共刺激分子超家族成员sPD-1和OX40对关节炎小鼠的脾CD4+T细胞和血清细胞因子水平的影响

目的 探讨共刺激分子超家族成员sPD-1和OX40对类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠CD4+T细胞和血清细胞因子水平的影响,并探讨其机制.方法 用DBA/1小鼠建立CIA模型,分别免疫诱导35 d和49d.小鼠分为9组,每组10只,包括正常对照组(NC组)、急性CIA组(A-CIA组,免疫诱导35 d)、慢性CIA组(...     

阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响

目的 探讨阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响及可能机制。方法 40只DBA/1小鼠随机分正常对照组、模型组、细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)低剂量组和CTLA4-Ig高剂量组,除正常对照组外,其余三组小鼠均制备类风湿关节炎模型。在二次免疫结束后第0、5、10天CTLA4-Ig低、高剂量组分别腹腔注射50、100 mg/kg CTLA4-Ig,正常对照组和模型组注射等量生理盐水。游标卡尺测定小鼠同侧后足掌厚度,进行关节炎评分;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-17(IL-17)的水平,Micro-CT扫描采集图像并测量骨组织形态计量学参数,HE染色观察膝关节病理形态变化,TRAP染色检测膝关节组织内破骨细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA及蛋白表达情况,免疫组织化学染色检测核因子κB(NF-κB)表达,Western blot检测NF-κB信号通...     

klotho在慢性肾脏病分期及其并发继发性甲状旁腺功能亢进症中的作用

目的 初步探讨klotho在慢性肾脏病（CKD）分期及其并发继发性甲状旁腺功能亢进症（SHPT）中的作用。方法 选取2012-2014年在海南省人民医院肾病风湿科门诊或住院的符合纳入与排除标准的CKD患者85例为研究对象。根据CKD分期标准,将患者分为CKD1～2组（26例）、CKD3～4组（34例）和CKD5组（25例）。CKD 3~5期的患者根据甲状旁腺素（PTH）水平分为非SHPT组（n-SHPT组,PTH≤120 ng/L,26例）和SHPT组（PTH>120 ng/L,33例）。收集患者的基本资料（性别、年龄、体质量、血压）,检测其常规血清学指标〔血红蛋白（Hb）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、清蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）及血肌酐（Scr）、钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）、肾小球滤过率（GFR）、PTH〕和可溶型klotho（s-kl）、25-羟基维生素D（25-OH-D）、成纤维细胞生长因子23（FGF-23）水平。结果 CKD3～4组、CKD5组平均动脉压（MAP）、Hb、BUN、Scr、钙、磷、ALP、PTH与CKD1～2组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;CKD5组ALT与CKD1～2组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;CKD5组Hb、ALT、AST、BUN、Scr、钙、磷、ALP、PTH与CKD3～4组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。CKD3～4组、CKD5组s-kl、25-OH-D、FGF-23水平与CKD1～2组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;CKD5组s-kl、25-OH-D、FGF-23水平与CKD3～4组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。n-SHPT组、SHPT组ALB、BUN、Scr、钙、磷、ALP、GFR、s-kl、25-OH-D水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。s-kl与钙、GFR、25-OH-D呈正相关,与磷、ALP、PTH呈负相关（P＜0.05）;s-kl与FGF-23无直线相关关系（P＞0.05）。PTH水平影响因素的直线回归分析结果显示,钙进入回归方程,回归方程为y=334.20-92.02x（P＜0.05）。结论 klotho水平随着CKD进展逐渐下降,其在CKD及其合并SHPT患者中降低可能是促进CKD进展和钙代谢失调,进而导致SHPT发生并加重的原因之一。     

可溶性 klotho 在系统性红斑狼疮中的变化及意义

目的：初步研究可溶性 klotho（s-kl）在系统性红斑狼疮（SLE）和狼疮性肾炎（LN ）中的变化及其意义。方法收集34例首诊首治 SLE 患者,根据是否合并 LN 分为 SLE 不合并 LN 组（SLE 组,19例）和合并 LN 组（LN 组,15例）,将17例常规体检者列为对照组。常规检测24 h 尿蛋白定量（24 h Upro）、血常规、血生化指标和双链 DNA（dsDNA）。采用 ELISA 法检测 s-kl 、25羟基维生素 D（25-OH-D）和成纤维细胞生长因子-23（FGF-23）。对 SLE 组和 LN 组患者进行 SLE 疾病活动度评分（SLEDAI）,根据 Cockcroft-Gault 公式计算内生肌酐清除率（CCr）。比较3组间差异并对相关指标进行相关性分析。结果在 SLE 组和 LN组中平均动脉压、血常规、酶学[肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）]、补体（补体 C3和补体 C4）及 dsDNA 与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。与对照组及 SLE 组比较,LN 组24 h Upro 、血脂[总胆固醇（CHOL）,三酰甘油（TG）]和血肌酐（SCr）显著升高,而血清清蛋白（ALB）和 CCr 明显下降,差异有统计学意义（P＜0．05）。SLE 组与对照组 s-kl 、25-OH-D 和 FGF-23比较差异无统计学意义（P＞0．05）;而在 LN 组中 s-kl 、25-OH-D 及 FGF-23血清水平与对照组和 SLE 组比较,差异有统计学意义（P＜0．05）。 LN 组患者 SLEDAI 评分较 SLE 组评分高（P ＜0．05）。相关分析表明,s-kl 与25-OH-D 、C3及 C4存在正相关关系,与FGF-23、SLEDAI 和 dsDNA 存在负相关关系（均 P ＜0．05）。回归分析提示,s-kl 、25-OH-D 和 FGF-23与 SLE 活动度无明显关系。结论 SLE 和 LN 患者体内 s-kl 水平的降低,可能是引起 FGF-23升高的关键因素之一,由此进一步导致 SLE 和 LN 患者维生素 D（VitD）缺乏和病情活动。     

可溶性klotho蛋白与慢性肾脏病患者体内氧化应激的关系研究

目的 探讨慢性肾脏病（CKD）患者体内氧化应激状态,初步明确可溶性klotho蛋白（s-kl）在CKD患者体内氧化应激中的作用和意义。方法 选取2012年1月-2014年12月在海南省人民医院肾病风湿科门诊或住院诊治的CKD患者共89例,均符合美国国家肾脏病基金会制定的肾脏病预后质量倡议（K/DOQI-CKD）诊断标准。根据CKD分期将入选患者分为CKD1~2组（27例）、CKD3~4组（35例）和CKD5组（27例）。清晨空腹采集患者静脉血,常规方法检测血常规和血生化指标。采用ELISA法检测s-kl,硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）,羟胺法检测总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性,比色法检测总抗氧化力（T-AOC）,分光光度法检测还原型谷胱甘肽（GSH）。用核素肾动态显像（99Tcm-DTPA）检测肾小球滤过率（GFR）。比较组间差异,部分指标间的依存关系采用Pearson相关分析和直线回归分析。结果 3组CKD患者s-kl、MDA、T-SOD、T-AOC及GSH水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.001）。其中,CKD3~4组和CKD5组s-kl、T-SOD、T-AOC和GSH水平较CKD1~2组下降,而MDA水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;CKD5组s-kl、T-SOD、T-AOC和GSH水平较CKD3~4组降低,MDA水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。相关分析显示,s-kl与T-SOD、T-AOC及GSH呈正相关关系（r=0.428、0.502、0.531,P＜0.05）,与MDA呈负相关关系（r=-0.434,P＜0.05）。线性回归分析显示,s-kl与MDA、T-SOD、T-AOC间存在线性依存关系（P＜0.05）,而s-kl与GSH无线性回归关系（P＞0.05）。结论 CKD患者体内存在氧化应激,s-kl降低与肾脏氧化损伤密切相关。     

miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK) 2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Tra...     

颗粒酶B通过SRGN/NF-kappaB信号通路调节类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和炎症反应

目的 颗粒酶B(GZMB)在类风湿关节炎中发挥作用的机制尚不完全清楚。文章主要研究GZMB对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLSs)的增殖和炎症的影响及其潜在的机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot检测RA-FLSs细胞中GZMB的表达,构建GZMB以及丝甘蛋白聚糖(serglycin; SRGN)过表达载体(oe-GZMB;oe-SRGN)和GZMB干扰质粒(si-GZMB)并转染到RA-FLSs中,RT-qPCR和Western blot检测过表达和干扰效率。CCK-8实验以及EdU检测细胞增殖水平。使用ELISA试剂盒检测炎性因子IL-6、IL-8和IL-1β的表达水平。免疫共沉淀(CO-IP)实验检测GZMB和SRGN之间的相互作用。Western blot检测NF-kappaB信号通路相关蛋白表达水平。结果 与正常人的滑膜细胞(NC-FLSs)相比,GZMB在RA-FLSs细胞中表达上调(P<0.01);过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.01),而敲除GZMB则显著抑制RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<...     

可溶性程序性死亡受体-1和干扰素调节因子4在类风湿关节炎患者血清中的表达与疾病活动性、免疫炎症的关系

目的 检测可溶性程序性死亡受体-1(sPD-1)、干扰素调节因子4(IRF4)在类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达并探讨其临床意义。方法 选取RA患者100例为研究对象(RA组),其中缓解期患者50例(RA缓解组),活动期患者50例(RA活动组)。另外,选取同期接受治疗的骨关节炎(OA)患者50例(OA组)和进行体检的健康者50例(对照组)。采集静脉血,分离血清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测受试者血清sPD-1、IRF4、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、干扰素γ(IFN-γ)表达水平,采用Pearson法分析RA患者血清sPD-1、IRF4水平与血清IL-4、IL-17、IFN-γ水平的相关性。结果 与对照组比较,OA组和RA组受试者血清sPD-1、IRF4、IL-4、IL-17、IFN-γ水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与OA组比较,RA组受试者血清sPD-1、IRF4、IL-4、IL-17、IFN-γ水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与RA缓解组比较,RA活动组血清sPD-1、IRF4水平升高,差异有统计...     

LncRNA MIR22HG通过海绵吸附miR-22-5p对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR22HG对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)增殖、凋亡和炎性反应的影响及其分子机制。方法 收集在本院接受治疗的37例RA患者及30例关节创伤患者的滑膜组织样本，采用qRT-PCR检测滑膜组织中MIR22HG和miR-22-5p表达水平。体外分离、培养和鉴定人RA-FLSs,将MIR22HG siRNA干扰质粒(si-MIR22HG)及其阴性对照质粒(si-NC)和miR-22-5p inhibitor及其阴性对照(inhibitor-NC)分别或同时转染至RA-FLSs中，qRT-PCR检测细胞中MIR22HG和miR-22-5p表达水平；CCK-8检测各组细胞增殖活性；AnnexinⅤ-FITC/PI检测各组细胞凋亡率；ELISA检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平；Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-22-5p之间的靶向关系。结果 与关节创伤患者比较，R...