非受体型酪氨酸激酶-Syk蛋白的提取与纯化

目的 :从转染syk基因的Sf2 1细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白。方法 :将syk基因转染Sf2 1细胞 ,于 2 8℃培养 48h ,收集细胞 ,用超声波破碎仪裂解细胞 ,提取裂解液中总蛋白 ,用Yellow 3凝胶和Toyopearl AF Heptin 650M凝胶层析柱分离、纯化。层析液中的Syk蛋白存在和性质 ,用SDS PAGE、免疫印迹实验和等电聚焦实验鉴定。结果 :从 2 5亿个Sf2 1细胞裂解液中提取了含有Syk的 2 2 5mg蛋白质。经Yellow 3凝胶层析分离 ,得到两个亚种的Syk蛋白 ,相对分子质量 (Mr)均为72× 10 3 。进一步用Toyopearl AF Heptin 650M凝胶层析纯化后 ,得到两个纯的Syk蛋白 ,SDS PAGE、免疫印迹实验结果显示 ,两种Syk的Mr 均为 72× 10 3,与Syk的理论相对分子质量吻合。但等电聚焦实验显示 ,这两种Syk蛋白成分具有不同的pI值。结论 :从 2 5亿个转染syk基因的Sf2 1细胞中纯化出8mgSyk蛋白 ,纯度高于 95%。这两种Syk的Mr 虽然相同 ,但具有不同的pI值 ,是两个亚种。这些Syk可用于研究Syk的作用机制、抗Syk抗体的制备和Syk诊断试剂盒的制备等     

抗Stat3多克隆抗体的制备和其在乳腺癌诊断中的应用

目的:制备兔抗信号转导与转录激活因子3(Stat3)抗体,分析其在乳腺癌诊断中的价值.方法:应用人工重组小鼠Stat3蛋白,免疫雄性家兔制备抗Stat3抗体;用免疫印迹法分析检测抗Stat3抗体的纯度和特异性;应用免疫组化染色法检测65例乳腺癌和30例正常乳腺组织中Stat3蛋白的表达.结果:用Stat3蛋白免疫家兔被免疫6 wk后,其血清中抗Stat3抗体效价＞1∶ 256,000(A450 nm=0.40);SDS-PAGE和免疫印迹分析均在分子质量(Mr)92 000处有明显的带;65例乳腺癌组织的细胞浆和细胞核中,Stat3蛋白表达量在不同的组织学分级之间有统计学差异(P＜0.05).结论:高效价和特异性强的抗Stat3抗体被成功制备. 该抗体可用于乳腺癌组织细胞Stat3蛋白表达的检测.     

新生儿先天性梅毒4例的临床观察与护理

目的总结新生儿先天性梅毒的护理要点。方法严格消毒,密切观察新生儿的体温,呼吸,加强皮肤及梅毒假性麻痹的护理。结果 4例新生儿患儿经过合理的治疗及细心的护理未发生感染和发生并发症。结论消毒隔离措施,严密的监护以及对皮肤,丘疹和梅毒假性麻痹的细心护理是预防患儿交叉感染的主要措施。     

直肠癌手术后的护理

目的为了更好地促进直肠癌术后的康复。方法我们认真做好患者的术前、术后的评估及护理。结果使患者能接受永久性乙状结肠造口术的手术治疗方式,术后能主动参与有效的护理有助于提高患者术后的生活质量。     

兔抗Syk抗体制备和在乳腺癌诊断中的应用

目的：制备兔抗小鼠脾酪氨酸激酶(Syk)抗体，分析其在乳腺癌诊断中的价值。方法：应用重组小鼠Syk蛋白，常规免疫雄性家兔制备抗Syk抗体。用免疫印迹法检测Syk抗体的纯度和特异性。应用免疫组化法，检测乳腺组织中Syk蛋白的表达。结果：用重组小鼠Syk蛋白免疫家兔6wk后，静脉血中抗Syk抗体效价为1：6400(A450=1．03)。将Syk经SDS-PAGE分离，可见1条相对分子质量(Mr)为72000的蛋白条带．与理论值相符。用抗Syk血清做免疫印迹证实，在Mr为72000处有1条明显的带，证明是抗Syk特异性抗体。乳腺组织切片经抗Syk抗体免疫组化染色，在正常乳腺组织细胞胞浆中可见棕黄色颗粒，而浸润性乳腺导管癌组织的细胞浆不着色。结论：制备了高效价、特异性的兔抗Syk抗体。用该抗体检测证实，Syk在正常乳腺组织细胞中呈高表达，在乳腺癌组织细胞中表达缺失。有可能用于乳腺癌的临床诊断。