沉默circ_0000745通过靶向 miR-296-5p对结直肠癌细胞增殖及转移的影响

摘要:目的 探讨circ_0000745对结直肠癌细胞增殖及转移的影响及其可能的作用机制。方法 收集2013年3月 ~2016年7月在四川省人民医院确诊的结直肠癌及癌旁组织65例,采用实时定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌组 织、癌旁组织中circ_0000745与 miR-296-5p表达,分析circ_0000745与 miR-296-5p表达与结直肠癌患者预后的关系。 将人结直肠癌细胞 HCT-116分为si-NC组、si-circ_0000745组、miR-NC组、miR-296-5p过表达组、si-circ_0000745+anti-miR-NC组、si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组;采用 CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测各组细 胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0000745与 miR-296-5p的靶向关系;采用 Western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果 与癌旁组织比较,结直肠癌组 织中circ_0000745的表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05);随访5年,65例患者中死亡9例,存活56 例,与存活患者相比,死亡患者的circ_0000745明显增高(P<0.05),miR-296-5p明显降低(P<0.05)。与 HT-29细胞 相比,HCT-116细胞的circ_0000745mRNA 表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05),选择 HCT-116细 胞进行下一步研究。与si-NC组比较,si-circ_0000745组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵 袭细胞数减少(均P<0.05);circ_0000745可靶向调控 miR-296-5p的表达;与 miR-NC组比较,miR-296-5p过表达组细 胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均 P<0.05);与si-circ_0000745+anti-miRNC组比较,si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成数、迁移及侵袭 细胞数增多(均P<0.05)。结论 结直肠癌组织中circ_0000745呈高表达,miR-296-5p呈低表达,高表达circ_0000745 及低表达 miR-296-5p可用于评估结直肠癌患者预后,circ_0000745通过靶向 miR-296-5p促进结直肠癌细胞增殖及转 移,沉默circ_0000745可为结直肠癌治疗提供新思路。     

激活Wnt信号通路阻滞沉默ZEB2对结直肠癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用

目的研究下调结直肠癌细胞中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)的表达对细胞增殖的影响。方法 ZEB2 shRNA组、ZEB2 shRNA+氯化锂(LiCl)组细胞用感染ZEB2 shRNA慢病毒之后的SW48细胞,shRNA-NC组细胞用感染shRNA-control慢病毒之后的SW48细胞,ZEB2 shRNA+Li Cl组细胞在实验开始时在细胞培养液中添加20 mmol/L的Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl。对照组细胞不作任何处理。以实时荧光PCR和Western blot检测结肠细胞中ZEB2的表达水平。用Western blot法测定下调ZEB2后的结直肠癌细胞中Wnt信号通路蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc表达水平。用Wnt信号通路激活剂处理下调ZEB2后的结直肠癌细胞,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白剪切型Caspase-9(c-caspase-9)、剪切型Caspase-3(ccaspase-3)水平。结果 ZEB2在结直肠癌细胞中的表达水平高于正常结肠细胞。ZEB2 shRNA慢病毒感染可以下调结直肠癌细胞中ZEB2的表达。沉默ZEB2后的结直肠癌细胞的增殖能力降低,细胞凋亡增多,细胞中c-caspase-9、c-caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白水平降低。Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默ZEB2后结直肠癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用。结论沉默ZEB2诱导结直肠癌细胞凋亡并抑制细胞增殖,而Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默ZEB2的这种作用。     

将科研项目训练与医学本科生阶段教育有机结合

本科生教育是我国高等教育体系中的主体,培养合乎现代社会需要且能适应教育全球化趋势的人才队伍是该体系中的最终目标。处于本科学习阶段的医学生不仅需要具备有扎实的理论知识基础,还应该主动融入到科研项目训练中,培养自身的科研能力及创新精神。而教育工作者在提供学生科研训练机会及如何更好地实施培训计划方面还有许多工作要做。     

利用“临床营养风险筛查计划”科研项目培养医学生调查研究能力

目的通过培训并实践"临床营养风险筛查计划",提高医学生进行合理调查研究的能力。方法对入选医学生进行调查研究方法学培训,并进行临床资料采集等实践活动。培训结束后,对医学生科研训练效果进行总结和评价。结果自2010年6月～2011年6月,共培训医学生46人,并对386例患者进行营养风险筛查。97.83%(45人)研究参与者赞同安排医学生参与科研项目训练,80.43%医学生对此次调查研究工作满意,认为对后期学习能力的提高有促进作用。医学生科研能力影响因素集中体现在科研选题、统计学理论及软件操作、论文写作能力三方面。结论采用成立科研小组、安排有针对性的培训等方法,使医学生系统接受科学研究方法训练,对其科研教学能力培养可能会有重大促进作用。     

siRNA干扰技术沉默p66SHC对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨干扰p66shc基因表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、迁移的影响。方法实验分为对照组(不做任何处理)、NC-siRNA组和p66SHC-siRNA组,NC-siRNA组、p66SHC-siRNA组通过Lipofectamine 2000将特异性siRNA转染入结直肠癌HCT116细胞中。荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中p66SHC的表达量;四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell法观察细胞迁移、侵袭的变化;Western Blot检测细胞EMT相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)的水平。结果采用siRNA干扰HCT116细胞中p66SHC蛋白的表达后,细胞的增殖能力显著下降(P0.05),明显抑制细胞侵袭、迁移能力(P0.05),E-cadherin蛋白的水平明显上调(P0.05),Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平显著下调(P0.05)。结论干扰p66SHC基因的表达能阻碍EMT的发生,从而降低结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力。     

术前肠内营养支持应用于伴营养风险胃癌患者的临床观察

目的评价术前肠内营养支持应用于伴营养风险胃癌患者的临床疗效和安全性。方法前瞻性入组2012年5—10月间四川大学华西医院收治的60例伴营养风险的胃癌患者,按随机数字表法分为试验组（30例）和对照组（30例）。试验组以安素作为肠内营养制剂,术前连续服用10d,对照组进食等热量等氮的匀浆膳。检测患者入院时、术前1d和术后3d营养相关指标及肝肾功能指标,并记录恶心、呕吐等围手术期不良反应的发生情况。结果两组患者入院时基线水平一致（均P〉0．05）。术后3d,试验组较对照组患者血清白蛋白[（33．9±5．6）g／L比（31．0±5．3）g／L,P〈O．05]和血红蛋白水平[（103．4±7．7）g／L比（96．6±10．5）g／L,P〈0．01]均明显升高;而体质量指数、淋巴细胞计数、血糖浓度、血钾、血钠及肝、肾功能指标两组差异均无统计学意义（均P〉0．05）。两组各有2例患者出现恶心症状．各有1例出现呕吐症状,试验组患者未出现肠内营养相关的严重不良临床事件。结论术前肠内营养支持应用于伴营养风险胃癌患者疗效显著,安全性高,是临床纠正营养风险的合理选择。     

3D打印技术应用于复发黏液纤维肉瘤腹腔腹壁多发转移1例报告

<正>患者,女,74岁,患者因"发现左下腹包块1年余"为主诉于2021年3月20日入院。1年余前发现左下腹包块至我院就诊,于2019年11月30日全麻下行"剖腹探查术",术后病检回示:"腹壁包块"梭形细胞肿瘤;免疫组化示低度恶性黏液纤维肉瘤(MFS)。6月余前偶然发现左下腹部一包块,大小约4 cm×5 cm,质韧,无压痛,偶伴黑便及便秘;于当地医院就诊予以对症治疗后上述包块无明显减小(具体用药不详)。为求进一步诊治来我院。入院查体:腹部平坦,可见陈旧性手术瘢痕,无腹壁静脉曲张,未见肠型及蠕动波;     

门冬氨酸钾镁注射液在胃肠道术后禁食患者电解质补充中对钾镁离子影响的多中心随机对照临床试验

目的评价门冬氨酸钾镁注射液在胃肠道术后禁食患者电解质补充中的疗效和安全性。方法以门冬氨酸钾镁注射液(潘南金)为观察药物,进行多中心随机对照临床观察。将111例患者随机分为试验组(门冬氨酸钾镁注射液和氯化钾注射液联用补钾,56例)和对照组(单纯使用氯化钾注射液补钾,55例),连续补充5 d,并进行临床疗效观察,包括血钾和尿钾的跟踪检测。结果试验组和对照组患者基线水平一致(P>0.05),补钾后2组血钾水平差异无统计学意义(P>0.05),但试验组患者24 h尿钾量在术后1～4 d均明显低于对照组(P<0.05)。试验组术后不同时相血镁离子浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在临床观察过程中,未发现与门冬氨酸钾镁注射液相关的不良事件。结论门冬氨酸钾镁注射液在禁食患者钾缺乏治疗方面疗效显著,特别是对细胞内补钾明显优于氯化钾,安全性高,是临床纠正钾缺乏的合理选择。     

直肠癌手术前后血清miR-24-3p和FOXQ1水平变化及其与预后的关系研究

[目的]研究直肠癌患者手术前后血清miR-24-3p和叉头框蛋白Q1(FOXQ1)水平变化及其与预后的关系。[方法]选择2011年2月~2014年10月在我院行根治性手术切除的64例直肠癌患者(直肠癌组)作为研究对象,同时期体检健康且无肿瘤家族史的50例正常者(正常组)作为对照,检测直肠癌患者手术前后及正常组血清miR-24-3p和FOXQ1水平,分析血清miR-24-3p和FOXQ1水平与直肠癌患者临床病理特征和3年生存率的关系。[结果]直肠癌组手术前和手术后血清miR-24-3p相对表达量均显著低于正常组(P0.05),血清FOXQ1水平均显著高于正常组(P0.05),直肠癌患者术后血清miR-24-3p相对表达量显著升高,血清FOXQ1水平显著降低;直肠癌患者术后半年内复发患者血清miR-24-3p相对表达量显著低于未复发患者(P0.05),血清FOXQ1水平显著高于未复发患者(P0.05)。血清miR-24-3p表达水平与直肠癌患者TNM分期、浸润程度及淋巴结转移有关(P0.05),血清FOXQ1水平与直肠癌患者肿瘤大小、TNM分期、浸润程度及淋巴结转移有关(P0.05);直肠癌组患者血清miR-24-3p和FOXQ1表达水平呈显著负相关关系(r=-0.762,P=0.000);术后血清miR-24-3p升高率48.15%患者3年生存率显著高于升高率48.15%患者(P0.05),血清FOXQ1降低率33.69%患者3年生存率显著高于降低率33.69%患者(P0.05);FOXQ1表达水平是影响直肠癌患者预后的危险因素,而miR-24-3p表达水平是直肠癌患者预后的保护因素。[结论]直肠癌患者术后血清miR-24-3p水平显著升高,FOXQ1水平显著降低,其升高或降低程度与患者远期预后密切相关。