circ_ 0061140 靶向 miR-6838-5p 促进非小细胞肺癌细胞的增殖、 阻滞细胞周期、 诱导细胞凋亡

目的 通过实验研究确认环状 RNA (circRNA) circ_ 0061140 是否能靶向 miR-6838-5p 调控非小 细胞肺癌细胞的增殖、 细胞周期和凋亡。 方法 采用逆转录-定量聚合酶链反应 (RT-qPCR) 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 在非小细胞肺癌细胞中的表达情况。 将非小细胞肺癌 NCI-H1299 细胞分为 si-circ_ 0061140 组 (转染 si-circ_ 0061140; 低表达 circ_ 0061140)、 si-NC 组 (转染 si-NC; 阴性对照)、 NC 组 (未 转染; 空白对照)、 miR-6838-5p 组 (转染 miR-6838-5p 模拟物; 高表达 miR-6838-5p)、 miR-NC 组 (转染 miR-NC; 高表达 miR-6838-5p 的阴性对照)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-NC 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-NC)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-6838-5p 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-6838-5p)。 采用 Western 印迹检测细胞周期蛋白 D1 ( cyclinD1)、 活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 ( cleaved caspase-3) 蛋白表达, MTT 法检测细胞增殖能力, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。 双荧光素酶活性 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 的靶向结合。 结果 非小细胞肺癌组织、 细胞 NCI-H1299、 NCI-H2170、 NCI-H1975 中的 circ_ 0061140 表达量均比癌旁组织或正常肺上皮细胞 BEAS-2B 高, miR-6838-5p 表达量比 癌旁组织或 BEAS-2B 细胞低 (P均 < 0. 05)。 si-circ_ 0061140 组或 miR-6838-5p 组 NCI-H1299 细胞的 CyclinD1 蛋白表达量、 增殖能力、 S 期细胞比例比 NC 组减少, Cleaved-caspase-3 蛋白表达量、 G0 / G1期细胞比 例、 凋亡率比 si-NC 组或 miR-NC 组增加 (P均 < 0. 05)。 circ_ 0061140 靶向调控 miR-6838-5p 的表达。 共转 染 si-circ_ 0061140、 anti-miR-6838-5p 可减弱转染 si-circ_ 0061140 对细胞生物学行为的作用。 结论 低表达 circ_ 0061140 通过靶向非小细胞肺癌细胞的 miR-6838-5p, 抑制细胞增殖、 阻滞 G0 / G1期细胞周期, 并加速 凋亡。     

靶向ABCG2的RNA干扰逆转乳腺癌球囊细胞化疗耐药的研究

【摘要】 目的 通过靶向ABCG2的RNA干扰逆转乳腺癌球囊细胞化疗耐药。方法 以ABCG2为靶点,设计ABCG2-siRNA,构建ABCG2干扰慢病毒载体并包装好病毒,稳定转染到筛选好的MCF-7球囊细胞中,Western Blot方法检测ABCG2的表达情况,MTT法检测RNAi沉默ABCG2基因对球囊细胞的增殖抑制作用,同时流式细胞术检测RNAi沉默ABCG2对MCF-7球囊细胞在耐药情况下的细胞周期变化和凋亡状况。 结果 ABCG2干扰慢病毒载体成功构建并包装病毒,建立起ABCG2稳定沉默的MCF-7乳腺癌球囊细胞系。Western Blot显示球囊细胞中高表达的ABCG2,在RNAi沉默后表达下降;MTT结果显示,在5-Fu的作用下的MCF-7贴壁细胞抑制率高于MCF-7球囊细胞,而沉默ABCG2的MCF-7球囊细胞其抑制率会随着5-Fu量的增加而增高;流式细胞仪也显示球囊细胞大多处于G0/G1期,加入5-Fu和沉默ABCG2后,处于G0/G1期细胞数会增加,凋亡率会明显增加。结论 乳腺癌球囊细胞高表达ABCG2蛋白,其5-Fu耐药性高于亲本MCF-7细胞,沉默ABCG2后能够增加球囊细胞在5-Fu的作用下的细胞抑制率及凋亡率,从而逆转对5-Fu的耐药性。     

晚期非小细胞肺癌一线化疗的策略

近年来,肺癌的发病率和死亡率一直呈上升的趋势,已成为各种癌症死亡的首要原因。据估计,2013年美国肺癌新发患者数将达到228190例,居恶性肿瘤发病率第二位。而且,肺癌导致相关死亡人数达到159480例,