型流感病毒细胞则出现明显细胞固缩、脱落现象，MDCK单一细胞培养瓶CPE强于混合细胞培养瓶：37℃、72h培养后，检测血凝滴度，感染甲3型流感病毒的MDCK细胞和混合细胞均为1：40。感染乙型流感病毒的MDCK细胞为1：120，MHL混合细胞为1：20；单克隆荧光抗体检测，感染甲3型和乙型流感病毒的MDCK细胞和混合细胞均呈阳性。[结论]应用MDCK、HEP—2，IL-2混合细胞瓶分离、培养，不仅可对甲型流感爆发进行流行病学监测，同时还可分离鉴定其它呼吸道病毒，利于临床诊断、治疗和预防。