BrdU标记小鼠视网膜祖细胞的研究

为了探讨BrdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)体外标记视网膜祖细胞(RPCs)的适宜浓度,将不同浓度BrdU(0.2、1、5和10μmol/L)与小鼠孕龄(E)17.5dRPCs共培养48h后,进行增殖或分化培养。用免疫荧光检测BrdU标记百分率及细胞分化潜能,用细胞计数法检测其增殖能力,用乳酸脱氢酶(LDH)法检测其细胞毒性。结果发现,0.2μmol/L BrdU不能明显标记RPCs,而1、5和10μmol/L 3种浓度BrdU均可有效标记RPCs,且三者的标记率相近(P>0.05),1μmol/L BrdU无明显细胞毒性,对RPCs增殖、分化亦无明显影响,而5μmol/L和10μmol/L Br-dU均能抑制细胞增殖,并引起LDH释放增加,说明有明显的细胞毒性,10μmol/L BrdU还会阻碍RPCs向MAP2+神经元方向分化,但对其向GFAP+或glutamine synthetase+神经胶质细胞分化无明显影响。本研究表明,1μmol/L BrdU既能有效标记E17.5RPCs,又无显著毒副作用,是较适宜的浓度。     

双眼颗粒状角膜营养不良合并Fuchs角膜内皮营养不良一例

患者，女，69岁，中国汉族人。因“双眼干涩伴视物模糊1个月”于2016年7月21日就诊于温州医科大学附属第二医院眼科。既往否认糖尿病、高血压、风湿病等病史，否认家族遗传病史和药物过敏史。入院常规检查未见明显异常。眼科常规检查：最佳矫正视力（BCVA）右眼0.30，左眼0.25；非接触眼压计测量（Noncontact tonometer，NCT）：右眼14.5 mmHg（1 mmHg= 0.133 kPa），左眼15.6 mmHg；双眼结膜无充血，双眼角膜中央可见浅基质层多发的圆形面包屑样混浊（见图1A、1D）；裂隙灯显微镜下后弹力层可见散在局限性增厚，滴状赘疣物可见（见图1B、1E），未见角膜水肿；前房深，晶状体轻度皮质性混浊，双眼眼底视盘边界清，C/D=0.3，黄斑反光存在。角膜内皮镜检查：右眼中央角膜内皮细胞数2 550 个/mm2，变异系数为32%，厚度为565 μm，左眼中央角膜内皮细胞数2 457 个/mm2，变异系数为38%，厚度为558 μm，双眼部分角膜内皮细胞增大呈多形性改变，可见病理性暗区（见图1C、1F）。诊断：双眼颗粒状角膜营养不良，双眼Fuchs角膜内皮营养不良，双眼老年性白内障。考虑到该病为染色体异常疾病，建议患者进行基因测序明确突变基因，患者因经济原因，拒绝检查。考虑到目前尚无有效治疗方法，且患者自觉目前视力状况下生活无障碍，拒绝进一步治疗。向患者说明情况，建议门诊随访观察，予以角膜营养滋润药物和抗白内障药物，门诊定期随访，必要时行角膜移植手术联合或不联合白内障摘除+人工晶状体植入术。     

Y27632体外诱导视网膜色素上皮细胞转分化为神经元样细胞的初步研究

Objective To investigate the feasibility of Y27632 to induce transdifferentiation from human retinal pigment epithelial(hRPE)cells into neuron-like cells in vitro.Methods The third to sixth generation of primary hRPE cells were cultured with 2% fetal bovine serum+Dulbecco's modified eagle medium/F12 culture solution,with(experimental group)or without(control group)10 μmol/L Y27632.At 3,6 hours and 1,3,5,7 days after induction,the morphologic changes of RPE cells were observed by inverted microscope.The expression rate of CK18,Map2,NF200 and Pax6 at 3 days after induction in the experimental and control group were detected by immunofluorescent staining.χ2 test was employed for comparison between the two groups.Results 50.1% cells of the experimental group formed axon-like processes and interconnected each other with typical neuron-like appearance.The expression rates of CK18,Map2,NF200 and Pax6 in the experimental group were 43.88% ,31.90% ,57.45% and 65.79% .while the above indexes in the control group were 93.97% ,4.49% ,22.37% and 8.33% respectively.Compared the expression rate of CK18(χ2=64.763),Map2(χ2=23.634),NF200(χ2=21.261)and Pax6(χ2=25.946)between the two groups,the differences were significant(P＜0.01).Conclusion The hRPE cells can be trans-differentiated into neuron-like cells in vitro bv Y27632.     

大气颗粒物PM2.5附着于角膜接触镜及其对角膜接触镜透氧性及折射率的影响

目的 观察大气颗粒物PM2.5在角膜接触镜的附着情况及其对角膜接触镜透氧性和折射率的影响.方法 采集大气颗粒物PM2.5,配制浓度为l mg · mL-1的PM2.5混悬液,取硬性透气性角膜接触镜(rigid gas permeable contact lens,RGPCL)和软性角膜接触镜(soft contact lens,SCL)各18只,分为对照组、实验组和洗脱组,每组6只.实验组和洗脱组角膜接触镜浸入PM2.5混悬液中,室温振荡24 h.洗脱组经上述处理后转入无菌PBS中,室温振荡1h.对照组镜片浸入无菌PBS中,室温振荡24 h.利用场发射扫描电子显微镜下观察PM2.5在各组角膜接触镜表面的附着情况.检测各组角膜接触镜的透氧性和折射率,记录结果,并进行统计分析.结果 经过PM2.5混悬液浸泡后,实验组RGPCL表面发现存在较多PM2.5附着,呈散在分布.实验组RGPCL表面大气颗粒物计数为每100 μm2(3.19±1.64)个.对照组电镜扫描未发现大气颗粒物沉着.经洗脱后,洗脱组RGPCL表面仍可见大量大气颗粒物附着,每100μm2(5.12±1.27)个.洗脱组与实验组差异有统计学意义(P＜0.05).实验组SCL表面,大气颗粒物集中附着在SCL水凝胶孔隙边缘,而在孔隙中未见大气颗粒物附着,大气颗粒物细小,均匀;实验组SCL表面大气颗粒物计数为每100μm2(2.16±1.19)个.对照组SCL表面无大气颗粒物附着.经洗脱后,洗脱组SCL表面大气颗粒物计数为每100 μm2(0.56±0.39)个,洗脱组与实验组差异有统计学意义(P＜0.05).对实验组RGPCL和SCL表面大气颗粒物附着数进行比较,RGPCL表面大气颗粒物附着数较多,差异有统计学意义(P＜0.05).经过PM2.5混悬液浸泡后,实验组RG-PCL的透氧性(100.00±3.17)与对照组(100.00±2.36)比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验组SCL透氧性(42.00±2.57)与对照组(41.00±3.44)比较差异亦无统计学意义(P＞0.05).经过PM25混悬液浸泡24 h后,实验组RGPCL的折射率(1.415 6±0.000 4)与对照组(1.415 3±0.000 4)比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验组SCL折射率(1.373 7±0.000 7)与对照组(1.373 2±0.000 1)比较差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论 与SCL相比,PM2.5更易附着在RGPCL表面,且不易洗脱.在本研究条件下,PM2.5虽然附着于角膜接触镜,但短时间内并未对角膜接触镜的透氧性及折射率产生影响.     

强光照致TgAPPswePS1转基因鼠视网膜功能障碍和结构损伤

目的 初步研究在光照损伤作用下TgAPPswePS1转基因鼠视网膜结构和功能的改变情况.方法 给予6月龄阿尔茨海默病转基因鼠(TgAPPswePS1鼠)10 000 lux光照处理,每天光照12 h,连续光照6个月,光照处理为实验组,设鼠龄匹配的转基因鼠为对照组,在光照6个月后(即小鼠12个月时)对实验组与对照组小鼠进行视网膜电图检测,取材并进行切片,行HE染色并观察视网膜各层结构改变,予以视网膜厚度测量并进行统计学分析.结果 对照组Rod反应a、b波波幅分别为(18.33±3.53) μV、(107.58±14.72)μV,Max反应a、b波波幅分别为(64.80±7.57)μV、(178.76±14.47) μV;实验组光照6个月后小鼠视网膜电图Rod反应a、b波波幅分别为(17.92±4.89) μV、(21.83±5.51) μV,Max反应的a、b波波幅分别为(18.23±4.44) μV、(24.50±4.49) μV;与对照组比较,Rod反应的b波和Max反应的a、b波的波幅下降明显,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);在Rod和Max反应里a波和b波的潜伏期改变不明显.与对照组比较,经过光照处理后,实验组小鼠视网膜结构发生明显改变,以外核层与感光细胞外节明显,视网膜厚度明显变薄,为(102.34±9.38) μm,与对照组(181.32±13.47) μm比较差异有统计学意义(P=0.017).结论 高强度光照可以造成TgAPPswePS1鼠视网膜结构损伤和功能障碍.     

糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗非感染性后巩膜炎的短期疗效

探讨糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗非感染性后巩膜炎的短期疗效。方法：回顾性系列病例研究。收集2012年1月至2017年10月在温州医科大学附属第二医院眼科确诊为非感染性后巩膜炎的患者20例（20眼），治疗前和药物治疗后各时间点进行最佳矫正视力、眼压、眼底检查和辅助检查，应用B型超声分析患者球壁厚度，数据采用重复测量方差分析。结果：治疗前18眼存在眼痛，15眼视力下降，大部分患眼的视力在0.1～0.6之间；13眼存在前部巩膜炎症反应，17眼发生视盘水肿，18眼可见视网膜静脉血管扩张，9眼存在黄斑部脱离隆起，6眼存在渗出性视网膜脱离。治疗2 周后，18 眼疼痛症状明显缓解，7 眼视力得到提高。治疗1 个月后，前段炎症反应基本消退， 10眼视盘水肿和静脉血管扩张改善，黄斑部视网膜脱离均复位，视网膜/脉络膜皱褶明显好转。治疗3个月后，全部患者症状缓解。治疗6个月后，眼底异常改变基本消退；B超检查发现球壁厚度明显减轻，“T”征缓解，治疗前球壁厚度为（3.24±0.78）mm，而在治疗1周、2周，1、3、6个月后球壁厚度平均值分别为（2.82±0.63）mm，（2.01±0.68）mm，（1.86±0.44）mm、（1.68±0.45）mm、（1.43±0.65）mm，与治疗前比较，从第2周开始差异具有统计学意义（t=13.76，P=0.0017）。治疗2周后17例症状缓解，6例患者显效；治疗3个月后，所有患者症状得到缓解，9例显效，5例痊愈。结论：激素联合免疫抑制剂治疗可以有效地治疗后巩膜炎，改善症状，缓解体征，但是需长期治疗以预防复发。球壁厚度改变可以用来随访和评估疗效。     

TgAPPswePS1转基因小鼠角膜上皮组织病理学和超微结构改变

目的　探讨TgAPPswePS1转基因小鼠角膜上皮的病理学和超微结构改变。方法　TgAPPswePS1转基因小鼠分为实验组及对照组,其中实验A组为15~18月龄APPswe（+）和PSEN1dE9（+）的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）转基因鼠15只,实验B组为8月龄APPswe（+）和PSEN1dE9（+）的AD转基因小鼠15只,对照组为8月龄野生型小鼠10只。分别观察各组小鼠角膜上皮细胞的病理学改变、超微结构改变、β淀粉样蛋白（amyloid β-protein,Aβ）的表达情况,并行TUNEL染色检测角膜上皮细胞凋亡情况。结果　实验B组和实验A组角膜上皮厚度分别为（20.104±1.763）μm和（15.456±1.439）μm,均较对照组的（23.567±2.123）μm减少,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。实验B组和实验A组均较对照组角膜上皮细胞数减少,层数减少,细胞形态不规则。透射电子显微镜检测示,实验B组和实验A组均较对照组角膜上皮表面微绒毛明显减少,平坦。实验B组和实验A组角膜上皮铺片Aβ免疫阳性反应产物均较对照组明显增多、增强。TUNEL染色结果示,实验B组角膜上皮细胞凋亡数为（5.631±2.471）个,少于实验A组的（16.329±3.542）个,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　TgAPPswePS1转基因小鼠较野生型小鼠角膜上皮病理学、超微结构及角膜上皮细胞内Aβ的表达均有改变,以上变化与小鼠月龄有相关性。     

Y27632体外诱导视网膜色素上皮细胞转分化为神经元样细胞的初步研究

Objective To investigate the feasibility of Y27632 to induce transdifferentiation from human retinal pigment epithelial(hRPE)cells into neuron-like cells in vitro.Methods The third to sixth generation of primary hRPE cells were cultured with 2% fetal bovine serum+Dulbecco's modified eagle medium/F12 culture solution,with(experimental group)or without(control group)10 μmol/L Y27632.At 3,6 hours and 1,3,5,7 days after induction,the morphologic changes of RPE cells were observed by inverted microscope.The expression rate of CK18,Map2,NF200 and Pax6 at 3 days after induction in the experimental and control group were detected by immunofluorescent staining.χ2 test was employed for comparison between the two groups.Results 50.1% cells of the experimental group formed axon-like processes and interconnected each other with typical neuron-like appearance.The expression rates of CK18,Map2,NF200 and Pax6 in the experimental group were 43.88% ,31.90% ,57.45% and 65.79% .while the above indexes in the control group were 93.97% ,4.49% ,22.37% and 8.33% respectively.Compared the expression rate of CK18(χ2=64.763),Map2(χ2=23.634),NF200(χ2=21.261)and Pax6(χ2=25.946)between the two groups,the differences were significant(P＜0.01).Conclusion The hRPE cells can be trans-differentiated into neuron-like cells in vitro bv Y27632.     

30例非感染性后巩膜炎临床特征分析

目的总结非感染性后巩膜炎的临床特征,以期为临床上准确诊断、合理治疗提供依据。方法回顾性系列病例研究。收集2007年1月至2016年10月在中山大学中山眼科中心和温州医科大学附属第二医院就诊,经各项检查确诊为非感染性后巩膜炎的患者30例（40眼）,年龄（35.2±14.3）岁。所有病例都进行既往史回顾和病史分析,收集入选病例相关临床资料,包括最佳矫正视力（BCVA）、眼压、眼部常规检查和辅助检查等,并进行临床分析。结果10例双眼发病,33眼（83%）以眼痛伴视力下降为主诉就诊。就诊时10眼（25%）视力下降到0.1以下,13眼（32%）视力在0.1~0.6之间,17眼（43%）视力在0.6~1.2之间。眼压为（13.2±4.4）mmHg。在眼前段,22眼（55%）伴发前段巩膜炎,18眼（45%）有前葡萄膜炎症状;在眼后段,22眼（55%）发生视盘水肿,21眼（53%）存在视网膜静脉扩张,13眼（33%）黄斑部隆起脱离。另外发现渗出性视网膜脱离7眼（18%）,黄斑部星芒样渗出3眼（8%）,脉络膜脱离3眼（8%）,视网膜/脉络膜皱褶2眼（5%）,视网膜中央静脉阻塞3眼（8%）。所有患者眼部B超检查发现球壁弥漫性增厚,眼球壁后可见环形低回声,共同形成典型的"T"形征,球壁厚度为（2.21±0.85）mm。结论非感染性后巩膜炎临床表现多样,眼底可以有视盘水肿、静脉扩张、黄斑部渗出、黄斑部脱离隆起等体征,B超检查是后巩膜炎最特异性检查方法,可用于明确诊断。     

Y27632体外诱导视网膜色素上皮细胞转分化为神经元样细胞的初步研究

目的 探讨Y27632在体外诱导成人视网膜色素上皮(RPE)细胞转分化为神经元样细胞的可行性.方法 取生长良好的第3～6代成人RPE接种于6孔培养板,细胞贴壁生长后分为对照组和实验组.对照组培养基为2%胎牛血清(FBS)+Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)/F12培养液,实验组在此培养基中加入10 μmol/L Y27632.于诱导3、6 h和1、3、5、7 d观察细胞形态,并用细胞免疫荧光染色法鉴定诱导后3 d对照组和实验组角蛋白CK18、微管相关蛋白Map2、神经丝蛋白NF200、Pax6的阳性表达率,两组间的比较采用x2检验.结果 实验组经诱导后RPE细胞发出轴突样突起并相互连接成网状,呈现典型的神经元细胞形态,占50.1%.对照组RPE和实验组细胞角蛋白表达阳性率分别为93.97%和43.88%,两组比较差异有统计学意义(x2=64.763,P＜0.01);Map2对照组和实验组阳性率分别为4.49%和31.90%,两组比较差异有统计学意义(x2=23.634,P＜0.01);NF200对照组阳性表达率为22.37%,但阳性表达细胞形态为类圆形,实验组阳性率表达为57.45%,大量细胞发出轴突样突起,两组比较,差异有统计学意义(x2=21.261,P＜0.01);Pax6对照组和实验组细胞阳性率分别为8.33%和65.79%,两组比较,差异有统计学意义(x2=25.946,P＜0.01).结论 Y27632体外诱导成人RPE细胞出现神经元样细胞,是一种可行的诱导方法.

Abstract：

Objective To investigate the feasibility of Y27632 to induce transdifferentiation from human retinal pigment epithelial(hRPE)cells into neuron-like cells in vitro.Methods The third to sixth generation of primary hRPE cells were cultured with 2% fetal bovine serum+Dulbecco's modified eagle medium/F12 culture solution,with(experimental group)or without(control group)10 μmol/L Y27632.At 3,6 hours and 1,3,5,7 days after induction,the morphologic changes of RPE cells were observed by inverted microscope.The expression rate of CK18,Map2,NF200 and Pax6 at 3 days after induction in the experimental and control group were detected by immunofluorescent staining.χ2 test was employed for comparison between the two groups.Results 50.1% cells of the experimental group formed axon-like processes and interconnected each other with typical neuron-like appearance.The expression rates of CK18,Map2,NF200 and Pax6 in the experimental group were 43.88% ,31.90% ,57.45% and 65.79% .while the above indexes in the control group were 93.97% ,4.49% ,22.37% and 8.33% respectively.Compared the expression rate of CK18(χ2=64.763),Map2(χ2=23.634),NF200(χ2=21.261)and Pax6(χ2=25.946)between the two groups,the differences were significant(P＜0.01).Conclusion The hRPE cells can be trans-differentiated into neuron-like cells in vitro bv Y27632.