抗三硝基苯-人血清清蛋白McAb的制备与提纯

我们曾报道用可溶性蛋白(人IgD)作抗原,制备相应McAb,其融合率及阳性率均不够高。不久前我们制备了三硝基苯-人血清蛋白(TNP-HSA),并以它为抗原作杂交瘤试验,共作4块24孔培养板,结果融合率为47％(45/96),经ELISA鉴定,45孔中18孔有抗TNP-HSA抗体,阳性率为40％。选出一些阳性克隆,经三次有限稀释后,获得3株较稳定的效价较高的阳性克隆。经实验可初步推论,使用强抗原时(如TNP-HSA),融合率及阳性率均有所提高。至于此3株克隆能稳定到什么程度,因时间较短(只有12个月),     

人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的ＩＬ２Ｒα链的含量达１４００Ｕ／ｍｌ以上。     

白细胞介素2受体α基因表达中两组近端启动子活性的研究

淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素2受体(IL-2R)由α、β和γ三个亚基组成.其中α亚基只在激活淋巴细胞上表达,并且只能与IL-2特异性结合.因此,IL-2Rα基因的活化过程参与决定淋巴细胞增殖和免疫应答强度的调控.IL-2Rα基因至少存在两组近端启动子,即分别位于-58(5')及+1(3')转录起始位点及其各自上游30 bp附近的两个TATA盒.为探讨它们在PHA激活前后的淋巴细胞中IL-2Rα基因表达中的作用,应用PCR及分子重组技术构建了两组分别受IL-2Rα基因片段驱动的荧光素酶(Luciferase,Luc)报告基因质粒:     

重组人分泌型IL-2Ra与IL-2结合的生物活性及其分子量的测定(简报)

本组曾报道了通过基因重组技术构建成功重组分泌型人白介素2受体a亚基（rshIL－2Ra）cDNA真核表达质粒，并通过G418筛选获得了具有分泌该亚基的CHO细胞株。最近利用SDS－PAGE结合银染法，用抗sIL－2R抗体进行Western印迹实验发现，该细胞株培养上清液在相当于分子量为40000处有一条特异区带，证实rshIL－2Ra蛋白的分子量与理论值相一致。笔者进一步利用ELISA方法鉴定了rshIL－ZRa与IL－2的结合活性。首先将该细胞株培养上清浓缩液包被酶标板，再加人不同活性单位的重组人IL－2，然后依次加人羊抗人IL－2多克隆抗体，辣根过…     

人分泌型白细胞介素－2受体αcDNA的真核基因表达（简报）

人分泌型白细胞介素－２受体αｃＤＮＡ的真核基因表达（简报）程小款，杜恺，衡凤燕，王劲松，吴宁华，沈　（中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）在机体免疫网络中具有重要作用的白细胞介素－２受体（ＩＬ－...     

人淋巴细胞IL－2Rα基因转录起始位点的研究（简报）

人淋巴细胞ＩＬ－２Ｒα基因转录起始位点的研究（简报）衡凤燕，刘觉辉，沈珝琲（中国医学科学院，中国协和医科大学，基础医学研究所，医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）白细胞介素２受体α亚基（ＩＬ－２Ｒα）是在抗原或丝裂原刺激下诱导性地表达于Ｔ...     

白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素2受体（IL－2R）由α,β及γ三种亚基组成,其中只有IL－2Rα具有特异结合IL－2的活性,目前对IL－2Rα亚基的确切的功能尚水清楚。我们将IL－2Rα cDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后,经Wewtern印迹－ECL分析发现,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的89kD断裂片段,此结果提示,IL－2Ra亚基参与调节淋巴细胞凋亡。     

升温对T淋巴细胞增殖的影响

T细胞是机体内具有重要的免疫调节和效应功能的细胞群体,其功能表达不仅依赖于抗原或促分裂素引起的激活过程,还与细胞增殖有密切关系。基于机体在微生物病原感染时T细胞常处在体温升高与抗原激活影响下,以及升温对肿瘤的生长有抑制作用,本实验研究升温(热休克)对人T淋巴细胞增殖的影响。若以未经热休克预处理的激活淋巴细胞的~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)在酸不溶性物质(DNA)中的平均参入率为100％,则在先经16～24hPHA活化培养的淋巴细胞进行45℃10min处理后,~3H-