先天性唇腭裂综合序列治疗5O2例临床护理程序效果观察

目的：总结采取综合序列治疗5O2例先天性唇腭裂患者手术前后临床护理经验,旨在进一步提高护理质量。方法：对5O2例先天性唇腭裂患者行手术整复,并给予手术前后临床护理程序,包括健康宣教、心理护理、术前护理、术后护理、出院指导等。结果：本组患者临床效果均满意,414例患者唇部创口一期愈合,外貌明显改善,11例腭裂术后发生腭瘘或复裂,其余患者创口愈合良好,语音明显改善。结论：规范的手术前后临床护理程序有助于唇腭裂患者整复手术的成功。     

隐睾发生过程中DNA甲基化状态和甲基化转移酶表达的实验研究

目的研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯[Di—（2-ethylhexy）phthalate,DEHP]作用于孕鼠后,胎鼠睾丸组织基因组DNA甲基化水平的变化及3种DNA甲基化转移酶的表达情况;探讨DEHP所致表观遗传修饰改变在睾丸下降过程中的作用。方法妊娠昆明小鼠（KMmice）随机分为3组,即正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组,每组15只。玉米油对照组和DEHP实验组自妊娠第12．5天到妊娠第18．5天分别持续经口予以玉米油和DEHP,用量按每日500mg／kg,正常对照组不予灌药。采用高效液相色谱仪检测基因组DNA甲基化水平,实时荧光定量PCR检测3种DNA甲基化转移酶的表达量。结果正常对照组和玉米油对照组DNA甲基化水平和3种甲基化转移酶的表达均无统计学意义（P〉0．05）：DEHP实验组DNA甲基化水平比对照组增高约10％。与对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．05）;实验组3种甲基化转移酶的表达量均比对照组高,与对照组相比,差异有显著统计学意义（Dnmt1,P〈0．05;Dnmt3a,P〈0．01;Dnmt3b,P〈0．05）。结论环境内分泌干扰物DEHP通过影响3种甲基化转移酶的表达而导致基因组DNA甲基化水平升高,从而抑制睾丸下降过程中多种基因的表达,发生隐睾。DNA甲基化等表观遗传学修饰的改变可能是DEHP诱发隐睾的分子机制之一。     

转录因子Twist的siRNA筛选、腺病毒构建及功能检测

目的 筛选特异性沉默人的Twist基因的siRNA序列,构建siTwist腺病毒并在MG63及143B骨肉瘤细胞中进行功能鉴定.方法 体外退火获得4组siTwist双链DNA序列,克隆至含有Twist基因的pSOS-Twist质粒中获得pSOS-siTwist质粒,脂质体转染HEK293细胞,GFP检测筛选有功能的siTwist片段,将筛选出的siTwist序列构建腺病毒,感染143B骨肉瘤细胞.通过RT-PCR、Western 印迹检测Twist的表达.siTwist与Twist腺病毒共感染MG63骨肉瘤细胞,细胞计数及细胞侵袭实验检测siTwist对Twist的抑制作用.结果 在HEK293细胞中,4组siTwist中有2组GFP的表达明显降低,且siTwist腺病毒能抑制143B骨肉瘤细胞中内源性的Twist表达,Twist腺病毒能促进MG63骨肉瘤细胞的增殖和转移,而两组siTwist与Twist共感染组MG63细胞的增殖及迁徙率均明显低于Twist组(P<0.05).结论 筛选出两对特异性沉默Twist基因的siRNA片段,并成功构建腺病毒,转染细胞后能有效抑制内源性和外源性的Twist表达,为研究Twist在骨肉瘤细胞增殖和转移中的作用及具体机制提供了有效的分子工具.     

以形态与组织学为基础筛选诱导胎鼠腭裂的四氯二苯二噁英最适剂量

目的观察在不同四氯二苯二噁英(TCDD)剂量的作用下,胎鼠腭裂形成过程中的形态学、组织学变化,以筛选TCDD诱导腭裂模型的最适剂量。方法C57BL/6J孕鼠于妊娠第10天随机分为对照组和实验Ⅰ～Ⅳ组,每组6只;对照组以玉米油0.1ml灌胃,实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别以TCDD32、28、24、20μg/kg灌胃。妊娠第17.5天处死孕鼠,称量孕鼠及胚胎体重,记录活胎鼠数、腭裂数、吸收胎及死胎鼠数。另取15只C57BL/6J孕鼠随机分组同前,处理方法同前;各组分别于妊娠第13.5、14.5和15.5天剪取胎鼠头部,解剖显微镜下观察;并行苏木精-伊红染色(HE染色),观察。结果各组孕鼠增加的体重及活胎鼠的体重差异均无显著性。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组较对照组双侧腭突发育瘦小,上抬延迟;Ⅳ组双侧腭突发育及上抬与对照组相比无明显差异。Ⅰ～Ⅳ组胎鼠腭裂发生率分别为97.37%、93.02%、65.12%、56.82%,对照组未见胎鼠腭裂形成。结论 TCDD28μg/kg是建立C57BL/6J胎鼠腭裂模型的最适剂量。     

党参皂甙减轻大鼠移植肾缺血再灌注损伤中细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨党参提取物皂甙减轻移植肾缺血再灌注损伤中细胞凋亡的作用及其机制.方法 将雌、雄各半SD大鼠随机分成三组,每组20只,即假手术组、缺血再灌注组和皂甙干预组.假手术组不进行肾移植,仅切除右肾,游离左肾动静脉,暴露左肾1 h后关闭腹腔.缺血再灌注组和皂甙干预组建立大鼠移植肾缺血再灌注损伤模型.皂甙干预组分别于肾移植前48、24和0.5 h经腹腔注入皂甙溶液(每千克体重80 mg).移植肾再灌注后24 h,取大鼠外周血和移植肾组织待测.检测各组血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测各组肾组织原位细胞凋亡指数(AI);采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测与细胞凋亡有关的基因Bcl-2和Bax mRNA在各组肾组织中的相对表达量.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组和皂甙干预组血BUN和Cr水平都显著升高(P＜0.05);移植肾细胞凋亡指数也显著增高(P＜0.05);移植肾组织中Bcl-2 mRNA表达显著降低,Bax mRNA表达显著增高(P＜0.05).与缺血再灌注组比较,皂甙干预组血BUN和Cr值明显下降(P＜0.05);移植肾细胞凋亡指数明显下降(P＜0.05);移植肾组织中Bcl-2 mRNA表达显著增加,Bax mRNA表达明显下降(P＜0.05).结论 党参皂甙在移植肾缺血再灌注损伤中能显著减轻细胞凋亡.其机制可能是通过对Bcl-2基因表达的上调和对Bax基因表达的下调,从而抑制细胞的凋亡.     

人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞的诱导分化

目的观察人骨髓间充质干细胞（HBMCs）的体外培养及向血管内皮细胞的诱导分化结果。方法利用密度梯度离心法将HBMCs从人骨髓中分离出来,体外扩增。将培养至第3代的HBMCs加入含血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（bFGF）的培养基定向诱导,使其向血管内皮细胞分化。用免疫细胞化学和流式细胞学方法检测诱导后的细胞表型。结果原代HBMCs培养3周后细胞呈梭形,诱导后第7天的细胞呈椭圆形或不规则形,第14天细胞大致呈＂铺路石＂样改变,细胞化学方法检测发现其CD31、CD34、vWF因子呈阳性,流式细胞仪测定CD31、vWF因子阳性细胞分别占87.5%、82.6%,CD31、vWF因子均阳性的细胞占71.2%。结论 HBMCs在VEGF、bFGF的诱导下向血管内皮细胞方向分化。     

儿童车祸伤创面脱细胞同种异体真皮加自体刃厚植皮治疗的长期疗效观察

【】 目的：观察脱细胞同种异体真皮与自体刃厚皮复合植皮封闭儿童车祸伤创面后长期疗效情况。方法：车祸后下肢皮肤软组织坏死病例60例,随机分为两组。治疗组30例,坏死皮肤软组织一期予以清除并植入脱细胞同种异体真皮,3周后植入大张自体刃厚皮片。对照组30例,坏死皮肤软组织一期予以清除,创面换药,肉芽红润后予以植入大张自体刃厚皮片。创面完全封闭后出院。术后1月、3月、6月、1年、以后每年1次,最长随访至5年,观察创面愈合后外形、色泽、弹性。B超测量真皮厚度、硬度计测定硬度。结果：早期随访：治疗组术区较饱满、瘢痕轻、瘢痕无破溃及水泡;对照组术区瘢痕较重,有破溃及水泡。5年随访：治疗组术区色泽接近正常皮肤、局部较饱满、光滑、柔软、瘢痕轻且平整、弹性好,B超测量其真皮厚度低于对照组(P＜0.05),超过正常皮肤组(P＜0.05),真皮回声接近正常真皮,硬度接近正常皮肤;对照组术区凹陷、瘢痕重、质硬、弹性差,其真皮厚度及硬度均超过治疗组及正常皮肤(P＜0.05),B超显示真皮回声明显杂乱,增强。结论：脱细胞同种异体真皮与自体刃厚皮复合植皮封闭儿童车祸伤创面长期随访,局部效果明显优于单一刃厚植皮,明显改善了愈合后皮肤质量,有较好的临床应用价值。     

DEHP诱导的隐睾鼠胰岛素样因子3基因CpG岛甲基化状态研究

目的 研究胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3)基因在邻苯二甲酸二已酯(DEHP)致小鼠隐睾中DNA甲基化的状态.方法 运用"MethPrimer"软件对INSL3基因进行分析.预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)检测INSL3基因CpG岛的甲基化状况,并应用RT-PCR检测INSL3基因在正常组与实验组睾丸组织中的表达情况.结果实验组INSL3基凶第一外显子区存在CpG岛甲基化;实验组INSL3基因mRNA表达显著下降.结论 INSL3基因第一外显子区CpG岛的异常甲基化导致INSL3在隐睾鼠睾丸中表达降低,可能与隐睾的发生密切相关.     

讲座是临床课程和实习的有益补充

目前,国内的医学教育模式及流程大同小异,由医学基础课程、临床课程和临床实践三部分组成.这种模式有利于医学生完整系统地掌握医学知识,但其接触临床的时间较晚,不利于其实践能力的培养和提高[1].学生在校期间所获知识的基础性、单一性、典型性、稳定性与临床实践中的多样性、复杂性、综合性、多变性之间存在着较大的矛盾[2].如何帮助实习生解决上述矛盾,取得较好的实习效果呢?