钙和维生素D对高脂饮食诱发的小鼠乳腺上皮增生的影响

本研究目的是观察饮食中添加钙和维生素D对高脂饮食诱发的小鼠乳腺上皮细胞增生的影响。将四周龄小鼠随机分成三组，分别给予对照AIN－76A饲料，高脂低钙低维生素D饲料（试验饲料Ⅰ）和高脂加钙加维生素D饲料（试验饲料Ⅱ）。饲养九周后终止试验，小鼠植入渗透泵灌注溴脱氧尿苷（Brdu）72小时。结果显示试验饲料Ⅰ组的小鼠乳腺终末小导管上皮细胞Brdu标记指数与对照饲料组比较明显升高（P＜0．05）。而试验饲料Ⅱ组的BrdU标记指数与对照组相似（P＞0．05）。本实验研究发现进一步证明，高脂饮食能诱发小鼠乳腺小导管上皮细胞的增生，同时也提示饮食中添加钙和维生素D有助于预防高脂饮食的这种不良作用。     

不同毒力株弓形虫速殖子消减cDNA文库的构建

目的构建不同毒力株弓形虫速殖子cDNA消减文库。方法以弓形虫强毒株RH株速殖子为Tester、弱毒株Prugniaud株速殖子为Driver,进行正向抑制性消减杂交;以Prugniaud株为Tester、RH株为Driver,进行反向抑制性消减杂交。分别将获取的2组抑制性消减杂交产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并以PCR扩增鉴定插入片段。结果获得正向和反向cDNA消减文库,每个消减文库分别随机挑取384个阳性克隆,PCR扩增显示插入率为98%,片段长度在200~2000bp之间。结论通过抑制性消减杂交技术成功构建2个消减文库,为进一步筛选和鉴定弓形虫毒力相关基因奠定了基础。     

人参皂苷Rb1对内源性Aβ所致小鼠神经细胞Tau蛋白过磷酸化的干预作用

目的 探讨人参皂苷Rb1对神经干细胞的保护作用及机制.方法 将人参皂苷Rb1作用于APP转基因鼠分化中的神经细胞,用免疫荧光化学和免疫蛋白印记法测定总Tau蛋白磷酸化水平及Tau蛋白在Ser-396、Ser-262位点磷酸化水平.结果 与阳性对照组相比,人参皂苷Rb1处理组Tau蛋白的总磷酸化水平及在Ser-396和Ser-262位点磷酸化水平明显下降;而与阴性对照组相比,Tau蛋白总磷酸化水平及在Ser-396和Ser-262位点的磷酸化水平明显增高.结论 人参皂苷Rb1具有一定神经保护作用;其机制可能为直接促进神经细胞活性或通过调节Tau蛋白上游作用因子的活性.     

藻类及陆生高等植物叶绿体16S rRNA基因进化谱系及同源性分析

目的：了解杜氏盐藻与其他藻类和高等植物间的亲缘关系。方法：将杜氏盐藻的叶绿体16S rRNA序列与一些藻类和陆生植物叶绿体的16S rRNA序列资料进行同源性比较与分析,并构建进化树。结果：进化树显示整个植物界明显分为3个大的类群：蓝藻门、红藻门、隐藻门、金藻门、褐藻门、硅藻门和甲藻门形成一个类群,裸藻门单独形成一个类群,而绿藻门和陆生高等植物共同形成一个大的类群。陆生高等植物间的亲缘关系非常近,拥有一个共同的绿藻祖先,而杜氏盐藻、莱菌衣藻等所归属的团藻目则与其他绿藻及高等植物分离,独立形成一个极为分散的类群。结论：杜氏盐藻所隶属的团藻目属于较为原始的绿藻,彼此之间亲缘关系较远,而且与进化主干上的其他绿藻及高等植物较早分离。     

杜氏盐藻叶绿体16S rRNA基因的克隆

目的：克隆和鉴定杜氏盐藻叶绿体16Sr RNA基因。方法：根据衣藻、小球藻等绿藻叶绿体16Sr RNA基因序列,利用软件分析找出其高度保守区,据此设计引物,PCR扩增杜氏盐藻叶绿体16Sr RNA序列,并与莱茵衣藻、普通小球藻、绿肾藻和原始绿藻Mesostigma Vivide进行同源性比较。结果：序列分析表明所克隆的序列1110bp与莱茵衣藻、普通小球藻、绿肾藻和原始绿藻Mesostigma Vivjde 4种绿藻的序列同源性分别为85．0％、79.9％、81．3％和81．6％。结论：本实验中所克隆的序列为杜氏盐藻的叶绿体16S rRNA基因。     

小鼠canstatin cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:从小鼠肝脏组织克隆canstatin cDNA并在大肠杆菌(E.coli)中表达, 为进一步研究其抗肿瘤血管生成活性奠定基础。方法: 用Trizol试剂提取小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠canstatin(m canstatin)的cDNA,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析。将小鼠canstatin cDNA 定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中, 在大肠杆菌E.coli BL21中经IPTG诱导表达。结果:小鼠canstatin的cDNA长度为684bp,编码227个氨基酸,与已知的人canstatin的cDNA同源性为89%,氨基酸的同源性为96%。IPTG诱导原核表达载体pET30a(+)/m canstatin在大肠杆菌E.coli BL21中表达。结论: 首次成功克隆了小鼠canstatin的cDNA, 其原核表达载体pET30a(+)/m canstatin在大肠杆菌E.coli BL21中高效表达,小鼠canstatin抗肿瘤血管生成活性有待进一步研究。     

杜氏盐藻叶绿体转化载体pDS16S-CAT的构建

目的：利用同源重组方法，将外源基因氯霉素乙酰转移酶（CAT)转入杜氏盐藻叶绿体中。方法：以杜氏盐藻叶绿体16S rRNA序列为同源片段，构建盐藻叶绿体表达载体，并利用基因枪法转化盐藻，使CAT基因得到表达。结果：转化后的盐藻可以在含有氯霉素的培养基中生存3～4周，表明CAT基因已转入盐藻叶绿体中并表达。结论：盐藻叶绿体转化是可行的，为获得稳定转化的盐藻，需要合适的同源片段。     

简并引物在克隆盐藻热休克蛋白70基因家族中的应用

目的：利用简并引物扩增盐藻热休克蛋白70(hsp70)家族。方法：根据衣藻、矮牵牛花等真核生物hsp70氨基酸高度保守序列didlgtt，dqgnrttp，payfnds和ATKDAG设计2对简并引物，以盐藻hsp70 cDNA为模板进行巢式PCR扩增，产物经T-A克隆转化至JM109大肠杆菌中，经筛选后测序，将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析。结果：得到2个分别为372bp和354bp编码126及118个氨基酸残基的部分cDNA片段。推导的氨基酸序列与衣藻、矮牵牛花、番茄、果蝇和酵母hsp70和hsp70b比较有高度同源性。结论：所克隆的序列为盐藻hsp70和hsp70b部分cDNA片段。利用简并引物筛选cDNA文库是克隆基因家族重要的方法。     

格列吡嗪片在健康人体内的药代动力学及相对生物利用度

目的 测定格列吡嗪片在健康人体内的药代动力学参数及相对生物利用度.方法 18例健康男性志愿者随机交叉口服10 mg格列吡嗪片后,用HPLC法测定血浆药物浓度.结果 口服参比制剂或受试制剂后的主要药代动力学参数Tmax分别为 (2.39±0.50)、(2.33±0.49) h;Cmax分别为(675.3±151.7)、(647.1±166.7) μg/L; AUC0-t分别为(3565.4±733.4)、(3304.8±588.4) μg·h-1·L-1 .结论 两种制剂具有生物等效性.     

AIF的蛋白水平下调可减少TAp63γ诱导的细胞凋亡

目的：探讨凋亡诱导因子（AIF）在TAp63γ诱导细胞凋亡中的作用。方法：将质粒pcDNA3．1-TAp63γ转入人食管鳞癌EC9706细胞，抽提细胞DNA检测细胞是否凋亡，流式细胞仪检测凋亡率，并用亚细胞器分离技术分析AIF的转位；利用化学合成及基因重组技术构建AIF发夹状RNA表达载体，western blot检测干扰效果并用流式细胞仪分析凋亡率的变化。结果：pcDNA3．1-TAp63γ转染细胞24h后出现DNA ladder，凋亡率为13．64％，并在pcDNA3．1-TAp631转染组中细胞质和细胞核蛋白中检测到AIF；而空载体转染组则无DNA ladder，凋亡率为1．37％，且此组的细胞质和细胞核蛋白尤其是核蛋白内无AIF信号。成功构建表达发夹状AIF—siRNA的载体，其干扰效率约为80％。转染pcDNA3．1．TAp63γ 24h后，AIF—siRNA组的凋亡率是4．52％。结论：TAp63γ基因表达可诱导EC9706细胞凋亡；下调AIF的蛋白表达水平可降低TAp63γ诱导的细胞凋亡。