FL联合TPO体外培养AC133+细胞表面标记的变化

目的:探讨脐血造血干/祖细胞的体外扩增.方法:免疫磁珠法分离纯化脐血AC133+细胞,在细胞因子FLT3配体、血小板生成素作用下,体外扩增,检测有核细胞扩增的倍数.采用流式细胞仪分析细胞表面标志的变化.结果:FLT3联合血小板生成素体外培养2周.有核细胞扩增(18±8)倍.CD34细胞扩增2.8倍,AC133+未获扩增,CD34细胞纯度由(56±23)%下降到(8±1)%,AC133+细胞由85%下降到(0.1±0.1)%.随着体外培养时间延长至4周,有核细胞,CD34+进一步扩增.分别扩增475倍和17倍.但细胞随之发生分化,CD34+细胞占有核细胞中的比例下降至2%,AC133+细胞消失.CD45细胞上升到1.3%.结论:FL联合TPO长期培养AC133+细胞能使CD34细胞扩增.     

脐血造血干细胞库建立及其临床应用

目的 建立脐血造血干细胞库,用于治疗白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血等疾病。方法 采集新生儿脐血,用6％HES离心法分离脐血有核细胞以缩小脐血体积,样本以10％DMSO保存,检测有核细胞数、CD_(34)~+、CFU-GM及HLA,并作病原学捡测。结果 收集590份脐血,合格230份(合格率39％),平均脐血体积(89±20)ml,平均有核细胞数(1.48+0.36)×10~9,分离后有核细胞数(1.25±0.28)×10~9,有核细胞回收率(91+7)％,脐血CD_(34)~+细胞的百分率为(0.37±0.26)％,复苏后CFU-GM回收率为84％,平均每份脐血含CFU-GM(0.9±0.4)×10~6个集落,14％的样本CMV抗体阳性。73人查询,HLA 4个抗原以上相合率为95.7％。至2001年7月,提供3份脐血用于非亲缘脐血移植,1份用于亲缘脐血移植,3例植入,1例排斥。结论 建立脐血库有良好的应用前景。     

深低温保存对脐血长期培养起始细胞含量的影响

目的 :探讨深低温保存对脐血长期培养起始细胞 (L ong term culture initial cell,L TC- IC)含量的影响。方法 :利用 6 %羟乙基淀粉法分离脐血单个核细胞 ,采用基质细胞直接接触培养系统和 CFU- GM检测方法检测新鲜脐血和深低温保存的脐血中长期培养起始细胞和造血祖细胞。结果 :脐血深低温保存复苏后 ,CFU- GM由97± 5个 / 1× 10 5 MNC减少到 84± 13个 / 1× 10 5 MNC,回收率为 (83± 12 ) % ;L TC- IC87± 2 0个 / 1× 10 5 MNC减少到 6 8± 33个 / 1× 10 5 MNC,回收率为 (76± 33) %。结论 :深低温保存后 ,脐血中 L TC- IC的含量减少 ,但脐血仍保存大部分造血功能。     

不同标记法及去红细胞法对检测微量脐血CD34+造血干细胞含量的影响

目的 采用ISHAGE(international society of hematotherapy and graft engineering)法和常用的CD34^ 造血干细胞流式检测方法对同一脐血样品进行比较实验，确定更适用于微量脐血CD34 ^ 造血干细胞含量检测的方法。方法 分别采用ISHAGE造血干细胞计数协会推荐方法、低渗NH4C1去红细胞CD45／CD34双色标记法(NH4C1双标法)、OptilyseC溶血剂去红细胞CD34单色标记法(OptilyseC单标法)、低渗NH4C1去红细胞CD34单色标记法(NH4C1单标法)、羟乙基淀粉沉淀去红细胞CD45／CD34双色标记法(HES双标法)检测脐血造血干细胞含量，并比较不同方法测得数据的差异。结果 8份脐血标本用ISHAGE方法测得CD34^ 造血干细胞含量的中位数为0．278％，NH4C1双标法测得结果为0．297％，与ISHAGE方法相比差异无显性。用HES双标、OptilyseC单标法和NH4C1单标法测得的结果分别为5．715％，0．391％和0．741％，与ISHAGE方法相比差异有显性。结论 ISHAGE方法是一种公认的准确性高，重复性好的检测造血干细胞方法。OptilyseC单标法、NH4C1单标法和HES双标法测定结果比实际值偏高。     

非程控-80℃冷冻保存自体外周血干细胞移植的临床研究

外周血干细胞(PBSC)大容量单采和非程控-80℃冷冻保存是一种简便、实用的造血干细胞采集和保存方法,国外自90年代以来开始有这方面的报道[1～3],笔者用-80℃冷冻保存的自体PBSC进行移植治疗恶性血液病和实体瘤29例获得成功,现报道如下.     

丙型肝炎病毒及恶性疟原虫复合多表位抗原基因与谷胱甘肽转硫酶基因的融合表达及其在小鼠中免疫应答的研究

目的：探讨复合多表位丙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）及恶性疟原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ,Ｐｆ）双价疫苗的可行性。方法：将人工合成的复合多表位ＨＣＶ基因ＰＣＸ及Ｐｆ抗原基因ＡＢ（ＳＰｆ６６＋ＳＰｆ１０５）克隆到谷胱甘肽转硫酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴ）表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ中,并在大肠杆菌中高效表达ＧＳＴＨＣＶＰｆ复合抗原（ＧＳＴＣＡＢ）,分析表达产物的免疫特异性、免疫原性及安全性。结果：ＧＳＴＣＡＢ可被ＨＣＶ患者血清、鼠抗ＧＺＰＣＸ及鼠抗Ｐｆ抗体特异识别,可诱发小鼠产生针对ＧＳＴＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ及ＰｆＡｇ的特异性体液免疫应答及针对ＧＳＴＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ的迟发性超敏反应,免疫后ＣＤ８＋Ｔ细胞比例略为升高,免疫小鼠未见明显的毒副作用。结论：ＧＳＴＣＡＢ融合蛋白具有良好的ＨＣＶ及Ｐｆ免疫特异性,可诱发理想的体液及细胞免疫应答,可望成为ＨＣＶＰｆ双价疫苗的候选抗原。