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多种中药成分诱导大鼠骨髓间质干细胞转变为神经元样细胞 总被引:22,自引:0,他引:22
目的 体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSCs)分化为神经元样细胞。方法 通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养 ,流式细胞仪检测其表面抗原表达 ,中药成分定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志。结果 大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。流式细胞仪检测结果显示CD1 4、CD1 1α、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性 ,CD2 9、CD44、CD90、CD1 0 5、CD1 66呈阳性。黄芪、天麻、人参、当归、脑新舒、人参蜂王浆等多种中药诱导 1~ 3h后大部分MSCs转变为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色神经元特异性烯醇酶 (NSE)、巢蛋白 (nestin)呈阳性 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阴性。结论 多种传统中药成分及中药制剂体外能诱导大鼠MSCs分化为神经元样细胞 相似文献
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背景:硝普钠作为血管扩张剂加入骨髓间充质干细胞培养过程中,对其分化潜能发生何种影响?目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞体内向造血细胞分化过程中加入硝普钠后的变化,并与单纯细胞移植的效果进行比较。设计:随机区组,对照观察。单位:广东医学院微生物免疫学教研室,广州医学院病理生理教研室。材料:实验于2006-08在广州医学院完成。选取清洁级出生七八周balb/c小鼠27只作为受体,随机数字表法分为3组:细胞移植组、硝普钠 细胞移植组、空白对照组,9只/组。另选取4周龄SD大鼠1只作为实验用骨髓间充质干细胞的供体来源。注射用硝普钠(50mg/支,北京双鹤现代医药技术有限责任公司,国药准字H11020907)。方法:①无菌条件下取出SD大鼠的股骨,进行骨髓间充质干细胞的分离培养。传至六七代作为供体细胞,消化离心,调整浓度为1×109L-1。细胞悬液中加入荧光素标记的抗体,流式细胞术检测表型。②取50mg/支的注射用硝普钠1支,加入2.5mL生理盐水混匀,从中取出1.0mL液体加入到100mL的生理盐水中,配成终浓度为200mg/L,配置后4h内使用。③各组小鼠细胞移植前均经5.0GyX射线全身照射4h,吸收剂量率为1.45Gy/min。照射完毕后,细胞移植组直接经尾静脉输注0.3mL骨髓间充质干细胞悬液(含1.5×106个细胞);硝普钠 细胞移植组先注射已配好的200mg/L硝普钠液体0.15mL,1min后立即输注骨髓间充质干细胞悬液0.3mL(含1.5×106个细胞);空白对照组输注等量无血清培养液。④移植后60d,各组存活小鼠眼眶外周取血,处死后常规制备骨髓及脾脏单细胞悬液,流式细胞术检测大鼠源性造血细胞CD11a与CD45的植入水平。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞培养扩增情况。②不同组织大鼠源性造血细胞的植入水平检测。结果:作为受体的27只balb/c小鼠均存活至实验结束。①骨髓间充质干细胞培养扩增情况:培养3d后细胞贴壁,形态比较均一,长梭形,至第6天细胞90%融合,无重叠。传代后24h内细胞完全贴壁,长梭形,增殖生长迅速,3d即达到完全融合。②不同组织大鼠源性造血细胞的植入水平检测:细胞移植组、硝普钠 细胞移植组在外周血、骨髓、脾细胞悬液中均可检测到低表达的大鼠源性造血细胞CD11a与CD45,且硝普钠 细胞移植组明显强于细胞移植组(t=2.619,P<0.05);空白对照组CD11a与CD45呈阴性表达。结论:大鼠骨髓间充质干细胞具有向造血细胞分化的潜能,硝普钠可促进其分化。 相似文献
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目的:对人骨髓间充质干细胞(Mesenchvmal stem cells,MSCs)的体外分离纯化、培养扩增方法的改进,为MSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础方法:抽取人骨髓细胞,采用密度梯度离心结合贴壁培养法进行分离纯化,并传代扩增,测定生长曲线和贴壁率,形态学观察,流式细胞仪检测其表面抗原表达。结果:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化人骨髓MSCs,MSCs在含胎牛血清的L—DMEM培养液中生长性状相对稳定,细胞基本呈成纤维细胞样生长,1、3、5代细胞生长曲线、贴壁率基本相同,贴壁存活率高,表达CD29、CD44、CD105、CD166。结论:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化人骨髓MSCs,在含胎牛血清的L-DMFM培养液中,细胞稳定扩增。 相似文献
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目的 培养学生的科研创新能力,构建创新型病理生理学课外实验教学模式.方法 运用创新型五段滚动式培养方法,将课外实验教学分为动员引导、择优选拔、课题申报、课题实施及课题总结5个阶段.结果 自2002年以来,约300名学生参与五段滚动式教学,获得学院学生科研课题立项36项,发表学术科研论文26篇,参与申报专利2项,学生的科技作品在各级竞赛中获奖31项,其中1项获得"挑战杯"全国大学生课外学术科技作品竞赛二等奖.此外,相关指导教师也获得广州医学院学生课外科研活动指导工作奖励20余项.结论 采用创新型五段滚动式培养方法,成功地构建了创新型病理生理学课外实验教学模式,取得了非常显著的成效. 相似文献
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逆转录病毒介导外源基因高效感染大鼠骨髓间充质干细胞 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 通过逆转录病毒系统将小鼠同源盒基因Soxl转移至大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC)。检测外源基因的表达,感染效率及感染时间。方法 常规分子生物学亚克隆技术构建重组逆转录病毒载体,转染至包装细胞株PT67,制备含目的基因的重组逆转录病毒液,感染rMSC,并用带EGFP表达盒的pLEGFP-N1载体的逆转录病毒系统作为平行对照,评估感染率;使用Westernblot以及免疫组织化学的方法检测携带目的基因的重组逆转录病毒在rMSC中的感染和表达情况。结果 本实验成功地制备了pLXSN—Soxl重组逆转录病毒载体并制备出高滴度病毒颗粒;将病毒上清感染rMSC,EGFP阳性细胞为21%,感染时间持续20d,而对照脂质体转染法EGFP阳性细胞仅为3%。免疫组化及Westernblot显示用重组逆转录病毒液感染的rMSC可表达外源基因产物Soxl蛋白。结论 采用逆转录病毒介导的方法可以将外源性基因高效转移至rMSC中,并有外源性基因的稳定表达。 相似文献
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目的 初步探讨小鼠骨髓间充质干细胞在体内向造血细胞分化的潜能。方法 利用转LacZ基因小鼠MSCs输注X射线亚致死量照射的BALB/C小鼠,2个月后取骨髓细胞作体外甲基纤维素培养和X-Gal染色,取肝脏X-Gal染色。结果 MSCs输注组和对照组骨髓细胞体外集落培养均能形成鹅卵石样造血细胞集落,经X-gal组化染色后,输注组部分造血集落产生蓝绿色,对照组没有颜色变化。肝脏X-Gal染色输注组部分产生蓝色,对照组没有颜色变化。结论 小鼠MSCs具有向造血细胞分化的潜能。 相似文献
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目的: 研究发病前细菌感染对过敏性哮喘发病的影响。 方法: 用豚鼠作动物模型,观察金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、肺炎双球菌等4种呼吸道常见细菌感染之后哮喘发作时肺泡灌洗液中的白细胞总数、酸性粒细胞总数和百分比以及肺部的病理变化。 结果: 各细菌感染组肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数均明显低于对照组,金黄色葡萄球菌组和大肠杆菌组酸性粒细胞总数和百分比明显降低,病理结果表明各细菌感染组的病变程度都要明显轻于对照组。 结论: 部分细菌感染后能够抑制哮喘的发作。 相似文献
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目的 探讨桑根酮C诱导雄激素非依赖型前列腺癌PC3细胞凋亡的作用及其可能机制.方法 MTT法检测桑根酮C对PC3细胞增殖的抑制作用:实验分6组,分别加入不同浓度的桑根酮C(0、1、5、20、50、100 μmol/L),作用24h检测细胞生长抑制率;20 μmol/L桑根酮C加入PC3细胞,分别于0、6、12、24、48h收集细胞,MTT法检测生长抑制率.流式细胞技术检测细胞凋亡率:20 μmol/L桑根酮C加入PC3细胞,分别于0、12、24、48 h收集细胞检测凋亡率.荧光分光光度计检测caspase 3的活性:20 μmol/L桑根酮C作用PC3细胞,分别在0、6、12、18、24、48 h收集细胞,检测caspases 3的活性.MTT法检测caspase 3、caspase 8及caspase 9抑制剂对桑根酮C抑制PC3细胞增殖的影响:实验分4组,分别加入DMSO、z-DEVD-fmk、z-LEHD-fmk及z-IETD-fmk,1h加入桑根酮C,24h收集细胞,MTT法计算细胞生长抑制率.结果 桑根酮C能抑制PC3细胞的增殖,呈剂量、时间依赖性,桑根酮C1、5、20、50、100 μmol/L作用PC3细胞24 h的增值抑制率分别为:4.86%、12.92%、52.34%、82.05%、87.45%,1mol/L组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),其他组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).半数有效抑制浓度IC50为18.76 μmol/L.20 μmol/L桑根酮C作用PC3细胞,分别在6、12、24、48、72 h检测增值抑制率为:10.57%、27.09%、51.88%、80.73%、87.99%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).20 μmol/L桑根酮C可诱导PC3细胞的凋亡,在12、24、48 h的凋亡率分别为:7.43%、20.91%、37.56%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).检测caspases 3的活性18h比对照组增加了7.6倍,应用caspase抑制剂后发现caspase 3及caspase 9的抑制剂可显著逆转桑根酮C对PC3细胞增殖的抑制作用,抑制率从52.48%降到24.29%及28.81%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).而caspase8抑制剂作用不明显,与对照组相比差异没有统计学意义(P>0.05).结论 桑根酮C可通过激活caspase 3及caspase 9途径诱导PC3细胞的凋亡. 相似文献