免疫毒素的基础与临床研究进展

免疫毒素，又称生物导弹，由导向性的载体分子与具有毒性的弹头蛋白进行交联而制备，主要用于治疗肿瘤顽症。近年来，在免疫素素的弹头设计、载体选择及导向策略上都有了很大的发展，其临床应用方面也取得了一定的成绩。本文就其基础研究与临床应用方面的进展做一综述。     

抗人FKBP52分子单克隆抗体的制备和鉴定

目的；研制抗人FKBP52单克隆抗体（mAb)，并分析其免疫生物学特性。方法：采用纯化的人FKBP52蛋白免疫BALB／c小鼠。用ELISA法鉴定mAb的特异性；用Western blot鉴定制备的9株mAb所识别的抗原相对分子质量（Mr)及结合人FKBP52分子的功能区。结果：共获得9株分泌抗人FKBP52 mAb的杂交瘤细胞。抗人FKBP52 mAb可识别相对Mr为52000在原核系统中表达的人FKBP52蛋白，也可识别Jurkat细胞浆中Mr为52000的天然FKBP52蛋白。两株mAb均可识别人FKBP52分子中的第2功能区。其余7株mAb可识别人FKBP52分子中的第3功能区。结论：成功地制备了抗人FKBP52分子mAb。     

人FKBP12基因可溶性表达及活性研究

目的 获得具有生物学活性的ｈＦＫＢＰ１２,以筛选新型的促神经再生药物。方法 构建原核表达载休ｐＥｘＳ３－ｅＩ／ｈＦＫＰ１２,并在ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＥ菌株中进行可溶性高效表达。表达上清经ＧＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ｆａｓｔ ｆｌｏｗ一层析。结果 获得电泳纯的ｈＦＫＢＰ１２。活性测定结果表明,纯化后的ｈＦＫＢＰ１２显示具有较强的肽基脯基顺反异构酶活性。结论 原核表达的ｈＦＫＢＰ１２具有天然生物学     

rRTA:DS27免疫毒素的制备及胞内运输研究

目的：探讨免疫毒素ｒＲＴＡ：ＤＳ２７的内化行为。方法：用原核系统来获得重组蓖麻毒素Ａ链（ｒＲＴＡ）;用胶体金双标记法进行Ｍｏｌｔ４细胞中免疫毒素的导向研究。结果：ＣＭ－Ｓｅｐｈｏｒｏｓｅ一步纯化到电泳纯的ｒＲＴＡ,电镜观察到ｒＲＴＡ：ＤＳ２７遵循特异的胞内运输途径。结论：上述结果对于深入了解免疫毒素的作用机理,并进而改善其临床应用具有重要作用。     

STAT3反义表达载体的构建、稳定表达及对M1白血病细胞表型的影响

目的 探讨JAK／STATs通路在IL－6信号转导中的功能。方法 将含起始密码子在内的约1．2kbSTAT3cDNA反向插入到真核细胞表达载体pcDNA3中,采用电穿孔法重组质粒导入到M1小鼠急性髓系白血病细胞中,进行G418筛选。结果 G418筛选出抗性克隆后,基因组DNAPCR扩增表明STAT3反义基因片段已导入M1细胞中并在基因组中整合。STAT3反义RNA不影响M1细胞的生长动力学特征,但可显著拮抗IL－6诱导的STAT3激活,并拮抗IL－6对M1细胞的生长抑制效应。结论 STAT3反义RNA能够在M1细胞中稳定表达,成为进一步研究JAK／STATs途径功能的新模型。     

E-选择素突变体的构建和表达

从ｐＵＣ１８／Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎＣＤ６２Ｅ）重组质粒，以ＰＣＲ的方法扩增得到Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ突变体ＣＤ６２Ｅ１和ＣＤ６２Ｅ２基因。将其分别插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５的单一ＳｍａⅠ位点，在痘苗病毒真核系统中进行了表达。初步的细胞粘附功能试验结果表明，Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ分子不同结构域的缺失可削弱其粘附能力，为进一步研究Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ公子的结构与功能奠定了基础。     

蓖麻毒素-A链结构功能研究进展

蓖麻毒素(ricin)是一种核糖体失活蛋白,是构建免疫毒素的一个重要成分,本文介绍近年来ricin-A链的理化性质和制备,结构功能关系及其N-糖苷酶作用机制方面的研究进展。     

计算机辅助设计使重组ricin—A链在E.coli中的高效表达

基于对螺旋区随机堆积的ＲＮＡ二级结构的预测和密码子偏性计算，建立了ｐＢＶ２２０载体中外源基因高效表达的判别模型。该模型认为，外源基因的表达水平，与其５′端３０３９区域，以及３′端３０３９区域的二级结构自由能具有显著的统计学意义；其次与３′端９ｂｐ的局部密码子偏性相关。据此模型，我们设计了用于克隆表达ｒｉｃｉｎＡ链的引物。将ＰＣＲ扩增的基因克隆入ｐＢＶ２２０载体中，在ＤＨ５α宿主中获得了高效表达（表达水平在２０％以上），而且在ｐＥｘＳｅｃＩ载体系统中亦获得了高效表达。