AMPKα2基因shRNA重组质粒的构建以及在氯离子介导的大鼠心肌缺氧/复氧损伤中的作用

 目的：构建AMP活化的蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)基因shRNA重组表达质粒,转染H9c2心肌细胞,探讨其在氯离子(Cl^-)介导的心肌细胞缺氧/复氧（A/R）损伤中的作用。方法：构建靶向AMPKα2基因的shRNA重组质粒pSuper-AMPKα2 shRNA,转染H9c2细胞;Western blotting法测定AMPKα2的蛋白表达情况。实验分5组,每组重复6次：(1) Control组;(2) A/R组;(3) Cl^--free A/R组;(4) pSuper+Cl^--free A/R组;(5) pSuper-AMPKα2 shRNA+ Cl^--free A/R组。处理结束后,生化自动分析仪测定LDH活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧（ROS）水平,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果：重组表达质粒pSuper-AMPKα2 shRNA经测序证明构建正确;转染心肌细胞后,AMPKα2蛋白表达明显下降;Cl^--free A/R组较之A/R组细胞存活率升高,LDH含量下降,细胞凋亡减少,ROS生成减少,SOD和GSH-Px活性增加;转染pSuper-AMPKα2 shRNA质粒后,阻断了Cl--free液的保护作用,且ROS生成增加,SOD和GSH-Px活性也下降。结论：成功构建pSuper-AMPKα2 shRNA重组质粒。AMPKα2基因沉默阻断了Cl^--free液对心肌细胞A/R损伤的保护作用。     

高效毛细管电泳法分离多巴胺和5-羟色胺

建立毛细管电泳分离分析多巴胺和 5一羟色胺的方法。采用自由区带电泳法 (CZE) ,4 0mmol/L硼砂缓冲液 2 0PSI气压进样 5s ,定电流 75 μA分离 10min ,二极管阵列PDA检测器检测 ,应用 2 0 0nm检测波长 ,结果显示两种物质完全分离。     

Bax在14-3-3γ对抗脂多糖诱导的心肌细胞损伤中的作用

目的:探讨14-3-3γ对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的作用与抑制Bax向线粒体移位的关系。方法:采用原代SD乳鼠心肌细胞,随机分为4组:对照组;LPS组,LPS10mg/L加至培养基中6h;pFLAG+LPS组,空载质粒pFLAG转染至心肌细胞,24h后处理同LPS组;pFLAG-14-3-3γ+LPS组,重组质粒pFLAG-14-3-3γ转染至心肌细胞,24h后处理同LPS组。四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞存活率,全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸酶(CPK)值,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测细胞14-3-3γ蛋白水平、细胞浆及线粒体的Bax蛋白水平。结果:LPS致心肌细胞损伤,与对照组相比,LPS处理使细胞存活率明显下降(P<0.01),LDH、CPK值明显升高(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01),促使Bax蛋白从胞浆向线粒体移位,转染重组质粒pFLAG-14-3-3γ使14-3-3γ在心肌细胞内高表达后可明显逆转LPS所致的损伤,上述各指标均有所改善,并抑制Bax蛋白向线粒体的移位。结论:14-3-3γ对抗LPS所致心肌细胞损伤与抑制Bax从胞浆向线粒体移位有关。     

中药小包装饮片的特点与管理

中药小包装饮片具有洁净度较高、剂量相对准确、减少浪费、提高工作效率、便于患者监督等优势，也存在不易鉴别、剂量受限、保管困难、价格较高、不太环保等弊端。在管理及使用过程中，尤需注意验收、摆放、养护等问题。     

中西药物的联合使用

随着中西药结合的深入发展,中西医药的联合应用在临床治疗上日益广泛,各类中西药联合组方的制剂亦日渐增多。目前,越来越多的临床和药理实验证明,中西药物合理并用或组方制剂联用得当、合理,可相互为用,取长补短,使疗效增强,病程缩短,标本兼顾,并能发挥单独使用中药或西药所没有的治疗作用,尤其是对一些疑难重症,有时可取得意想不到的效果。然而,如果中西药配伍不当,并用不合理,可是药效降低或消失,毒副反应增加,或引起药源性疾病,甚至危及生命,造成死亡。因此,掌握药物配伍禁忌,总结临床经验,合理联用中西药物,避免不良后果,保障患者的用药安全,对医药工作者来说尤为重要。1中西药物合理联用中西药合理联用有显著的协同作用,并能降低毒副反应,减少剂量,减少禁忌,扩大适应范围。1.1增效协同麻黄与青霉素联用,治疗细菌性肺炎,有协同增效作用;②茵陈蒿及含茵陈蒿的制剂与灰黄霉素联用,能增加其溶解度,促进其吸收,从而增强灰黄霉素的抗菌作用;③石菖蒲、地龙与苯妥英纳等抗癫痫药联用,能提高抗癫痫效果;④甘草与氢化可的松在抗炎抗变态反应时同用,甘草甜素可抑制氢化可的松在体内的代谢灭活,而使疗效增强;⑤黄连、黄柏与四环素、痢特灵、磺胺甲基异唑合用,可...     

美国视光医师教育模式的浅析与启示

美国的视光医师教育已经超过百年历史,形成了一套完整的视光高等教育体系。包括采用全美统一的标准化考试（optometry admission test,OAT）选拔申请者;四年的教育课程包括医学基础课、视光学专业课和大量的医院实习课;毕业生需参加全美统一的视光医师执照考试才能获得行医资格;毕业后可选择申请为期1年的专科住院医师规范化培训以获得在某个领域的专长;每年参加继续教育才能定期更新注册视光医师执照等。通过分析比较中美眼视光教育在生源、培养时间、毕业要求和工作上的差异,以探索适合我国国情的眼视光教育发展模式。     

p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法采用原代培养乳鼠心肌细胞,建立A/R损伤模型及APC、LPS预处理保护模型。实验结束后测定p38MAPK磷酸化蛋白表达及14-3-3γ蛋白表达,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡、线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放、流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 LPS预处理对随后心肌A/R损伤有类似APC的保护作用,同时伴随p38MAPK的磷酸化水平升高和14-3-3γ蛋白表达升高;给予SB203850特异性阻断p38MAPK通路,则14-3-3γ蛋白表达明显下调,并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率下降,心肌细胞的凋亡指数升高,mPTP开放加剧,线粒体膜电位降低。结论 LPS预处理对心肌细胞A/R损伤有保护作用,其机制可能是通过激活p38 MAPK,上调14-3-3γ的表达实现。     

品管圈活动对提高中药饮片养护质量的效果评价

目的：通过在中药饮片库药师中开展品管圈活动,提高养护效率,减少饮片损耗。方法：2012年11月中药库药师自发成立品管圈小组,并按照主题选定、计划拟定、对策实施与检讨、效果确认等十个步骤开始活动。结果：中药库饮片质量检查存在问题品种由活动前的2.85%降低为1.07%,退换货品种由活动前的平均2.33种/月降低为1.42种/月。结论：通过开展品管圈活动,使得中药库现存管理问题初步解决,不合理损耗降低,中药饮片养护质量得以提高。     

两种双标记细胞系的构建及其检测具复制能力逆转录病毒能力的比较

本实验分别以逆转录病毒载体LXSN(含内启动子)和GCEN(含IRES元件)构建了含β-半乳糖苷酶基因(LacZ)和新霉素磷酸转移酶基因(Neo~R)的两种双标记细胞系LG-3T3和GG-3T3,并观察比较了两种细胞在标记拯救实验中检测有复制能力的逆转录病毒(RCR)的灵敏度的差异,结果表明两种细胞系均可用于标记拯救,其中GG-3T3检测RCR的灵敏度比LG-3T3高100倍,为提高标记拯救实验的准确性打下了一定的基础.     

LPS预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨14-3-3γ基因在LPS预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法构建pSU-PER/14-3-3γRNA干扰重组质粒,转染入心肌细胞,分为5组:对照组、A/R组、LPS+A/R组、pSUPER+LPS+A/R组、pSUPER/14-3-3γ+LPS+A/R组。Western blot检测14-3-3γ蛋白表达,生化自动分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果 A/R损伤使细胞存活率下降,LDH升高,细胞凋亡增加,mPTP开放;LPS预处理可使14-3-3γ表达明显增加,通过抑制mPTP开放,对A/R损伤的细胞有保护作用;pSUPER/14-3-3γRNA干扰重组质粒通过抑制14-3-3γ蛋白表达,取消LPS预处理的保护作用。结论 LPS预处理可对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤,其机制与上调14-3-3γ,从而抑制mPTP开放有关。