乏氧通过腺苷A2受体调节人成熟树突状细胞骨桥蛋白的表达

目的 探讨乏氧调节人成熟树突状细胞(mDCs)骨桥蛋白(OPN)表达的机制.方法 免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,分别在常氧和乏氧条件下经GM-CSF及IL-4体外诱导生成mDCs;ELISA检测培养上清中OPN水平,RT-PCR检测OPN基因水平表达;使用腺苷替代物(NECA)、特异性A2R激动剂(CGS21680)和特异性A2R拮抗剂(SCH58261)探讨A2R在调节人mDCs表达OPN中发挥的作用;利用重组人TGF-β1(rhTGF-β1)及抗TGF-β1单克隆抗体(anti-TGF-β1Mcab)检测TGF-β1在这一过程中发挥的作用.结果 乏氧显著增加mDCs对OPN mRNA及OPN蛋白的表达,A2R拮抗剂抑制乏氧对OPN的诱导作用;常氧条件下,腺苷替代物(NECA)和A2R激动剂均能显著上调mDCs对OPN mRNA的表达及OPN蛋白的分泌,A2R拮抗剂可特异性抑制A2R激动剂对OPN的诱导;A2R参与调控免疫调节因子TGF-β1水平,通过rhTGF-β1和阻断抗体证实TGF-β1

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of hypoxia regulate osteopontin (OPN) secreting by mature dendritic cells (mDCs). Methods CD14 + cells were enriched using anti-CD14 immunomagnetic beads, for inducing to mDCs, CD14 + cells were cultured with GM-CSF and IL-4 in hypoxia or normoxiain vitro. Concentration of OPN and TGF-β1 in supernatant were detected by sandwich ELISA, OPN mRNA detected by RT-PCR. Approach regulating function of A2 R in expressing of OPN by mDCs by using NECA (surrogate of adenosine), A2R agonist (CGS21680), A2R antagonist (SCH58261) and investigate role of TGF-β1 in this process by using rhTGF-β1 and anti-TGF-β1 Ab. Results Hypoxia inreased the level of OPN and OPN mRNA in mDCs, and this effect could be reversed by A2 R antagonist. Under normoxia,both NECA and A2R agonist (CGS21680) could upregulate the level of OPN and OPN mRNA in mDCs significantly, but this positive effect could be reversed by A2 R antagonist. A2 R played a role in regulating TGF-β1, and confirmed TGF-β1 involved in regulation of OPN by using rhTGF-β1 and anti-TGF-β1 Ab. Conclusion High adenosine induce the generation of TGF-β1 through the A2R on mDCs, and then TGF-β1 raise the OPN secreting by mDCs.     

hCG对HTR8 SVneo滋养层细胞系MMP 2表达的影响与调控机制

目的探讨绒毛膜促性腺激素（hCG）对滋养层细胞系HTR8 SVneo侵袭活性的影响及其可能的调控机制。方法将培养的HTR8 SVneo细胞根据处理因素分为对照组、低浓度hCG（10?IU/mL）刺激组、高浓度hCG（100?IU/mL）刺激组,再将HTR8 SVneo细胞分为对照组、hCG（100?IU/mL）刺激组、DPCPX(A1R特异性阻断剂）+hCG（100IU/mL）联合刺激组。采用RT PCR检测各组HTR8 SVneo细胞基质金属蛋白酶 2（MMP 2）的表达变化,明胶酶谱检测各组HTR8 SVneo细胞MMP 2蛋白水平的分泌变化。 结果高浓度hCG（100?IU/mL）较低浓度hCG（10?IU/mL）刺激后的HTR8 SVneo细胞MMP 2的表达与分泌均上升（P<均0.05）;腺苷受体A1R的表达同时升高（P<0.05）。阻断A1R的作用通路后,MMP 2的表达与分泌均下降（P均<0.05）。 结论随着hCG浓度的升高, HTR8 SVneo细胞的侵袭性逐步增强,其调控机制为通过促进A1R的表达而使MMP 2的分泌升高。     

雌、孕激素通过腺苷A_(2B)R通路调节JEG-3绒癌细胞系上调MMP-2的表达

目的:观察雌、孕激素对人绒癌细胞系JEG-3腺苷受体表达的影响,探讨它对JEG-3侵袭性的影响。方法:JEG-3细胞在含雌、孕激素环境中培养24h,设MRS1706(A2BR阻断剂)干预组及空白对照组;用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-PCR技术检测JEG-3细胞腺苷受体mRNA水平。结果:RT-PCR结果显示,JEG-3细胞表达腺苷A1R、A2AR及A2BR3个亚型,未检测到A3R的表达;雌激素和(或)孕激素处理组A2BRmRNA含量显著高于对照组(P<0.05);明胶酶谱检测发现雌、孕激素联合处理显著上调JEG-3细胞MMP-2的分泌水平(P<0.05),但对MMP-9无显著影响;阻断A2BR信号途径显著下调JEG-3MMP-2表达,并能抑制雌、孕激素对MMP-2的上调效应(P<0.05)。结论:雌孕激素能改变JEG-3绒癌细胞腺苷受体的表达模式,呈A2BR优势表达,A2BR信号通路参与雌孕激素对JEG-3细胞侵袭性的调节。     

OPN在口腔扁平苔藓中的表达及作用初步研究

目的:检测骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在口腔扁平苔藓(Orallichen planus,OLP)局部粘膜和外周血中的表达水平,探索其在OLP免疫发病机制中的作用。方法:免疫组化法检测OPN在局部粘膜组织的表达;ELISA检测外周血清OPN和白细胞介素12(Interleukin-12,IL-12)的蛋白浓度;分离正常人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),分OPN刺激组和对照组,体外活化72小时,流式细胞学检测淋巴细胞的凋亡率。结果:OPN在OLP患者局部病变粘膜组织的表达较健康对照组明显增强(P0.01);OPN和IL-12在OLP患者血清中的浓度均明显高于健康对照组(P0.01),而且二者存在显著正相关(r2=0.6585,P0.0001);体外活化淋巴细胞的凋亡率,OPN刺激组明显低于对照组(P0.05)。结论:OPN在OLP局部粘膜和外周血中的表达水平明显升高,并且可以抑制体外活化淋巴细胞的凋亡,提示OPN在OLP的发病发展中可能起着重要的促进作用。     

乏氧对人外周血NK细胞NKG2A、NKG2D及CD44表达的影响

目的： 观察乏氧微环境对人外周血自然杀伤细胞(NK)表面自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)及CD44分子表达的影响,探讨乏氧抑制NK细胞杀伤活性的分子机制。方法: 采用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞（PBMC）,贴壁去除单核细胞获得外周血淋巴细胞（PBL）,分别置常氧（21％O2）、乏氧（1％O2）以及有或无人重组白细胞介素2(rhIL-2)（1×106 U/L）刺激条件下培养16 h,流式细胞术（FCM）检测不同 NK细胞亚群 NKG2A、NKG2D以及CD44分子的表达。结果: 常氧条件,人外周血CD3-CD56+NK细胞NKG2A、NKG2D表达的阳性率分别为16.16%和78.45%,乏氧条件下二者表达的阳性率分别为15.16%和71.08%;rhIL-2上调NKG2A和NKG2D的表达,乏氧不影响 rhIL-2对NKG2D、 NKG2A的上调作用;rhIL-2显著上调NK细胞CD44的表达,乏氧抑制CD44的表达（P<0.05）。结论: 乏氧下调外周血NK细胞表面受体NKG2D及CD44的表达,但对NKG2A的表达无显著影响。由此提示,NKG2D及CD44分子可能在乏氧引起的NK细胞杀伤活性抑制中具有重要作用。     

低剂量X射线对脐静脉内皮细胞分泌vWF的影响

目的 探讨低剂量X射线（0.1 Gy）照射对脐静脉内皮细胞分泌vWF的影响。方法 采用医用直线加速器对脐静脉内皮细胞进行0、0.1 Gy（剂量率为200 cGy/min）的X射线照射,然后采用MTT法、台盼蓝染色和细胞凋亡实验检测细胞增殖、细胞活力及细胞凋亡。此外,采用ELISA和Westernblot方法检测受X射线照射后的细胞培养液中vWF的表达。结果 以0.1 Gy的低剂量X射线照射脐静脉内皮细胞后,细胞增殖、细胞活力以及细胞凋亡的结果与对照组相比无统计学差异,但照射后的脐静脉内皮细胞培养基中vWF水平明显升高。结论 低剂量（0.1 Gy）的X射线剂量照射不会导致脐静脉内皮细胞增殖、凋亡或细胞活性的显著改变,但是促使其分泌vWF的量增多。     

低氧对人外周血T淋巴细胞CCR7表达及其生存活性的影响

目的 观察低氧微环境对人外周血T细胞生存活性及其CCR7表达的影响.方法 采用密度梯度离心和尼龙毛法分离健康捐献者外周血单个核细胞(PBMC)中的T淋巴细胞,分别置常氧(21%O2)和低氧(1)环境培养16 h.倒置显微镜观察T细胞形态,流式细胞术检测T淋巴细胞凋亡率及其CD 4和CD 8 T细胞亚群表面CCR7的表达.结果 常氧与低氧环境下T淋巴细胞的形态无明显差异.低氧环境下T细胞凋亡率12.82%±1.36%,明显高于常氧环境下的2.56%±0.98%;P＜0.05.低氧与常氧环境下CD 4 T细胞表面CCR7平均荧光强度分别为53.50±8.78,71.63±8.50;CD 8T细胞表面CCR7平均荧光强度分别为126.46±11.74,175.84±10.90,P均＜0.05.结论 低氧微环境可下调人外周血CD 4与CD 8 T细胞CCR7的表达,加速T细胞凋亡.