Tax1结合蛋白1对B细胞功能的抑制作用

目的探讨Tax1结合蛋白1(TAX1BP1)对B细胞增殖、活化、免疫球蛋白分泌等功能的影响。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19~+B细胞,转染siRNA下调TAX1BP1的表达;并利用TAX1BP1慢病毒感染B细胞株Raji细胞系建立稳定下调TAX1BP细胞系。体外用LPS刺激B细胞后通过CCK8、流式细胞术和ELISA法分别评价TAX1BP1对B细胞增殖、B细胞表面共刺激分子表达、细胞周期以及免疫球蛋白分泌的影响。结果与对照组相比,敲低TAX1BP1促进了B细胞的增殖(P=0.008)及Raji细胞的增殖(P0.000 1),上调了B细胞表面活化分子CD69和CD80的表达(P0.001),促进了免疫球蛋白lgG及lgM的生成(P0.05)。结论TAX1BP1可以通过抑制B细胞增殖、活化、抗体产生等多方面调节B细胞功能。     

Gasdermin家族蛋白在缺血再灌注损伤大鼠肾组织中的表达变化

目的研究gasdermin家族蛋白在缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠肾组织中的表达变化,并探讨该家族各蛋白与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的关系。方法 20只Sprague Dawley(SD)雄性成年大鼠随机分为假手术组与I/R组(n=10),分别给予假手术或肾脏缺血再灌注处理后,采集血液及肾组织标本;自动分析仪检测各大鼠血清肌酐、血清尿素氮水平,肾组织PAS染色评估损伤程度;蛋白印迹法检测肾组织中炎症因子interleukin(IL)-1β和interleukin(IL)-18、炎性半胱氨酸蛋白酶caspase-1和caspase-11的前体及活性体、gasdermin家族蛋白(GSDMA、GSDMB、GSDMC、GSDMD、DFNA5、DFNB59)前体及N端的表达水平。结果与假手术组比较,I/R组大鼠血清肌酐、血清尿素氮水平及肾小管损伤评分均显著增加(P0.000 1);肾组织中IL-1β、IL-18,caspase-1前体及活性体、caspase-11前体及活性体、GSDMD前体及N端表达水平均显著增加(P0.000 1、P0.001或P0.05),且GSDMD表达变化与肾功能损害程度、炎症因子表达变化呈显著正相关(P0.01),而GSDMA、GSDMB、GSDMC、DFNA5、DFNB59各蛋白前体及N端表达水平均无明显变化(P0.05)。结论 GSDMD蛋白前体及N端在缺血再灌注损伤大鼠肾组织中表达上调,而GSDMA、GSDMB、GSDMC、DFNA5、DFNB59前体及N端表达无明显差异,提示GSDMD蛋白可能是gasdermin家族中唯一介导AKI肾脏焦亡的成员,其他成员可能并不参与该病理生理过程。     

TAX1BP1调控B细胞自噬和凋亡的研究

目的 探究TAX1BP1在B细胞自噬与凋亡中的作用。方法 慢病毒感染B淋巴瘤细胞（Raji细胞）,敲低TAX1BP1表达。利用雷帕霉素处理Raji细胞,通过Western blot、细胞免疫荧光染色和流式细胞术,观察自噬流强弱以及细胞凋亡情况。通过检测自噬相关通路P53蛋白表达变化,初步探索调控机制。结果 荧光显微镜观察慢病毒感染阳性率在90%以上。与阴性组比较,shTAX1BP1组细胞中TAX1BP1的m RNA表达水平降低80%、蛋白表达水平降低90%。经10 nmol/L雷帕霉素处理后,与阴性组相比较,shTAX1BP1组LC3II/I比值显著下降（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bcl-2表达显著升高,Bax、Caspase-3表达显著下降。敲低TAX1BP1降低Raji细胞自噬水平,减少Raji细胞凋亡。敲低TAX1BP1增加P53蛋白表达,推测TAX1BP1可能通过P53相关通路调控Raji细胞的自噬与凋亡。结论 敲低TAX1BP1可抑制Raji细胞自噬与凋亡,初步预测这一生物学作用可能与P53信号通路有关。本研究为进一步探讨SLE的发病机制奠定了一定的实验基础。