MicroRNA-429靶向抑制occludin及对糖尿病小鼠肠上皮屏障功能的影响

 目的: 探讨microRNA-429(miR-429)在体内对糖尿病(DM)小鼠肠上皮细胞(IECs)内闭合蛋白(occludin,Ocln)表达及肠上皮屏障功能的影响。方法: 构建糖尿病小鼠模型(腹腔内注射链脲佐菌素);通过尾静脉注射antagomiRNA-429抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达;real-time PCR检测miR-429和Ocln mRNA的表达变化;Western blotting及免疫组化检测Ocln蛋白表达变化;气相色谱法检测小鼠尿液乳果糖/甘露醇比值;显色基质鲎试剂法检测小鼠血浆LPS浓度。结果: 尾静脉注射antagomiRNA-429能显著抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达,注射后6 d恢复至正常小鼠IECs表达水平。抑制DM小鼠IECs内miR-429表达后,Ocln表达显著提高(P<0.05),小鼠尿液乳果糖/甘露醇比值及血浆LPS水平均明显下降(P<0.05)。结论: AntagomiRNA-429能有效抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达,进而使小鼠IECs内Ocln的表达升高,从而使肠上皮屏障功能部分恢复。     

四君子汤治疗肝硬化的转录学机制分析

目的 探讨四君子汤改善肝硬化病理改变的作用,并且研究四君子汤对肝细胞的转录组学改变情况,探索潜在的分子作用机制。方法 采用四氯化碳（CCl₄）诱导大鼠产生肝硬化,并用标准剂量的四君子汤灌胃治疗肝硬化大鼠12周,通过肝组织HE染色、Masson染色,从病理学改变评估四君子汤治疗肝硬化效果。随后采取Illumnia高通量测序,同步对转录组学测序结果筛选差异表达基因（DEG）,并进行生物聚类分析、KEGG信号通路聚类分析。结果 与正常SD大鼠相比,CCl₄诱导的肝硬化SD大鼠肝组织出现广泛的假小叶,转录组学测序共筛选出402个DEG。GO富集分析发现DEG主要富集于细胞周期相关生物学功能。KEGG分析提示DEG明显富集于细胞增殖、分化通路。CCl₄诱导肝硬化大鼠在经过四君子汤治疗后,肝脏组织中的假小叶明显减少,共有411个DEG。GO以及KEGG分析提示DEG分别富集于细胞周期生物学功能以及细胞增殖、肿瘤相关信号通路。结论 四君子汤可有效缓解CCl₄所诱导的肝硬化,其中细胞增殖相关Wnt通路受到明显调控,可能是四君子汤治疗肝硬化的分子机制。     

胰岛素受体亚型改变及相关通路活化在糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖中的作用

 目的:探讨胰岛素受体亚型改变及其相关下游通路活化情况在糖尿病小鼠肠上皮细胞异常增殖中的作用。方法:用腹腔注射链脲霉素的方法制作糖尿病小鼠模型,采用增殖细胞核抗原标记法比较糖尿病小鼠及对照组小鼠肠上皮细胞的增殖情况。利用RT-PCR法测定胰岛素受体亚型表达比例在2组中的差异。采用real-time PCR及Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测2组之间胰岛素受体相关通路各分子MEK1/2、ERK1/2、PI3K以及Akt的表达情况。结果:糖尿病组小鼠的小肠上皮细胞增殖指数显著升高(P<0.05),且细胞中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值也明显升高(P<0.05)。糖尿病小鼠肠上皮细胞中MEK1、MEK2和ERK1/2的mRNA水平及磷酸化蛋白水平均高于对照组(P<0.05)。结论:糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖可能与其中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值增高及其相关MEK/ERK通路的激活有关。     

转录组测序分析糖尿病对小鼠AOM/DSS诱导结直肠癌发生的影响

目的探讨糖尿病(DM)对小鼠化学诱导结直肠癌发生的影响。方法采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠诱导db/db小鼠和野生型(WT)小鼠产生结直肠癌,通过Illumina高通量测序技术筛选DM组与非DM组小鼠结肠肿瘤癌旁组织之间的差异表达基因,并对差异表达基因进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能注释与富集分析。结果与WT小鼠相比,DM小鼠结直肠的平均肿瘤体积增加(P <0.05)。DM小鼠与WT小鼠共有1656个差异表达基因(q <0.05),其中有70个mRNA在整个实验过程中均差异表达,主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类基因包括H2-Ea-ps、H2-Q1、H2-DMb2、H2-Q4均在DM小鼠中表达上调(q <0.05)。GO富集分析发现免疫反应的调控和激活途径、抗原加工与提呈途径、抗原结合是显著富集的类型(q <0.05)。KEGG富集分析发现与免疫反应相关的抗原加工与呈递是显著富集的类型(q<0.05)。结论 DM状态下,小鼠免疫反应激活,MHCⅡ类基因表达存在显著差异,可能参与促进结直肠癌的发生发展。     

高糖状态通过WIF1-Wnt/β-catenin通路调控结肠肿瘤细胞的增殖

目的 分析高糖状态对结肠肿瘤细胞增殖的影响,并探讨Wnt抑制因子1（WIF1）通过Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路影响高糖状态下结肠肿瘤细胞增殖的机制。方法 用不同浓度的D-葡萄糖处理结肠肿瘤细胞株SW620细胞,通过实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白免疫印迹法测定增殖相关基因的表达,行细胞增殖活性检测、细胞计数实验,用细胞平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,采用qPCR和蛋白免疫印迹法测定WIF1和β-catenin的表达。转染siRNA和过表达质粒调控WIF1的表达后,检测WIF1对SW620细胞增殖能力和β-catenin表达水平的影响。结果 随着糖浓度的增加,SW620细胞的增殖能力增强（P均< 0.05）,WIF1的表达下降而β-catenin的表达增高（P均< 0.05）。下调WIF1的表达,SW620细胞的增殖能力增强且β-catenin的表达增高（P均< 0.05）,而过表达WIF1后,SW620细胞的增殖能力受到抑制且β-catenin的表达下降（P均< 0.05）。结论 高糖状态下WIF1表达的下降,可能通过活化Wnt/β-catenin通路促进高糖状态下结肠肿瘤细胞的增殖。     

感染相关性血小板减少症273例临床分析

目的探究血小板减少与感染的关系。方法回顾性分析2010年6月～2011年6月我院收治的273例急、慢性感染相关性血小板减少症（非血液系统疾病）的临床资料。结果 273例中男150例,女123例,平均年龄58.2（18～96）岁。血小板计数（9～99）×109/L,平均（68.1±23.0）×109/L。引起血小板减少症的感染相关的病因分布：消化系统占40.3%（110例）,呼吸系统33.7%（92例）,泌尿系统6.6%（18例）,神经系统2.9%（8例）,皮肤2.6%（7例）,五官1.8%（5例）,心血管系统1.5%（4例）,其他系统3.7%（10例）,多系统7.0%（19例）。有明确病原学证据的感染196例（71.8%）,包括病毒占28.2%（77例）,细菌28.2%（77例）,真菌15.4%（42例）;未能明确病原体的感染28.2%（77例）。疾病伴随症状和辅助检查：发热27.1%（74例）,血培养阳性8.4%（23例）,痰培养阳性25.3%（69例）,中性粒细胞增多24.5%（67）。细菌感染引起的血小板减少最低值较病毒感染低,差异有统计学意义（P〈0.05）;细菌与真菌、病毒与真菌感染引起血小板减少最低值无显著差异。结论感染相关性血小板减少症中以病毒、细菌感染最常见,其次为真菌感染;与病毒感染相比,细菌感染引起血小板降低更明显。