蛋白转导域介导BCR/ABL抗原对CML患者T细胞的活化作用

目的：研究蛋白转导域(PTD)介导的BCR／ABL抗原对慢性髓细胞白血病(CML)患者T细胞的特异性活化作用。方法：利用基因工程技术，将PTD基因与CML b3a2 bcr／abl基因融合并原核表达。将纯化的PTD—BCR／ABL融合蛋白与CML患者外周血单个核细胞(PBMC)体外共孵育，用流式细胞仪分别检测CD4^ 、CD8^ T细胞上活化抗原CD25的表达。结果：终浓度为100mg／L的PTD—BCR／ABL抗原体外刺激4d后，10例CML患者中，5例表现为CD8^ T细胞活化，2例表现为CD4^ T细胞活化，其中有1例CD8^ 和CD4^ T细胞同时活化；而作为对照的BCR／ABL抗原刺激组无一例表现为CD8^ 或CD4^ T细胞活化。结论：PTD能将外源性BCR／ABL抗原转导入抗原呈递细胞内，加工呈递后激活抗原特异性CD8^ 及CD4^ T细胞，为CML特异性CD8^ 、CD4^ T细胞的体外活化及细胞免疫治疗开辟一条新的途径。     

带有蛋白转导结构域的bcr/abl癌蛋白片段表达及其跨膜转运

0　引言　人类免疫缺陷病毒 (human immunodeficiencyvirus,HIV) - 1编码的反式激活蛋白 TAT具有独特的跨膜运转方式 ,而且有转导速度快 ,效率高的特点 ,被称为蛋白转导结构域 (protein transduction domain,PTD) [1 ,2 ] .本研究用PCR扩增了慢性粒细胞白血病慢粒 bcr/ abl融合蛋白的基因片段 ,在其 5′端融合 PTD结构域的编码区后在大肠杆菌中进行了表达 .表达产物经纯化后 ,加入培养的 HL 6 0细胞 ,表达的蛋白可直接进入细胞内 .这一结果为用外源蛋白负载(L oading)免疫细胞提供了新的途径 .1　材料和方法1.1　 DNA重组　人工合…     

青蒿琥酯对高糖诱导的肾小管上皮细胞TLR4、NF-κB表达及合成的影响

目的：探讨青蒿琥酯( Art)对高糖诱导下的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB( NF-κB)表达及合成的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为6组：正常对照组、高糖组、Art小剂量组、Art中剂量组、Art高剂量组、依那普利组。培养48 h后收集各组细胞,采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测细胞TLR4、NF-κB mRNA 含量;采用 Western blot 法检测细胞TLR4、NF-κB蛋白表达水平。结果①与正常对照组比较,高糖组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显升高( P <0．05);②与高糖组比较, Art 小、中、高剂量组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显降低,且呈剂量依赖性(P<0．05);③与依那普利组比较,Art小、中、高剂量组细胞TLR4水平表达均升高,且Art高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。与依那普利组比较,Art小、中剂量组细胞NF-κB水平表达升高,Art高剂量组细胞NF-κB水平表达降低,且Art中、高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。结论 Art可呈剂量依赖性地抑制高糖环境下NRK-52E细胞TLR4、NF-κB的高表达及合成。     

对卫校学生英语口语教学的探讨

1确定学生学习英语口语的主体性,调动学生的积极性 在课堂上,学生是主体,就像运动场上运动员是主体,教练是指导者、启发者一样,因此教师必须调动主体学习英语口语的积极性^[1]。     

Notch信号在急性早幼粒细胞白血病患者骨髓中的表达

目的：通过检测急性早幼粒细胞性白血病（APL）患者治疗前后骨髓中Notch信号途径中受体、配体和靶基因的表达情况,探讨其在APL发生中的作用.方法：采用半定量RT-PCR技术检测APL患者治疗前后骨髓中Notch1,Notch2,Notch3,Notch4,Delta-like-l,Delta-like-4,Jagged1,Jag-ged2,Hes1,Hes5的表达.结果：受体Notch2、配体Jagged1、靶基因Hes1的表达在APL完全缓解后明显下调,其它受体、配体及靶基因的变化无统计学意义.结论：在APL患者治疗前后存在Notch基因的改变,Notch信号的这些改变在APL的发病机制中可能有重要作用.     

PTD介导蛋白通过血脑屏障及其在脑组织中的分布

目的：探讨HIV－1 TAT的蛋白转导结构域（protein transduction domain,PTD）介导的大分子蛋白通过血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）的作用及其在脑组织中的分布。方法：将纯化的PTD－BCR／ABL融合蛋白及伊文思蓝经尾静脉注入小鼠体内，制备全脑组织恒冷箱连续切片，用免疫组织化学染色法检测PTD－BCR／ABL融合蛋白在脑组织中的分布，用伊文思蓝作为指示剂检测PTD对BBB开放的影响。结果：将其注射到小鼠体内后，在全脑组织细胞中均检测到PTD－BCR／ABL融合蛋，呈非特异性组织分布；全脑组织除无BBB区域外，余脑区均无伊文思蓝渗入，PTD不引起BBB的开放。结论：PTD可在体内特异性介导大分子蛋白通过血脑屏障，并在全脑组织细胞中分布，为肽类或蛋白类大分子药物通过BBB进入中枢神经系统（central nervous ystern,CNS)开辟了一条新的途径。     

抗PTD-bcr/abl单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备单克隆抗体(mAb)并初步用于PTD-bcr/abl融合蛋白的研究,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据.方法:在大肠杆菌中表达PTD-bcr/abl融合蛋白,用所获得的蛋白免疫BALB/e小鼠,常规收集小鼠脾细胞与Sp2/O细胞融合,筛选杂交瘤细胞株的阳性克隆,并对其进行一系列鉴定.结果:(1)表达PTD-bcr/abl融合蛋白;(2)制备了抗PTD-ber/abl融合蛋白mAb;(3)用mAb以多种方法检测PTD-bcr/abl融合蛋白,证实此抗体效价高,特异性强.结论:此抗体可用于PTD-ber/abl融合蛋白的进一步研究.     

蛋白转导结构域-bcr/abl融合基因的构建和表达

目的 构建含蛋白转导结构域（PTD）与慢性粒细胞白血病（CML）bcr/abl融合基因片段的质粒，并在大肠杆菌中表达。方法 PCR扩增的CML bcr/abl基因片段，经DNA测序后，与合成编码PTD的DNA片段一起手稿质粒pET-16b，构建表达载体pEPb，转化大肠杆菌并进行了PTD－bcr/abl蛋白的诱导表达和纯化。结果 跨越bcr/abl断裂点的523bp的目的片段被有效地扩增，DNA序列分析表明所构建的含PTD－bcr/abl融合基因的质粒与设计相同。PTD－bcr/abl融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化。结论 成功地获得了PTD－bcr/abl融合蛋白片段的基因表达产物，为进一步研究CML的免疫治疗奠定了基础。     

长期联合化疗对成人白血病患者外周血细胞姐妹染色单体交换率的影响

目的 :探讨长期联合化疗对缓解期成人白血病患者是否有潜在的诱变性。方法 :应用姐妹染色单体交换 (SCE)技术检测 44例白血病患者外周血细胞 SCE率的改变。结果 :初治、复发的急性白血病 (AL)和 CML组患者 SCE频率明显高于 CR- AL 组和正常对照组 ;CR- AL 仍有少部分高 SCE病例 (5 / 16 ) ,而此类病例主要分布在接受联合化疗在 9个疗程以上的 CR- AL 的患者中 (3/ 6 )。结论 :初治、复发 AL 和 CML 患者存在着 DNA的损伤或 DNA修复机制缺陷 ,长期反复联合化疗可能引起部分病例 DNA的不稳定。     

非清髓单倍体造血干细胞移植联合格列卫治疗慢性粒细胞白血病

目的:探讨格列卫联合非清髓性单倍体造血干细胞移植在治疗慢性粒细胞白血病(CML)中的作用。方法:4例CML患者,采用移植前、后口服格列卫,以环磷酰胺、阿糖胞苷、抗胸腺细胞球蛋白、赛尼派、环胞素A等作非清髓性预处理的单倍体异基因外周血造血干细胞移植。结果:移植过程顺利,4例患者均植入成功,嵌合性植入。中性粒细胞>0.5×109/L天数,16(10~21)d;血小板>20×109/L天数,10(4~15)d。3例发生Ⅰ~Ⅱ度皮肤急性移植物抗宿主病(GVHD),1例发生Ⅳ度皮肤慢性GVHD。1例+27d死于肺部感染并多脏器功能衰竭,1例死于Ⅳ度皮肤慢性GVHD并发感染。2例无病存活(随访16个月仍健在),且Ph+染色体,bcr-abl融合基因转阴。结论:非清髓单倍体造血干细胞移植联合格列卫治疗CML,具有降低移植前白血病细胞负荷,抑制残留白血病细胞增殖,促进供者完全嵌合状态的转变,增强抗移植物白血病(GVL)效应的作用,是一种有效的治疗方法,值得进一步临床研究。