IL-34对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的作用研究

目的 研究白细胞介素-34(interleukin 34, IL-34)在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 采用免疫组织化学染色检测IL-34在食管鳞癌组织标本中的表达情况,采用qRT-PCR法探究IL-34在不同食管鳞癌细胞系中mRNA表达水平。利用慢病毒感染,过表达食管鳞癌细胞系ECA-109中IL-34,高内涵筛选后通过Celigo细胞计数检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡能力,通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果 癌组织中IL-34水平高于正常组织,但由于临床样本过少差异无统计学意义(P>0.05);食管鳞癌细胞系中IL-34的mRNA水平显著高于正常食管上皮细胞(P<0.01)。IL-34过表达可显著减少ECA-109细胞凋亡,促进其增殖和迁移(P<0.01)。结论 IL-34在食管鳞癌中过表达,并与食管鳞癌细胞的增殖、迁移和凋亡显著相关,可能成为食管鳞癌新的标志物。     

Foxp3酵母双杂交诱饵表达载体的构建、鉴定和其毒性及自激活效应检测

目的利用酵母双杂交系统,构建人Foxp3酵母双杂交体系中的诱饵载体,并对其进行鉴定.方法获得正常人外周血 PBMC,抽提mRNA,通过巢式 RT-PCR 在人外周血PBMC中获得Foxp3基因片断,纯化后连接至 pMD18-T 载体,测序正确,EcoRⅠ、SalⅠ双酶切pMD18-T-Foxp3和酵母表达载体 pGBKT7,回收产物并连接,重组质粒命名为 pGBKT7-Foxp3,测序正确,用醋酸锂法将重组质粒转化酶母菌 AH109,在缺陷性培养基上观察pGBKT7-Foxp3 在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能.结果 RT-PCR 扩增出的DNA 片段约1 203 bp,大小正确,与pMD18-T载体连接,测序正确.构建的诱饵载体pGBKT7-Foxp3,测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确.pGBKT7-Foxp3转化酵母感受态AH109,在SD/-Trp 板上生长良好,在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade /-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,说明AH109[pGBKT7-Foxp3]转化成功,对酵母菌株AH109不具有毒性且不具自主激活报告基因的功能.结论成功获得了在酵母细胞中正确表达,并对酵母细胞无毒性且未自主激活报告基因的诱饵表达载体pGBKT7-Foxp3,可作为酵母双杂合系统中的"诱饵", 为下一步利用酵母双杂交系统筛选Foxp3相互作用蛋白创造了条件.     

突变的SOD1 cDNA与人MAP/MARK1片段在人胚肾293细胞中的相互作用

目的用酵母双杂交方法显示突变的SOD1 cDNA与人MAP／MARK1的片段结合,进一步探讨二者能否在哺乳动物表达系统人胚肾293细胞中发生相互作用,以验证酵母双杂交的结果。方法采用PCR方法及双酶切的方法构建含突变SOD1 cDNA片段的真核表达质粒pCMV-Myc和含人MAP／MARK1的片段真核表达质粒pCMV-HA,分别或共同转染人胚肾293细胞,进行免疫共沉淀检测。结果免疫共沉淀结果表明,重组含突变的SOD1 cDNA质粒pCMV-Myc分别与空载体pCMV-Myc、pCMV-HA共转染,免疫沉淀物中均未检测到结合蛋白,只有重组含突变SOD1 cDNA真核表达质粒pCMV-Myc与重组含人MAP／MARK1的片段真核表达质粒pCMV-HA共转染时,在免疫沉淀物中能检测到结合蛋白,表现在蛋白免疫印迹上有特异性目的条带。结论突变的SOD1 cDNA与人MAP／MARK1片段在人胚肾293细胞中存在蛋白水平的相互作用。     

SFRP2与Periostin的相互作用在瘢痕疙瘩形成机制中的研究

目的利用pull-down技术验证凋亡相关蛋白基因SFRP2（Secreted frizzled-related protein 2）和骨母细胞特异性因子-2 Periostin（Osteoblast-specific factor2）间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的Periostin融合蛋白（HA—Periostin）的重组载体pCMV—HA—Periostin,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的融合蛋白（Myc—SFRP2）的重组真核表达载体pCMV—HA—SFRP2,单独或共转染人293细胞,利用pull-down技术验证Periostin与SFRP2间的相互作用。结果成功构建重组载体pCMV—HA-Periostin．与抗Myc单克隆抗体沉淀Myc—SFRP2相互作用蛋白复合物后,可以检测到HA—PeMostin的表达。通过体外蛋白质结合实验证实了Periostin与SFRP2间的相互作用。结论成功构建带HA标签的Periostin融合蛋白（HA-Periostin）的重组载体,利用pull—down技术证实了Periostin与SFRP2间的存在相互作用。     

放射性肺损伤机制与防治新进展

胸部肿瘤患者在接受放射治疗过程中,常发生放射性肺损伤（放射性间质性肺炎和肺纤维化）,严重影响其生活质量。因此,放射性肺损伤的发病机制及防治研究对于肿瘤的放射治疗具有重要意义。本文就其研究进展进行综述,以期为进一步研究提供理论基础。     

β4整合素结合蛋白调控成纤维细胞胞外基质生成的实验研究

目的探讨β4整合素结合蛋白（ITGB4BP）对成纤维细胞胞外基质生成的调控作用。方法分别构建、包装能在哺乳动物细胞中促进和抑制ITGB4BP表达的腺病毒表达载体pAdEasy-ITGB4BP-EGFP和慢病毒表达载体Lentivirus-FIV-H1／U6-copGFP-ITGB4BP-RNAi,经筛选鉴定有效后,分别感染人正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕（HTS）成纤维细胞,利用ELISA检测细胞培养上清内基质金属蛋白酶（MMP-9）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和I型胶原蛋白（collagen I）的表达情况。结果正常皮肤成纤维细胞内IT—GB4BP高表达后,引起MMP-9、TGF-β1和collagen I表达降低;反之HTS成纤维细胞内ITGB4BP表达抑制后,MMP-9、TGF-β1和collagen I表达增高。结论ITGB7BP对MMP-9、TGF-β1和collagen I表达具有重要调节功能。提示ITGB4BP可能具有抗纤维化的重要功能,为下一步深入探讨HTS的形成机制提供了重要依据。     

HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白

目的利用激光共聚焦显微镜观察未知蛋白（HT036）与纤维化相关蛋白（P311）的细胞内表达与共定位。方法构建带绿色荧光的HT036真核表达载体,经鉴定正确后,与前期构建带红色荧光的P311真核表达载体共转染人胚肾上皮细胞株（HEK293）,同时共转染空载体做对照,激光共聚焦显微镜下观察蛋白在细胞内表达、分布和共定位。结果HT036真核表达载体经聚合酶链反应（PCR）、双酶切和测序鉴定正确,与P311共转染HEK293细胞后,激光共聚焦显微镜观察到绿色和红色荧光表达。HT036和P311主要分布在细胞胞浆,两者在HEK293细胞中存在共定位,而对照组则无该现象。结论通过酵母双杂交筛选出的P311相互作用蛋白HT036,在活体细胞内存在空间上的共定位,进一步证明它们之间的相互作用,为探讨P311纤维化机制提供新的切人点。     

重组人KGF-2突变体对小鼠小肠辐射损伤的防治作用研究

目的 探讨重组人KGF-2突变体给药对60Co γ全身照射小鼠小肠黏膜损伤的保护作用.方法 将小鼠分为正常组、模型组、重组KGF-2突变体防治组和安多霖防治组.利用60Co γ射线放射源对模型组和防治组小鼠进行全身照射,总剂量为6.5Gy.从存活率、生存状态和小肠组织病理切片等方面分析重组人KGF-2突变体的防治效果.结果 重组人KGF-2突变体防治组存活率明显高于安多霖防治组和模型组;病理切片观察结果显示,重组人KGF-2突变体给药能够促进小肠隐窝细胞的增生,加快受损肠黏膜上皮的修复.重组人KGF-2突变体防疗组在毛色、行动状态等形态学指标上也明显好于模型组. 结论重组人KGF-2突变体给药可以显著提高存活率,对60Co γ照射小鼠的小肠组织损伤具有较好的防治作用.     

突变SOD1cDNA亚克隆入酵母穿梭表达质粒pGBKT7中

目的将突变SOD1cDNA亚克隆入酵母穿梭表达质粒pGBKT7中。方法利用PCR方法从重组子pEGFP—N2-mSOD1中扩增突变的SOD1cDNA片断。以EcoRⅠ／salⅠ双酶切突变SOD1cDNA片断和酵母穿梭表达质粒pGBKT7，在T4DNA连接酶的作用下，连接突变SOD1cDNA片断和酵母穿梭表达质粒pGBKT7。转化感受态DH5α，筛选重组子，进行双酶切和测序鉴定。结果经酶切和测序鉴定，突变SOD1cDNA成功地亚克隆入酵母穿梭表达质粒pGBKT7中。结论亚克隆成功，可以对目的基因进行下一步研究。     

双极障碍治疗药市场争夺战继续

通过药对药的研究礼莱公司已经得到更多的资料 ,显示其非典型抗精神病药奥氮平 (ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ ,Ｚｙｐｒｅｘａ)在控制双极障碍躁狂症中可能比雅培公司的ｄｉｖａｌｐｒｏｅｘ(Ｄｅｐａｋｏｔｅ)更有效。 2 0 0 0年 9月礼莱公司首次报道了奥氮平 3周的研究结果 ,指出在急性躁狂症的对照中奥氮平比ｄｉｖａｌｐｒｏｅｘ更有效而且耐受性较好。从那以后 ,两家公司就被锁定在一场营销战中 ,而对新的挑战者雅培公司正尽力捍卫其领头羊的位置。 2 0 0 0年末 ,雅培公司报道的对比研究结果表明 ,ｄｉｖａｌｐｒｏｅｘ与奥氮平同样有效 ,但…