特异性结合白色念珠菌（1，3）-β-D-葡聚糖单链 DNA 适配子的筛选及其应用

目的：通过指数富集的配基系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment ,SELEX）筛选能与高亲和力（1,3）‐β‐D‐葡聚糖特异性结合的适配子,并用该适配子建立双适配子夹心酶联寡聚核苷酸吸附试验（enzyme‐linked oligonucleotide assay ,ELONA）来对深部真菌感染血浆进行辅助诊断。方法提取白色念珠菌 ATCC10231株细胞壁（1,3）‐β‐D‐葡聚糖,通过 SELEX 筛选获得能与（1,3）‐β‐D‐葡聚糖特异性结合的高亲和力单链 DNA 适配子,并用该适配子建立双适配子夹心ELONA 来检测深部真菌感染血浆中的（1,3）‐β‐D‐葡聚糖。结果从白色念珠菌细胞壁中成功提取了高聚合度（1,3）‐β‐D‐葡聚糖,并通过体外酶解获得可溶性低聚合度（1,3）‐β‐D‐葡聚糖作为筛选靶标。用SELEX 进行12轮筛选后,从初始单链 DNA 文库中获得2个高亲和力适配子 AU1和 AD1,检测发现它们并非结合于（1,3）‐β‐D‐葡聚糖的同一表位。双适配子夹心 ELONA 检测深部真菌感染血浆中（1,3）‐β‐D‐葡聚糖的特异性和敏感度分别为91．94％和92．31％。结论从初始单链 DNA 文库中成功获得可与（1,3）‐β‐D‐葡聚糖特异结合的高亲和力适配子,为深部真菌感染新型诊断试剂的研发奠定了基础。     

2016-2017年武汉地区儿童细小病毒B19感染及流行情况分析

摘要：目的 了解武汉地区儿童细小病毒B19感染状况及流行病学特征。 方法 采集自2016年1月1日至2017年12月31日在我院门、急诊和住院部就诊或住院治疗的疑似细小病毒B19感染儿童静脉血,通过ELISA法检测血清细小病毒B19-IgM,并对抗体活性值在10 ~20 U/mL之间的标本进行细小病毒B19 DNA定量检测,综合分析武汉地区儿童细小病毒B19感染状况及流行病学特征。结果 武汉地区2017年儿童细小病毒B19感染率为2.83%,较2016年6.31%的感染率显著下降,两年平均总体感染率为4.34%;儿童细小病毒B19感染状况具有明显的年龄（2岁以上）及性别（女性高于男性）差异; ELISA法检测HPV-B19抗体活性值处于10~13 U/mL之间的标本与PCR检测结果一致性较好,阴性符合率为93.54%;抗体活性值处于13~17 U/mL之间的标本结果一致性较差,阳性符合率为43.21%。抗体活性值17~20 U/mL的标本,阳性符合率为74.81%。结论 武汉地区儿童细小病毒B19感染具有年龄、性别差异,同时对于经ELISA法检测抗体活性值处于13~20 U/mL之间的标本,有必要进行PCR检测确诊。     

ZW10相互作用着丝粒蛋白对神经母细胞瘤增殖的影响及机制研究

目的:探讨ZW10相互作用着丝粒蛋白(ZW10 interacting kinetochore protein, ZWINT)对神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞增殖的影响及作用机制。方法:利用NB数据集分析ZWINT表达水平与NB预后及临床分期的关系。EdU实验、流式细胞术和γH2AX免疫荧光染色分别检测干扰ZWINT表达对NB细胞增殖、周期分布和DNA损伤修复能力的影响。免疫组织化学/蛋白质印记(Western blot)检测MYCN扩增和无扩增组织及细胞系中ZWINT的表达情况。荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测干扰/过表达MYCN对ZWINT表达的影响。在线预测ZWINT的启动子区域MYCN的结合位点,ChIP-PCR和荧光素酶实验验证MYCN靶向调控ZWINT表达。强力霉素诱导Tet-on MYCN SH-SY-5Y细胞过表达MYCN同时干扰ZWINT表达,检测ZWINT对MYCN介导的细胞增殖、周期和DNA损伤修复功能的影响。结果:ZWINT表达水平与NB患儿总生存率、无事件生存率呈负相关,其表达随NB分期升高而增高。ZWIN...     

宫颈癌患者宫颈上皮细胞中硫氧还蛋白2的表达水平及临床意义分析

目的探讨宫颈癌患者宫颈上皮细胞中硫氧还蛋白2(thioredoxin,Trx2)相对表达水平及临床意义。方法选取2018年8月至2019年12月在武汉市妇幼保健院经病理学确诊的宫颈癌患者32例、子宫颈上皮瘤样变患者39例及健康人对照者30例的宫颈刷片组织,分别采用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)法检测宫颈上皮细胞标本中Trx2的表达状况,并分析宫颈癌患者不同临床病例特征下Trx2表达水平的差异。结果宫颈癌组Trx2水平(251.62±43.77)比子宫颈上皮瘤样变组(443.18±57.53)和健康人对照组(668.44±50.61)显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。Trx2表达水平与宫颈癌患者年龄、组织学类型及肿瘤大小无关(P0.05),而与肿瘤分化程度、是否存在淋巴结转移及FIGO分期密切相关(P0.05)。结论宫颈癌患者宫颈上皮细胞中Trx2表达显著降低,与宫颈癌进展、分化程度有关,Trx2可能在宫颈癌进展中发挥重要作用。     

MYCN通过抑制NK细胞介导神经母细胞瘤细胞免疫逃逸机制研究

目的探讨MYCN对NK细胞的调控作用及其介导神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞免疫逃逸机制。方法采用荧光原位杂交法(FISH)法和免疫组织化学法检测NB组织MYCN的表达情况, 流式细胞术检测外周血NK细胞数量及比例、NK细胞的活化、NK细胞表面活化受体和NB细胞表面相应配体的表达状况;干扰/过表达NB细胞系MYCN, 与分选的健康儿童NK细胞进行共培养, ELISA法检测共培养上清中细胞因子的分泌状况, 4 h乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对NB细胞的杀伤性。结果 MYCN高表达NB患儿外周血NK细胞数量(F = 45. 53, P = 0. 0002)及比例(F = 43. 93, P = 0. 0003)显著减少, MYCN可显著抑制γ-干扰素、颗粒酶B和穿孔素的释放[SK-N-BE (2):t = 9. 10, P = 0. 0008;t = 4. 76, P = 0. 0089;t = 4. 66, P = 0. 0096;SH-SY-5Y:t = 16. 79, P < 0. 0001;t = 35. 85, P < 0. 0001;...     

儿童神经发育障碍疾病研究进展

托莫西汀是第一种用于治疗儿童和成人注意力缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder,ADHD）的非兴奋剂药物,其安全性和有效性在儿科人群中表现出显著的差异性。该文首先从托莫西汀主要代谢酶CYP2D6基因多态性方面综述了影响托莫西汀药代动力学的遗传因素。同时,从治疗药物监测角度,总结了已有研究提出的托莫西汀在ADHD患儿中的有效浓度参考范围。总体而言,托莫西汀血药浓度峰值与临床疗效之间存在相关性,但缺乏中国儿童人群数据。因此,建立托莫西汀暴露的临床相关指标,定义中国ADHD患儿的有效治疗范围,结合CYP2D6基因分型,为托莫西汀的精准用药提供支持十分必要。     

过敏性紫癜与紫癜性肾炎患儿免疫功能的比较及临床意义探讨

目的通过检测过敏性紫癜及紫癜性肾炎患儿外周血免疫细胞、免疫球蛋白及补体的改变,探讨过敏性紫癜及紫癜性肾炎患儿免疫功能的差异及其意义。方法收集2017年9月至2018年4月收治入院明确诊断为过敏性紫癜的患儿280例及紫癜性肾炎患儿68例,分别采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞群及NK细胞群细胞数量,分析其比例,采用速率散射免疫比浊法分别检测外周血(免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、IgE及补体C3、C4水平)及晨尿(尿微量清蛋白及尿肌酐)水平。结果与过敏性紫癜组相比,紫癜性肾炎组患儿尿肌酐显著降低,尿微量清蛋白与尿肌酐比值(ACR)显著增高,差异有统计学意义(P0.05);淋巴细胞亚群数量下降明显,尤其是CD3~+、CD4~+及CD19~+淋巴细胞的数量显著降低,差异有统计学意义(P0.05);而CD8~+、CD16~+CD56~+NK细胞数量比较,差异无统计学意义(P0.05),但是CD3~+、CD8~+淋巴细胞比例显著升高,CD19~+细胞比例显著下降,Th/Ts显著下降,差异有统计学意义(P0.05);免疫球蛋白IgA、IgG及补体C4显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论过敏性紫癜及紫癜性肾炎患儿肾脏功能都有损伤,但紫癜性肾炎患儿肾脏损伤更加严重,表现为以CD8~+为代表的细胞毒性损伤及补体消耗、免疫复合物在肾脏的沉积。     

过敏性紫癜患儿的免疫功能变化及临床意义

目的通过检测过敏性紫癜患儿外周血免疫细胞、免疫球蛋白及补体的改变,探讨儿童过敏性紫癜的免疫学发病机制及其意义。方法收集2017年9月至2018年4月收治入院明确诊断为过敏性紫癜的患儿280例,同时随机收集同年龄段健康体检儿童50例(健康对照组),分别采用流式细胞术检测所有儿童外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞群及NK细胞群的变化,采用速率散射免疫比浊法检测外周血免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、IgE及补体C3、C4水平。结果与健康对照组相比,过敏性紫癜患儿淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞及CD16~+CD56~+NK细胞数量明显下降(P0.05),CD19~+B淋巴细胞数量差异无统计学意义(P0.05),但CD19~+B淋巴细胞亚群比例明显增高(P0.05),CD16+CD56+NK细胞比例明显降低(P0.05),其余淋巴细胞比例差异无统计学意义(P0.05);免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、IgE及补体C3水平明显增高(P0.05),补体C4差异无统计学意义(P0.05)。结论过敏性紫癜患儿体内免疫功能紊乱,表现为细胞免疫和NK细胞介导的固有免疫功能下调。     

结核分枝杆菌脂糖ManLAM对CE蛋白抗原诱导的B细胞活化的影响

目的甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖(mannose-capped lipoarabinomannan,ManLAM)是结核分枝杆菌细胞壁的主要成分之一,本研究拟探究ManLAM对CE蛋白诱导B细胞抗结核免疫应答的作用及潜在机制。方法磁珠分选活动性肺结核患者B细胞,ManLAM协同CE蛋白离体刺激,CFSE检测增殖,流式检测B细胞凋亡及活化,ELISA检测细胞因子及抗体亚型分泌水平,酶联斑点试验检测B细胞分化抗体分泌细胞的水平。结果ManLAM抑制CE蛋白诱导的B细胞增殖、活化、促炎因子释放和分化为CE蛋白特异性IgG分泌细胞,但对凋亡和分化为IgM分泌细胞无显著影响。ManLAM可通过TLR2抑制CE蛋白特异性IgG1和IgG3的分泌,诱导IgG4的分泌。结论本研究证实ManLAM可抑制B细胞抗结核免疫应答,为结核分枝杆菌免疫逃逸提供了新的理论依据。