炎症性肠病的基础研究与临床应用

炎症性肠病（IBD）包括溃疡性结肠炎（UC）和克罗思病（CD）,是一类病因和发病机制尚不十分清楚的肠道炎症性疾病。现存普遍认为IBD发病机制涉及遗传易感性、环境因素、免疫异常、肠道菌群改变等多个方面,确切病因尚未完全阐明。近年来,随着IBD发病率的逐年上升,人们在探索其发病机制和防治方面展开了大量的基础研究工作,并取得了一定的进展,但日前IBD发病机制仍未明了。     

炎症性肠病相关基因逆转录病毒表达载体的构建

目的构建炎症性肠病相关基因（major histocompatibility complex class I chain-related gene A,MICA）逆转录病毒表达载体pCLXSN-MICA，为进一步研究MICA基因的功能奠定基础。方法根据MICA基因的核苷酸序列，设计并合成引物，通过RT-PCR方法．从含有MICA基因的He1a细胞中，扩增该基因外显子片段，与逆转录病毒表达载体pCLXSN连接，构建MICA基因的逆转录表达载体，并进行鉴定。结果构建的新质粒经PCR、酶切鉴定和DNA测序，证实新质粒构建成功。结论重组MICA逆转录病毒表达载体的构建为进一步研究MICA在炎症性肠病等自身免疫性疾病的作用奠定了基础。     

金银花提取液通过调控NLRP3/ASC/caspase-1信号通路对溃疡性结肠炎大鼠肠道黏膜的影响

目的：探讨金银花提取液通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白（ASC）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)信号通路对溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠道黏膜的影响。方法：随机选取10只大鼠为对照组,另取55只大鼠在肛门约8 cm结肠处注射含5%TNBS和50%乙醇的混合液（4 ml/kg）构建大鼠UC模型,将造模成功的50只大鼠分为UC组、金银花低、中、高剂量组和金银花+NSS(NLRP3激活剂)组,每组10只。金银花低、中、高剂量组分别灌胃给予40、80、120 mg/（kg·d）金银花提取液,金银花+NSS组灌胃给予120 mg/（kg·d）金银花提取液和4 mg/（kg·d）NSS,对照组、UC组灌胃给予等体积生理盐水。观察大鼠一般情况,末次给药24 h后腹主动脉取血,处死大鼠,收集结肠组织,量取结肠长度。试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、TNF-α、IL-6水平;HE染色检测大鼠结肠黏膜病理学变化;RT-PCR和Western blot检测大鼠肠道黏膜NL...     

炎症性肠病与肠粘膜免疫

炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s disease,CD）,是一组反复发作的非特异性的慢性肠道炎症性疾病,其病因尚未完全阐明。近年来,肠道共生菌与肠上皮屏障之间的关系及其驱动的肠粘膜免疫失衡的研究已取得很大的进展,对揭示IBD的病因和发病机制无疑有所裨益。     

CTLA-4基因多态性调节溃疡性结肠炎患者CTLA-4 mRNA稳定性和蛋白水平

目的 研究细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T-lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4)基因3'非转录区(AT)n重复序列多态性对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者CTLA-4mRNA稳定性和基因表达的影响.方法 采用实时定量PCR方法检测膜型CTLA-4(full length CTLA-4,flCTLA-4)和可溶性CTLA-4(soluble CTLA-4,sCTLA-4)mRNA表达,半衰期法分析其mRNA稳定性.免疫组化检测flCTLA-4蛋白表达.酶联免疫吸附实验测定sCTLA-4蛋白水平.荧光PCR-毛细管电泳技术检测300例UC患者和700名健康对照者CTLA-4基因(AT)n重复序列多态性.结果 活动期UC患者肠黏膜sCTLA-4 mRNA的表达显著低于缓解期UC患者(P=0.004).在UC患者中,(AT)n重复序列长等位基因携带者表达低水平的flCTLA-4和sCTLA-4 mRNA以及sCTLA-4蛋白(均P＜0.01).携带长等位基因的UC患者CTLA-4 mRNA的稳定性明显降低.UC患者CTLA-4基因(AT)n重复序列长等位基因携带者(≥116 bp)频率显著高于正常对照组(P＜0.01),且与广泛型结肠炎相关(P=0.008).结论 UC患者CTLA-4基因(AT)n重复序列多态性与CTLA-4基因表达水平相关,携带(AT)n重复序列长等位基因的UC患者CTLA-4 mRNA及蛋白的表达降低,提示CTLA-4基因在UC遗传免疫发病机制中起重要作用.     

主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因在肠组织中的表达及与溃疡性结肠炎的关系

目的 探讨主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因(MIC)在溃疡性结肠炎(UC)发病中所起的作用.方法 采用荧光定量实时-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测34例UC患者和17例正常人肠黏膜组织中MICA和MICB及其受体NKG2D mRNA表达水平的差异.采用激光共聚焦显微镜观察肠黏膜组织中MICA分子的表达定位.结果 UC组MICA、MICB及NKG2DmRNA水平的表达量(分别为3.5408±2.6658、8.9879±3.2893和2.4395±0.8147)均显著高于正常对照组(分别为1.0477±0.7201、4.6293±1.2616和1.1624±0.3954,P值分别=0.0053、0.0039和0.0078).免疫荧光共聚焦显微镜观察显示,MICA分子在肠上皮细胞胞膜中表达.结论 UC患者肠黏膜组织中MICA、MICB及其受体NKG2D的mRNA表达水平均增高,提示MIC基.因在UC局部起重要作用.