人羊膜匀浆上清液对大鼠角朊细胞生长的影响

目的观察不同浓度人羊膜匀浆上清液(hAHS)对体外培养的SD大鼠角朊细胞生长的影响。 方法取SD大鼠背部皮肤,采用中性蛋白酶与胰蛋白酶复合消化的方法,分离第一代角朊细胞。将新鲜人羊膜制备成hAHS,采用考马斯亮蓝法、酶联免疫吸附试验分别测定hAHS中总蛋白含量和表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。用不同浓度hAHS对第一代角朊细胞进行体外培养：将细胞以2.5×10⁴个/mL密度接种于96孔板中(每孔100 μL),随机数字表法将其分为体积分数0(对照组)及10%、15%、20%、25% hAHS组,用含10%胎牛血清低糖培养基培养24 h后,根据hAHS在低糖DMEM培养基中的不同体积分数进行换液,分别于培养即刻和培养24、48、96 h,用噻唑兰法检测各孔的吸光度值并绘制角朊细胞的生长曲线和计算各组细胞增殖率。采用SPSS13.0统计软件进行分析,各不同体积分数hAHS组的数据与对照组比较采用Dunnett－t检验。 结果hAHS中总蛋白含量为(675.435±9.215)×10^－3 g/L,EGF、bFGF和VEGF的浓度分别为(470.625±2.546)×10^－6、(4.121±0.026)×10^－6和(0.172±0.002)×10^－6 g/L。与对照组比较,10% hAHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率明显高于对照组,差异均有显著性统计学意义(t＝4.644、9.694,P值均小于0.01),15% hAHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率均明显高于对照组,差异均有显著性统计学意义(t＝4.766、6.648,P值均小于0.01);20% hAHS组培养24 h角朊细胞增殖率高于对照组,差异有统计学意义(t＝2.272,P<0.05),培养48、96 h增殖率均明显高于对照组,差异有显著性统计学意义(t＝5.027、8.861,P值均小于0.01);25% hAHS组培养48 h增殖率低于对照组,差异有统计学意义(t＝2.188,P<0.05),培养96 h增殖率明显低于对照组,差异有显著性统计学意义(t＝5.147,P<0.01)。 结论体积分数10%、15%、20% hAHS对体外培养的角朊细胞增殖有明显促进作用,且促增殖的效果随hAHS体积分数的增加而增强,但hAHS的体积分数在25%时角朊细胞的增殖受到抑制,平稳期相对缩短。     

不同层级重度蒸汽吸入性损伤动物模型的建立

目的建立严重、危重与极危重3个层级重度蒸汽吸入性损伤兔模型。方法随机将136只新西兰大白兔分为假伤组(n=34)与致伤组(n=102)。致伤组按蒸汽吸入致伤时间分为0.25、0.50、1.00 s组(均n=34),0.25、0.50、1.00 s组兔用自动控时调压烫伤仪[11-12]控制蒸汽压力0.02 MPa/cm2、温度105℃条件下通过气管切开处分别致伤,假伤组兔除不予吸入蒸汽致伤外其它处理同致伤组。0.25、0.50、1.00 s组与假伤组于伤后1、4、12、24 h各取兔6只检测或观察动脉血氧分压(Pa O2)与二氧化碳分压(Pa CO2)、肺组织病理、肺组织含水率变化,各组另取10只兔观察伤后6、12、24 h死亡率。结果 1.00 s组伤后1 h即出现明显的肺充血水肿和出血、缺氧以及炎症细胞浸润状况并逐渐加重,伤后6 h兔死亡率达100%。0.50 s组伤后1 h也出现肺充血水肿和出血、缺氧,至伤后4 h加重并出现炎症细胞浸润,伤后1、4 h的Pa O2较1.00 s组高,差异有统计学意义(P<0.05),0.50 s组兔伤后12、24 h死亡率分别为25%、75%。0.25 s组在伤后4 h出现肺充血水肿、缺氧,伤后12 h肺充血水肿加重并出现出血、炎症细胞浸润,伤后4、12、24 h Pa O2均小于60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa),较0.50 s组同时相点高,差异有统计学意义(P<0.05),较假伤组同时相点低,差异均有显著性统计学意义(P<0.01),0.25 s组伤后24 h兔死亡率为25%。结论在蒸汽压力为0.02 MPa/cm2,温度105℃条件下,致伤时间1.00、0.50、0.25 s可分别造成兔极危重、危重和严重吸入性损伤。     

林蛙油对D-半乳糖致衰老模型小鼠的保护作用

目的 研究林蛙油对D-gal诱导的衰老小鼠大脑学习记忆及抗衰老的作用.方法 小鼠颈背部皮下注射D-gal(120 mg/kg)建立衰老模型,同时以林蛙油(0.05,0.2,0.8g/kg)作为抗衰老实验药物灌服.60 d后.与衰老小鼠比较在行为、记忆上的差异和脑组织内的丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、Na+-K+-ATPase活性的差异.结果 在水迷宫和跳台实验中林蛙油的学习记忆能力明显长于模型组(P<0.05);D-gal致小鼠的空间认知功能损伤严重,林蛙油组SOD、GSH-Px以及Na+-K+-TPase酶活性高于模型组,而MDA含量低于模型组(P<0.05).结论 林蛙油能显著提高衰老模型小鼠学习记忆能力及脑组织中SOD含量、GSH-Px及其Na+-K+-TPase酶活性,并从分子水平揭示了林蛙油抗衰老的作用机制.     

不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景：许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。 目的：观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞(RSC96)生长的影响。 方法：使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数(0,10,15,20,25%)分组。 结果与结论：人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为(470.625±2.546),(4.121±0.026)和(0.172±0.002) ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组(P < 0.05);10%、15%人羊膜匀浆上清液组显示出促进细胞增殖的作用,而20%、25%人羊膜匀浆上清液组显示出抑制细胞增殖的作用;各实验组的细胞活力与对照组接近(P > 0.05)。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时(10%和15%)具有促进RSC96增殖作用,高浓度时(20%和25%)抑制RSC96增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤的大鼠肺微血管内皮细胞增殖及分泌炎症因子的影响

目的：：探讨人羊膜匀浆上清液(hAHS)对脂多糖(LPS)致伤的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)增殖及其分泌促炎因子的影响。方法：用新鲜人羊膜制备 hAHS,用考马斯亮蓝法和 ELISA 法分别测定 hAHS中总蛋白和表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-4(IL-4)、IL-10、血管生成素-1(Ang-1)、人β-防御素2(HBD2)的含量。MTT 法检测不同体积分数 hAHS(0、10%、15%、20%、25%)作用于 RPMVECs后细胞增殖活性的变化,确定 hAHS 促进 RPMVECs 增殖的最佳浓度。根据共培养条件不同,将 RPMVECs随机分为4组：N组(10%FBS+DMEM/F12),A组(10%FBS+DMEM/F12+15%hAHS),B组(10%FBS+DMEM/F12+LPS)和 C组(10%FBS+DMEM/F12+15%hAHS+LPS)。各组细胞在干预后0、12、24、48、72 h用 MTT法测定吸光度值(A值),并分别于培养6、8、10、12、24 h时用 ELISA法测定RPMVECs培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的含量。结果：hAHS中总蛋白浓度为(725.125±12.625)mg/L,其中 EGF、bFGF、VEGF、IL-4、IL-10、Ang-1、HBD2的浓度分别为(504.785±4.665)、(4.426±0.138)、(0.185±0.006)、(25.650±4.104)、(13.733±2.197)、(15.561±0.496)和(4.763±0.714)ng/L。hAHS 的体积分数在10%~20%时均具有促进 RPMVECs增殖的作用且以15%hAHS培养后第7、9天的增殖率最佳,而25%hAHS在第7、9、11天使 RPMVECs增殖率小于0%hAHS组(P<0.05)。A组48和72 h细胞增殖活性较 N组显著增加,B组24、48和72 h的增殖活性较 N 组显著降低;C组24、48和72h的增殖活性较 B组显著升高(P<0.05)。ELISA结果显示,B组各时间点的IL-6和TNF-α的含量以及8、10、12和24 h的IL-8含量均显著高于N组(P<0.05);C组10和12 h的IL-6含量,8、10、12和24 h的IL-8含量及各时间点的TNF-α含量均显著低于B组(P<0.05)。结论：hAHS含有促进组织修复、调节免疫反应、降低血管通透性及杀伤致病微生物的多种生长因子、细胞因子,对 LPS致伤的 RPMVECs增殖具有促进作用,并减少致伤后炎症因子分泌。     

基于网络的问题探究式组织胚胎学教学模式初探

网络教学是当前教学改革的重点,如何实现网络信息技术与学科课程的整合,是提高教学质量和实现教学改革的关键。本文以组胚教学现状分析为依据,从基于网络的问题探究式组胚教学模式特点、优点等方面进行了简要阐述,旨在为今后组织胚胎学教学提供借鉴。     

不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景：许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。目的：观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞（RSC96）生长的影响。方法：使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数（0,10,15,20,25%）分组。结果与结论：人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为（470.625±2.546）,（4.121±0.026）和（0.172±0.002） ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组（P 0.05）。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时（10%和15%）具有促进RSC96增殖作用,高浓度时（20%和25%）抑制RSC96增殖。