CCK-8对LPS诱导大鼠TASMCsCuZn—SOD基因表达影响的受体机制

目的 探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(TASMCs) CuZn-SOD基因表达影响的受体机制.方法 用贴块法培养大鼠TASMCs,经CCK-8、LPS、CR-1409、CR-2945、CCK+LPS、CR-1409+LPS、CR-2945+LPS、CR-1409+CCK-8+LPS、CR-2945+CCK-8+LPS及溶剂单独或共同孵育细胞,用RT-PCR技术检测CuZn-SOD mRNA表达.结果 对照组TASMCs CuZn-SOD mRNA低水平表达,LPS 诱导TASMCs CuZn-SOD mRNA表达上调(P<0.05),CCK-8预处理后,LPS对TASMCs CuZn-SOD mRNA表达的诱导作用可部分受抑,预先用CR-1409(1×10-5 mol/L)、CR-2945(1×10-5 mol/L)处理后,再分别加入LPS和CCK-8,CR-1409+CCK-8+LPS、CR-2945+CCK-8+LPS两组CuZn- SOD mRNA表达均高于CCK-8+LPS组(P<0.01),但仍低于LPS 组(P<0.05),其中CR-2945的拮抗作用比CR-1409稍明显; CR-1409、2945单独作用与对照组相比差异无显著性(P>0.05).结论 CCK-8通过其受体下调LPS 对TASMCs CuZn-SOD基因表达的诱导作用,其中CCK-BR较CCK-AR作用稍大.     

GDNF 通过 AKT/β-catenin 调节人胶质瘤细胞增殖的研究

目的：研究胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)促进人胶质瘤细胞增殖的机制。方法将胶质瘤样本分为低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组,脑挫裂伤患者样本作为正常对照组,每组各12例;将胶质瘤细胞系 C6细胞分为细胞对照组、牛血清蛋白(BSA)组和 GDNF 组。CCK-8实验检测细胞增殖率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组 AKT、p-AKT、β-catenin 和p-β-catenin 的表达。结果与正常对照组相比,胶质瘤组 AKT、p-AKT、β-catenin 和 p-β-catenin 的蛋白水平显著增加(P <0.05),且高级别胶质瘤组的蛋白水平明显高于低级别胶质瘤组(P <0.05)。CCK-8检测 C6胶质瘤细胞实验中,与细胞对照组相比, GDNF 组细胞增殖率明显增高(P <0.05),Akt 表达水平没有明显变化,而 p-Akt、β-catenin 和 p-β-catenin 的蛋白表达均显著增加(P <0.05)。结论GDNF 可能通过上调胶质瘤细胞 p-AKT、β-catenin 和 p-β-catenin 来促进胶质瘤细胞的增殖。     

Survivin在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨Survivin在卵巢癌中的表达及其临床意义。方法运用免疫组织化学SP法检测9例正常卵巢、17例卵巢交界性肿瘤以及26例卵巢癌组织中Survivin的表达情况。结果正常卵巢组织中无Survivin表达,卵巢交界性肿瘤、卵巢癌组织中Survivin表达阳性率分别为52．9％和80．8％,组间比较有统计学差异（P〈0．01）;卵巢癌组织中Survivin表达与临床分期、组织学分级及淋巴转移有关（P均〈0．01）。结论Survivin与卵巢癌的发生、发展有关。     

CCK-8对LPS诱导大鼠血管平滑肌细胞SOD基因表达及NF-κB活性增高的影响

目的: 观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(TASMCs)SOD基因表达的影响,初步探讨NF-κB的信号介导作用. 方法: 用贴块法培养大鼠TASMCs,经LPS, CCK-8, CCK LPS及溶剂单独或共同孵育细胞,用RT-PCR技术检测Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA表达;用免疫细胞化学检测细胞NF-κB P65蛋白表达;用Western blot检测IκBα蛋白表达. 结果: 溶剂组存在Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA基础表达;与溶剂组相比,LPS诱导TASMCs Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA表达上调、胞核P65蛋白表达上调(P＜0.05),而胞质IκBα蛋白水降低平(P＜0.05);CCK-8可剂量依赖性地抑制拮抗LPS的上述作用(P＜0.05);CCK-8单独作用可明显抑制Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA的基础表达(P＜0.05), 而对NF-κB P65, IκBα蛋白无明显影响. 结论: CCK-8可抑制LPS诱导TASMCs Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA的表达,NF-κB起介导作用.     

缺血早期Genistein对海马CA1区神经元保护作用机制的研究

目的 探讨缺血早期Genistein对脑缺血/再灌注后大鼠海马CA1区神经元的保护作用及其可能的机制.方法 采用四动脉结扎建立大鼠全脑缺血模型.实验动物随机分为假手术组、缺血/再灌注组、溶剂对照组、Genistein处理组.缺血5 min时,溶剂对照组、Genistein处理组分别尾静脉注射二甲基亚砜（l ml/kg）和Genistein（1 mg/kg）.Western blot和免疫荧光法检测大鼠海马CA1区HAX-1蛋白的表达,焦油紫染色法观察海马CA1区神经元的存活情况.结果 与对照组比较,Genistein处理组在再灌注3h时HAX-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,免疫荧光实验结果与此一致.焦油紫染色结果显示,Genistein处理组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加（P＜0.05）.结论 缺血早期Genistein对脑缺血造成的神经元损伤有明显的保护作用,这一作用可能是通过增加HAX-1蛋白表达水平来实现的.     

脑缺血再灌注损伤后大鼠脑皮质TNF-α及其mRNA的时程变化

为了观察大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质TNF-α及其mRNA表达的时程变化,本实验采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用免疫组化染色法检测不同再灌注时间大脑皮质TNF-α的蛋白表达水平,以及用逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)检测脑皮质内TNF-αmRNA的表达情况。结果显示:脑缺血1h,再灌注12h后大脑皮质内TNF-α及其mR-NA的表达开始升高,24h后达到高峰,随后逐渐下降。两组大脑皮质TNF-α及其mRNA的表达水平差异有统计学意义(P<0.01),模型组的TNF-α及其mRNA的表达水平明显高于假手术组。本研究结果表明,TNF-α在大鼠脑缺血再灌注损伤的调节过程中发挥重要作用。     

圆二色谱法测定饥饿细胞DNA结合蛋白的突变热点

目的通过引入人为突变,研究DPS分子的稳定性与其一级结构的关系,寻找新型DPS分子。方法选择可能与DPS构象密切相关的氨基酸残基引入突变,经表达、纯化后,利用圆二色谱仪检测突变体蛋白分子的结构变化。结果关键部位氨基酸的突变可以引起DPS分子中α螺旋含量发生了显著的变化。结论某些氨基酸的改变会引起DPS分子整体结构与稳定性的变化,有可能影响、甚至改变蛋白质分子的功能。     

术前化疗对胃癌细胞凋亡的影响

目的:为探讨术前化疗对胃癌细胞凋亡的影响情况,给胃癌手术提供合理的治疗方案.方法:检测21例胃癌患者化疗前后胃癌细胞的p53、bcl-2和CD95的平均光密度值以及细胞的凋亡指数,并对结果进行比较.结果:化疗前后胃癌细胞的p53、bcl-2和cD95的平均光密度值比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中bcl-2低于化疗前,而p53和CD95高于化疗前.化疗后胃癌细胞的凋亡指数明显高于化疗前(P<0.05).结论:术前化疗能够抑制胃癌细胞bcl-2的表达,增强p53和cD95的表达,促进胃癌细胞的凋亡,对于改善胃癌根治术的效果有一定的意义.     

CCK-8调节LPS诱导大鼠血管平滑肌细胞iNOS表达的分子机制

目的观察硫酸化八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(TASMCs) iNOS表达的影响,探讨CCK的受体介导效应,以揭示CCK-8抗休克作用的分子机制。方法采用贴块法培养大鼠TASMCs,经LPs、CCK-8、CR-1409、CR-2945、CCK LPS、CCK LPs CR-1409、CCK LPS CR-2945及溶剂孵育细胞16 h,RT-PCR技术检测细胞浆iNOs mRNA的表达；Western blot技术检测胞浆iNOS蛋白表达,以光密度值表示其相对含量。结果LPS(0．1mg/L)可诱导TASMCs iNOS mRNA及蛋白的表达上调(P＜0．01)；而CCK-8(10~(-8)mol/L)可抑制LPS的诱导作用(P＜0．01)；预先给子CCK-AR特异性拮抗药CR-1409(10~(-5)mol/L)、CCK-BR特异性拮抗药CR-2945(10~(-5) mol/L),均可部分拮抗CCK-8的这种抑制作用,其中CR-1409的拮抗作用略高于CR-2945：CCK-8、CR-1409、CR- 2945单独作用与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)。结论CCK-8受体介导了其对LPS诱导的胸主动脉平滑肌细胞iNOs的表达的抑制,且CCK-AR的作用略高于CCK-BR,此为CCK-8抗内毒素休克作用的受体机制。