平榛主要过敏原Cor h 1的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

目的 克隆、表达榛(平榛)主要变应原基因Cor h 1,检测其免疫学活性.方法 提取平榛的总RNA,设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR方法 扩增目的基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析.采用RT-PCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行表达.通过Ni2+亲和层析,对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western-blot)方法 检测其lgE结合活性.结果 克隆获得了平榛的主要过敏原Cor h 1的基因,该基因被GenBank收录,登陆号为EU195058.基因开放阅读框为486个碱基(包括终止密码子),编码161个氨基酸.该序列编码的蛋白等电点为6.16,相对分子质量约为17 600.结论 成功地克隆和表达了平榛主要变应原Car h 1,蛋白具有良好的免疫原性.