小鼠原位肝癌移植模型中髓系来源抑制性细胞的表达

目的 观察小鼠原位肝癌移植模型中髓系来源抑制性细胞(MDSCs)的表达.方法 将10只BALB/c小鼠随机分为两组:正常组和荷瘤组,后组是将H22肝癌细胞注射到肝左外叶,制作小鼠原位肝癌移植模型.10d后处死小鼠.流式细胞术检测两组小鼠外周血、骨髓、脾脏及肝脏组织中MDSCs的表达.结果 荷瘤组小鼠外周血、骨髓和脾脏中的MDSCs比例为[(47.73±6.00)、(71.90±4.30)、(11.21±1.19)％],均明显高于正常组小鼠[(18.33±2.31)、(59.03±4.50)、(5.82±0.58)％];正常小鼠肝组织中MDSCs占肝内白细胞6.5％,荷瘤小鼠肝癌组织、癌旁组织中MDSCs占肝内白细胞分别为43.8％和12.8％.结论 在小鼠原位肝癌移植模型中,MDSCs表达明显上调,为研究MDSCs在肝癌发生发展中的作用提供了良好的动物模型.     

COX2抑制剂对HSC调控肝癌移植瘤免疫微环境的效应研究

目的研究环氧化酶(COX2)在肝星状细胞(HSC)促进肝癌发生发展中的机制。方法将30只Balb/c小鼠随机分成3组:H22组、HSC组、SC-236组。H22组皮下注射单纯小鼠肝癌细胞H22,HSC组皮下注射H22和HSC,SC-236组皮下注射H22和用选择性COX2抑制剂SC-236预处理的HSC。从第5天开始每3天测量小鼠肿瘤大小。第25天将小鼠处理,测量肿瘤大小、质量,流式细胞术检测3组小鼠脾脏中CD4、CD8,调节性T细胞以及骨髓来源抑制性细胞(MDSC)的表达。结果 HSC组的肝癌大小、质量明显大于H22组,而SC-236组的肝癌大小、质量显著小于HSC组。流式细胞术检测显示HSC组的脾脏CD4、CD8,调节性T细胞以及MDSC的表达均显著高于H22组,而SC-236组的CD4、CD8,调节性T细胞以及MDSC的表达均显著低于HSC组。结论在肝癌微环境中,肝星状细胞(HSC)可能通过COX2调节小鼠体内免疫微环境从而促进肝癌发生发展,本研究为肝癌的治疗提供了一定的实验基础。     

HDAC抑制剂丙戊酸通过减少MDSCs蓄积抑制肝癌的生长

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(VPA)抑制肝癌发生发展的机制。方法将16只Balb/c小鼠注射小鼠肝癌细胞H22建立肝癌原位模型,随机分成2组:对照组和VPA组。术后第2天VPA组小鼠每天腹腔注射VPA(200 mg/kg),对照组每天腹腔注射等量的生理盐水。10 d后将小鼠处死,观察肿瘤大小及小鼠肝脏质量,利用流式分析小鼠脾脏部位CD4、CD8、NK细胞、MDSCs水平及肿瘤部位MDSCs的比例。建立小鼠肝癌原位模型,利用小动物活体成像分析MDSCs经1 mmol/L VPA处理后在体内迁移情况。结果 VPA抑制肝癌原位模型中肝癌生长,上调脾脏CD4、CD8水平,抑制肿瘤和脾脏部位MDSCs蓄积。MDSCs经VPA处理后向肿瘤和脾脏迁移的能力减弱,而MDSCs向骨髓的迁移的能力没有受影响。结论在肝癌微环境中,VPA能够抑制MDSCs向肿瘤和脾脏部位迁移、改善肝癌微环境,从而抑制肝癌生长。本研究为肝癌的治疗提供了一定的实验基础。     

不同流式抗体分选小鼠原位肝癌模型中髓系来源抑制性细胞的比较

目的　比较不同的流式抗体分选小鼠原位肝癌模型骨髓中的髓系来源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）。方法　建立BALB/c小鼠原位肝癌移植模型，10天后分离荷瘤小鼠骨髓细胞，分别进行CD11b、Gr-1单色标记及CD11b和Gr-1双色标记后，进行流式分选。比较这三种方式分选的MDSCs纯度、活力，并检测分选的细胞精氨酸代谢酶1( arginase-1，Arg-1)和诱导型一氧化氮合酶( inducible nitricoxide synthase，iNOS) 的表达，并通过活性氧检测试剂盒检测MDSCs活性氧(reactive oxygen species，ROS) 表达。结果 三种方法分选到的细胞活力和纯度都大于90％。CD11b标记进行分选操作最为方便，易于统一，但纯度略差；Gr-1标记进行分选时，细胞群不好确定，但纯度高；双色标记进行分选纯度最高。分选的细胞高表达Arg-1、iNOS和ROS。结论 三种抗体标记方法均能从小鼠原位肝癌模型骨髓中的分选到纯度高、活力好的MDSCs，而用CD11b单色标记操作方便，易于统一，可作为首选方法。MDSCs的成功分选，对于后续开展MDSCs的生物学和免疫学功能研究奠定了基础。